Pelitinib (EKB-569)

Katalog-Nr.S1392 Charge:S139202

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Technische Daten

Formel

C24H23ClFN5O2
Molekulargewicht 467.92 CAS-Nr. 257933-82-7
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 13 mg/mL (27.78 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Pelitinib (EKB-569) ist ein potenter irreversibler EGFR-Inhibitor mit einer IC50 von 38,5 nM. Diese Verbindung hemmt auch leicht Src, MEK/ERK und ErbB2 mit IC50-Werten von 282 nM, 800 nM bzw. 1255 nM. Phase 2.
Ziele
EGFR Src MEK/ERK ErbB2 Raf
38.5 nM 282 nM 800 nM 1.255 μM 3.353 μM
In vitro Pelitinib (EKB-569) zeigt eine wesentlich höhere Hemmaktivität gegen EGFR im Vergleich zum eng verwandten c-erbB-2 sowie zu anderen Kinasen wie Src, Cdk4, c-Met, Raf und MEK/ERK, mit einer IC50 im Bereich von 282 nM für Src bis >20 μM für Cdk4. Übereinstimmend hemmt diese Verbindung die Autophosphorylierung von EGFR, aber nicht von c-Met in A431-Zellen signifikant. Es hemmt potent die Proliferation von normalen menschlichen Keratinozyten (NHEK) sowie von A431- und MDA-468-Tumorzellen mit einer IC50 von 61 nM, 125 nM bzw. 260 nM, während es wenig Aktivität gegen MCF-7-Zellen mit einer IC50 von 3,6 μM zeigt. Diese Chemikalie hemmt die EGF-induzierte Phosphorylierung von EGFR in A431- und NHEK-Zellen mit einer IC50 von 20-80 nM sowie die Phosphorylierung von STAT3 mit einer IC50 von 30-70 nM. Es hemmt bei 75-500 nM auch spezifisch die Aktivierung von AKT und ERK1/2, ohne den NF-κB-Signalweg zu beeinflussen. In NHEK-Zellen hemmt diese Verbindung auch potent die TGF-α-vermittelte EGFR-Aktivierung mit einer IC50 von 56 nM sowie die Aktivierung von STAT3 und ERK1/2 mit einer IC50 von 60 nM bzw. 62 nM.
In vivo Eine einzelne orale Dosis von 10 mg/kg Pelitinib (EKB-569) hemmt potent die EGFR-Phosphorylierung in A431-Xenotransplantaten mit überexprimiertem EGFR um 90% innerhalb von 1 Stunde und um >50% nach 24 Stunden. Die Verabreichung dieser Verbindung in einer Dosis von 20 mg/kg/Tag hemmt die Tumorentstehung in APCMin/+-Mäusen um 87%, was dem Effekt von EKI-785 in 2-facher Dosis (40 mg/kg/Tag) entspricht, was mit einer größeren In-vivo-Potenz übereinstimmt. Diese Chemikalie hemmt selektiv die EGFR-Signalübertragung in Atemwegsepithelzellen in vivo. Im Mausmodell der Atemwegsepithelumbildung, die durch Virusinfektion induzierbar ist und eine verzögerte, aber dauerhafte Umstellung auf Becherzellenmetaplasie aufweist, korrigiert diese Verbindung in einer Dosis von 20 mg/kg/Tag alle 3 Aspekte der Epithelumbildung, indem sie die Zunahme von ziliierten Zellen und die Abnahme von Clara-Zellen vollständig blockiert und die Metaplasie von Becherzellen signifikant hemmt.
Merkmale Eine verbesserte Version von EKI-785.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:

[1]
  • Autophosphorylierung von EGFR in Zellen

    Für Experimente mit Zellen in Kultur werden A431-Zellen 2,75 Stunden lang mit verschiedenen Konzentrationen von Pelitinib (EKB-569) behandelt, bevor sie 0,25 Stunden lang mit 100 ng/mL EGF koinkubiert werden. Die Zellen werden zweimal mit kalter phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) gewaschen, bevor sie in Lysepuffer (10 mM Tris, pH 7,5, 5 mM Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA), 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, 1% Natriumdesoxycholat, 0,1% SDS, 1 mM PMSF, 10 mg/mL Pepstatin A, 10 mg/mL Leupeptin, 20 KIU/mL Aprotinin, 2 mM Natriumorthovanadat und 100 mM Natriumfluorid) für 20 Minuten auf Eis gegeben werden, vor der Immunpräzipitation und SDS-PAGE-Immunblotting. Für die Immunpräzipitation werden kultivierte Zellen in kalten Lysepuffer gegeben und sofort auf Eis mit einem Polytron mit mehreren Impulsen homogenisiert. Das Homogenat wird zuerst bei 2500 U/min (20 Minuten, 4 °C) und dann erneut bei 14.000 U/min in einer Mikrozentrifuge (10 Minuten, 4 °C) zentrifugiert. Überstände (1000 μg Protein) werden 2 Stunden lang bei 4 °C mit 15 mL polyklonalem EGFR-Antikörper inkubiert. Nach 2 Stunden werden 50 μL Protein G plus/Protein A Agarose-Kügelchen hinzugefügt und unter konstanter Rotation 2 Stunden lang bei 4 °C inkubiert. Nach dem Waschen mit Lysepuffer werden die Kügelchen 2 Minuten lang in Laemmli-Probenpuffer gekocht. Proteine werden dann durch SDS-PAGE aufgetrennt, auf eine Immobilon-Membran übertragen und über Nacht mit einem an Meerrettichperoxidase (HRP) konjugierten Anti-Phosphotyrosin-Antikörper inkubiert. Membranen werden mit dem ECL-Reagenz entwickelt. Das Gesamt-EGFR-Protein wird durch Strippen der Membranen und erneutes Inkubieren mit rezeptorspezifischen Antikörpern bestimmt. Die Quantifizierung der Banden erfolgt durch Densitometrie unter Verwendung der ImageQuant-Software mit einem Molecular Dynamics Laser-Transmissionsscanner.
Zell-Assay:

[2]
  • Zelllinien

    NHEK, A431, MCF-7, and MDA-468

  • Konzentrationen

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

  • Inkubationszeit

    5 days

  • Methode

    Cells are seeded in 96-well dishes, and after 2 hours, Pelitinib (EKB-569) is added and incubated for 5 days. After incubation, the medium is removed from each well and fresh medium (150 μL) + 1 mg/mL MTT solution (50 μL) is added. After incubation for 2 hours at 37 °C, the medium is replaced with 150 μL DMSO, and absorbance at 540 nm in each well is determined. The IC50 is calculated by linear regression of the data.
Tierstudie:

[1]
  • Tiermodelle

    Athymic nu/nu female mice bearing subcutaneous A431 tumors, or APCMin/+ male mice, a murine model of human familial adenomatous polyposis (FAP)

  • Dosierungen

    10, or 20 mg/kg/day

  • Verabreichung

    Oral gavage

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10973323/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14749472/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16453019/

Kundenproduktvalidierung

HBMEC were preincubated with the indicated concentrations of either ErB1/2/4 inhibitor (Pelitinib; EKB-569), and cells were then infected for 4 h with the unencapsulated strain, MC58 siaD. The numbers of adherent (black bars) and invasive (gray bars) bacteria were determined in a gentamicin protection assay. The graphs show the percentages of adhesion and invasion of inhibitor-treated cells, relative to control cells (means 盨D of three independent experiments performed in duplicate). *, P < 0.05.

Daten von [ Infect Immun , 2014 , 82(3), 1243-55 ]

<p>IGF-1 and IL-1β mediated induction of Bcl-2 expression involves EGFR.   (A)  Bcl-2 mRNA levels in AALEBs treated with IGF-1 or IL-1β in the presence or absence of two EGFR tyrosine kinase inhibitors, EKB-569 (1 μM) or PD153035 (1 μM). </p>

Daten von [ J Immunol , 2012 , 188, 4581-4589 ]

Immunofluorescence Assay. PDCD4, GRA3, and overlapping are represented in red, green, and yellow, respectively. Group I TKIs sunitinib and AZD9291 show similar results to that of the negative control with PDCD4 and GRA3 well localized inside the nuclei. Mild disruption of PDCD4 in the nuclei is observed with Group II TKIs gefitinib, erlotinib, and AG1478. Group III TKIs neratinib, afatinib, and pelitinib show comparable changes to that of pyrimethamine 5 μM, with complete disruption of PDCD4 and GRA3, without any localization. The assays were repeated 3 times, and each experiment was performed in triplicate. A representative result is shown (x1,000).

Daten von [ , , Korean J Parasitol, 2017, 55(5):491-503 ]

Sellecks Pelitinib (EKB-569) Wurde zitiert von 11 Publikationen

Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
EGFR Inhibition Potentiates FGFR Inhibitor Therapy and Overcomes Resistance in FGFR2 Fusion-Positive Cholangiocarcinoma [ Cancer Discov, 2022, 12(5):1378-1395] PubMed: 35420673
The multi-kinase inhibitor afatinib serves as a novel candidate for the treatment of human uveal melanoma [ Cell Oncol (Dordr), 2022, 45(4):601-619] PubMed: 35781872
Biomarker LEPRE1 induces pelitinib-specific drug responsiveness by regulating ABCG2 expression and tumor transition states in human leukemia and lung cancer [ Sci Rep, 2022, 12(1):2928] PubMed: 35190588
A Genome-Scale CRISPR Screen Identifies the ERBB and mTOR Signalling Networks as Key Determinants of Response to PI3K Inhibition in Pancreatic Cancer [ Mol Cancer Ther, 2020, 5;molcanther.1131.2019] PubMed: 32371585
Mapping phospho-catalytic dependencies of therapy-resistant tumours reveals actionable vulnerabilities. [ Nat Cell Biol, 2019, 21(6):778-790] PubMed: 31160710
Suppressors for Human Epidermal Growth Factor Receptor 2/4 (HER2/4): A New Family of Anti-Toxoplasmic Agents in ARPE-19 Cells [Kim YH Korean J Parasitol, 2017, 55(5):491-503] PubMed: 29103264
Sensitivity of Melanoma Cells to EGFR and FGFR Activation but Not Inhibition is Influenced by Oncogenic BRAF and NRAS Mutations. [Garay T, et al. Pathol Oncol Res, 2015, 10.1007/s12253-015-9916-9] PubMed: 25749811
Selective inhibition of human solute carrier transporters by multikinase inhibitors [Johnston RA, et al. Drug Metab Dispos, 2014, 42(11):1851-7] PubMed: 25165131
Role of epidermal growth factor receptor signaling in the interaction of Neisseria meningitidis with endothelial cells [Slanina H et al. Infect Immun, 2014, 82(3):1243-55] PubMed: 24379285

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