NSC 74859 (S3I-201)

NSC 74859 (S3I-201) hemmt das Wachstum und induziert Apoptose bevorzugt in Tumorzellen, die persistent aktiviertes Stat3 enthalten, indem es die Bildung des Stat3·Stat3-Komplexes sowie die DNA-bindenden und transkriptionellen Aktivitäten von Stat3 hemmt. Darüber hinaus hemmt es auch die Expression der Stat3-regulierten Gene, die Cyclin D1, Bcl-xL und Survivin kodieren. [1] Diese Verbindung hemmt die Brustkarzinom-Zelllinien MDA-MB-435, MDA-MB-453 und MDA-MB-231 mit einem IC50 von 100 μM. Zusätzlich sind die Zellen mit beeinträchtigter TGF-β-Signalgebung viermal so empfindlich gegenüber S3I-201. [2] Eine aktuelle Studie zeigt, dass es die antiproliferative Wirkung in HepG2- und Huh-7-Zellen über den STAT3-Signalweg verstärkt. [3]

NSC 74859 (S3I-201) (5 mg/kg, i.v. alle 2 oder alle 3 Tage) zeigt die Antitumor-Wirksamkeit in Mausmodellen mit humanen Brusttumor-Xenotransplantaten, die konstitutiv aktives Stat3 aufweisen. [1] Diese Verbindungstherapie reduziert die Replikation des Varicella-zoster-Virus (VZV) basierend auf dem Biolumineszenzsignal und der Anzahl positiver Hautxenotransplantate im Vergleich zu DMSO-behandelten Mäusen durch Hemmung der STAT3-Phosphorylierung. [4]

• In vitro Stat3 DNA-Bindungs-Assay und EMSA-Analyse

  Kurz gesagt, 100 µl biotinyl-e-Ac-EPQpYEEIEL-OH (in 50 mM Tris/150 mM NaCl, pH 7,5) werden zu jeder Vertiefung von Streptavidin-beschichteten 96-Well-Mikrotiterplatten gegeben und über Nacht bei 4 °C unter Schütteln inkubiert. Anschließend werden die Platten mit PBS/Tween 20 und dann zweimal mit 200 µl BSA-T-PBS (0,2% BSA/0,1% Tween 20/PBS) gespült. Dann werden 50 µl Lck-SH2-GST-Fusionsprotein (6,4 ng/ml in BSA-T-PBS) zu jeder Vertiefung der 96-Well-Platte in An- und Abwesenheit von 50 µl NSC 74859 (S3I-201) (für Endkonzentrationen von 30 und 100 mM) gegeben, und die Platte wird 4 Stunden bei Raumtemperatur geschüttelt. Nachdem die Lösungen entfernt wurden, wird jede Vertiefung viermal mit BSA-T-PBS (200 µl) gespült, und 100 µl polyklonaler Kaninchen-Anti-GST-Antikörper (100 ng/mL in BSA-T-PBS) werden zu jeder Vertiefung gegeben und über Nacht bei 4 °C inkubiert. Nach dem Waschen mit BSA-T-PBS werden 100 µl 200 ng/mL BSA-T-PBS Meerrettichperoxidase-konjugierter Maus-Anti-Kaninchen-Antikörper zu jeder Vertiefung gegeben und 45 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert. Nach vier Waschschritten mit BSA-T-PBS und drei Waschschritten mit PBS-T werden 100 µl Peroxidasesubstrat zu jeder Vertiefung gegeben und 5-15 Minuten inkubiert. Die Peroxidase-Reaktion wird durch Zugabe von 100 µl 1 M Schwefelsäurelösung gestoppt, und die Absorption wird bei 450 nm mit einem ELISA-Plattenreade

• Zelllinien

  MDA-MB-435, MDA-MB-453 and MDA-MB-231 cells lines

• Konzentrationen

  ~ 250 μM

• Inkubationszeit

  72 hours

• Methode

  The MTT assay is based on the conversion of the yellow tetrazolium salt MTT to purple formazan crystals by metabolically active cells. The MTT assay provides a quantitative determination of viable cells. Cells are seeded in 96-well microplates in complete culture medium in the absence or presence of increasing serial dosages of NSC 74859 (S3I-201) as indicated. At 72 hours after culture, the number of viable cells is measured by adding 100 μL/well of 2 mg/mL MTT solution. After 2 hours, the medium is removed. The absorbance is read at 590 nm with an enzyme-linked immunosorbent assay reader. Each treatment point is performed in 10 wells or sextuplicate.

• Tiermodelle

  Human breast cancer MDA-MB-231 cells are injected s.c. into the left flank of athymic nu/nu mice.

• Dosierungen

  ≤5 mg/kg

• Verabreichung

  Administered via i.v.