RAF265 (CHIR-265)

Katalog-Nr.S2161 Charge:S216101

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Technische Daten

Formel

C24H16F6N6O
Molekulargewicht 518.41 CAS-Nr. 927880-90-8
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (192.89 mM)
Ethanol 33 mg/mL (63.65 mM)
Water Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung RAF265 (CHIR-265) ist ein potenter selektiver Inhibitor von C-Raf/B-Raf/B-Raf V600E mit einem IC50 von 3-60 nM und zeigt eine potente Hemmung der VEGFR2-Phosphorylierung mit einem EC50 von 30 nM in zellfreien Assays. Diese Verbindung induziert Zellzyklusarrest und Apoptose. Phase 2.
Ziele
VEGFR2
(Cell-free assay)		 B-Raf
(Cell-free assay)
30 nM(EC50) 3 nM-60 nM
In vitro RAF265 (CHIR-265) hemmt C-Raf, Wildtyp B-Raf und mutiertes (V600E) B-Raf. Diese Verbindung blockiert effektiv die Phosphorylierung der nachgeschalteten Substrate von Raf, MEK und ERK, in Zellen und tötet auch Melanom- und Darmkrebszelllinien ab, die B-Raf-Mutationen unabhängig vom PTEN-Mutationsstatus aufweisen. Die Raf-Kinase-Hemmung durch dieses Mittel in mutierten B-Raf-Melanomzelllinien führt zu einem Zellzyklusarrest und induziert Apoptosis, was den Effekt von Raf RNAi in diesen Zellen nachahmt. Es hemmt auch potent die Phosphorylierung von VEGFR2 und die Proliferation von VEGF-stimulierten hMVEC. In HT29- und MDAMB231-Zellen zeigt diese Chemikalie eine hemmende Aktivität mit einer IC20 von 1 bis 3 μM bzw. einer IC50 von 5 bis 10 μM. Während sie zu einem signifikanten Rückgang des klonogenen Überlebens in allen getesteten Zelllinien führt, was bedeutet, dass diese Verbindung einen dominanten Effekt auf das klonogene Überleben induziert. Die Zugabe dieses Mittels zu RAD001 in HCT116-Zellen könnte zu einer moderat verringerten Phosphorylierung von AKT, S6-Protein und 4EBP1 führen. Es reduziert deutlich den Proteingehalt von Bcl-2 und wirkt stark hemmend in CM- und NCI-H727-Zellen, während es keinen Einfluss auf die TRAIL-Empfindlichkeit von BON1- und GOT1-Zellen hat. Proteinkinase D3 (PRKD3), die bei Hemmung die Zellabtötung durch diese Verbindung in A2058-Melanomzellen verstärken könnte, was die Reaktivierung der MAPK-Signalübertragung verhindert, PARP-Spaltung induziert, die Caspase-Aktivität erhöht, die Zellzyklusprogression unterbricht und die Koloniebildung hemmt.
In vivo RAF265 (CHIR-265) zeigt 71 % bis 72 % TVI% (Hemmung des Tumorvolumens) in HCT116-Xenotransplantaten bei 12 mg/kg. Die Kombination dieser Verbindung und RAD001 zeigt eine verstärkte Antitumoraktivität mit erhöhtem T10 (Zeit, um ein relatives Tumorvolumen des 10-fachen des anfänglichen Tumorvolumens zu erreichen) und einer Verzögerung des Tumorwachstums. Die Kombination von RAD001 und dieser Chemikalie verstärkt auch signifikant die Aktivierung von Caspase-3 in HCT116 und MDAMB231, jedoch nicht in A549-Xenotransplantaten. Diese Verbindung hemmt die FDG-Akkumulation (2-Desoxy-2-[18F]fluor-d-glucose) und verringert die Tumorvolumina in A375M-Xenotransplantaten bei oraler Verabreichung von 100 mg/kg.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • Assay-Protokoll

    Raf und Mek werden in 2 × Endkonzentrationen in Assay-Puffer (50 mM Tris, pH 7,5, 15 mM MgCl2, 0,1 mM EDTA und 1 mM DTT) kombiniert und 15 μL pro Vertiefung in Polypropylen-Assay-Platten dosiert. Hintergrundwerte werden in Vertiefungen bestimmt, die Mek und DMSO ohne Raf enthalten. Zu den Raf/Mek-haltigen Vertiefungen werden 3 μL dieser Verbindung, 10 × in 100 % DMSO verdünnt, hinzugefügt. Die Raf-Kinase-Aktivitätsreaktion wird durch die Zugabe von 12 μL pro Vertiefung von 2,5 × 33P-ATP, verdünnt in Assay-Puffer, gestartet. Nach 45–60 Minuten werden die Reaktionen durch Zugabe von 70 μL Stoppreagenz (30 mM EDTA) gestoppt. Filtrationsplatten werden 5 Minuten lang mit 70 % Ethanol vorgewässert und dann durch Filtration mit Waschpuffer gespült. Proben (90 μL) aus den Reaktionsvertiefungen werden dann auf die Filtrationsplatten überführt. Die Filtrationsplatten werden 6 × mit Waschpuffer unter Verwendung eines Millipore-Filtrationsapparates gewaschen. Die Platten werden getrocknet und 100 μL pro Vertiefung Szintillationsflüssigkeit hinzugefügt. Die CPM wird dann mit einem Wallac Microbeta 1450-Lesegerät bestimmt.
Zell-Assay:[2]
  • Zelllinien

    Human A549 and H460 lung, HT29 and HCT 116 colon, and MDAMB231 breast cancer cell lines

  • Konzentrationen

    0.1 - 10 μM

  • Inkubationszeit

    48 hours

  • Methode

    The MTT assay and Bliss additivism model are used to assess the effect of RAF265 (CHIR-265) on cell viability. In each well of a 96-well plate, 1 × 104 cells are grown in 200 μL of medium. After 24 hours, this compound is added to achieve a final concentration of 0.1 to 10 μM. After 48 hours of treatment, 20 μL of 5 mg/mL MTT solution in PBS is added to each well. After 4 hours, supernatant is removed and formazan crystals are discarded in 200 μL of DMSO. Absorbance is then measured at 595 nm using an absorbance plate reader. Data are expressed as the percentage of viable cells.
Tierstudie:[2]
  • Tiermodelle

    A549, H460, HCT116, or MDAMB231 cells are injected s.c. into the flank region of 6-wk-old female athymic mice.

  • Dosierungen

    12 mg/kg

  • Verabreichung

    Orally administered daily

Referenzen

  • http://www.aacrmeetingabstracts.org/cgi/content/meeting_abstract/2008/1_Annual_Meeting/4876
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20124452/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21317202/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21527556/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21390189/

Kundenproduktvalidierung

<p>Immunoblots showing levels of phospho-MEK (p-MEK), total MEK (t-MEK), phospho-ERK1/2 (p-ERK1/2) and total ERK1/2 (t-ERK1/2) in A375 cells transduced with a retrovirus expressing BRAFV600E, BRAFV600E/L505H, BRAFV600E/F516G or BRAFV600E/T529N and treated with increasing doses of RAF265. α-tubulin (TUBA) was monitored as a loading control.</p>

Daten von [ Pigment Cell Melanoma Res , 2014 , 27(1), 124-33 ]

Raf265 inhibited the kinase activity of B-Raf but not of Raf-1 in Pkd2cKO cholangiocytes. Cells were treated for 30 min with different concentrations of Raf265. B-Raf and Raf-1 were immunoprecipated as described in the methods section and a kinase assay in vitro was performed using MEK as a substrate. The kinase activity of Raf was assessed by immunoblot analysis and quantified as optical density of pMEK with respect to untreated cells. In WT cholangiocytes (A) Raf265 inhibited both B-Raf and Raf-1 kinase activity. In Pkd2cKO cholangiocytes (B), Raf265 inhibited only B-Raf while a biphasic effect was found in Raf-1 with a significant increase at doses from 0.001 to 1 uM and a significant inhibition at 10 uM. Blots are representative of four different experiments. (*p<0.05 vs controls; **p<0.001 vs controls).

Daten von [ Hepatology , 2012 , 56(6), 2363-74 ]

LS513 cells were treated with increasing concentrations of selumetinib or selumetinib combined with different concentration of RAF265 for 48 hr. Lysates were subjected to western blot analyses, and membranes were probed with the indicated antibodies. Vinculin was included as a loading control.

Daten von [ , , Cell Rep, 2014, 8(5):1475-83 ]

Wild-type fetal liver-derived cells were differentiated for 2 days in culture. Kinase inhibitors (A-674563 and RAF265; concentrations are listed in Materials and Methods) were added during the final 14 h of culture.

Daten von [ , , Mol Cell Biol, 2016, 37(1) ]

Sellecks RAF265 (CHIR-265) Wurde zitiert von 24 Publikationen

A structure-based modelling approach identifies effective drug combinations for RAS-mutant acute myeloid leukemia [ bioRxiv, 2025, 2025.04.29.651188] PubMed: 40654850
Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
Comprehensive drug response profiling and pan-omic analysis identified therapeutic candidates and prognostic biomarkers for Asian cholangiocarcinoma [ iScience, 2022, 25(10):105182] PubMed: 36248745
Identification of New Vulnerabilities in Conjunctival Melanoma Using Image-Based High Content Drug Screening [ Cancers (Basel), 2022, 14(6)1575] PubMed: 35326726
B-Raf inhibitor vemurafenib counteracts sulfur mustard-induced epidermal impairment through MAPK/ERK signaling [ Drug Chem Toxicol, 2022, 1-10] PubMed: 34986718
RAF1 amplification drives a subset of bladder tumors and confers sensitivity to MAPK-directed therapeutics [ J Clin Invest, 2021, e147849] PubMed: 34554931
SHOC2 phosphatase-dependent RAF dimerization mediates resistance to MEK inhibition in RAS-mutant cancers. [ Nat Commun, 2019, 10(1):2532] PubMed: 31182717
RAF kinases are stabilized and required for dendritic cell differentiation and function. [ Cell Death Differ, 2019, 10.1038/s41418-019-0416-4] PubMed: 31541179
Genetic Heterogeneity of BRAF Fusion Kinases in Melanoma Affects Drug Responses. [ Cell Rep, 2019, 29(3):573-588] PubMed: 31618628
Mitochondrial metabolic reprograming via BRAF inhibition ameliorates senescence. [ Exp Gerontol, 2019, 126:110691] PubMed: 31421186

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