SRT1720 HCl

Das maximale Aktivierungsverhältnis von SRT1720 im Vergleich zu den nächsten Sirtuin-Homologen, SIRT2 (EC1.5 = 37 μM) und SIRT3 (EC1.5 > 300 μM), beträgt bis zu 781 %. SRT1720 bindet an den SIRT1-Enzym-Peptid-Substratkomplex an einer allosterischen Stelle amino-terminal zur katalytischen Domäne und senkt die Michaelis-Konstante für acetylierte Substrate. SRT1720 könnte die Glukosespiegel im gefütterten Zustand senken. SRT1720 hat keinen Einfluss auf den Nüchternglukosespiegel bei Mäusen, die mit Standardfutter gefüttert wurden, was darauf hindeutet, dass eine pharmakologische SIRT1-Aktivierung unwahrscheinlich ist, eine Hypoglykämie zu induzieren. SRT1720 reduziert die Hyperinsulinämie nach 4 Wochen signifikant und normalisiert teilweise erhöhte Insulinspiegel. Die SRT1720-Behandlung erhöht die mitochondriale Kapazität im Gastrocnemius-Muskel um 15 %, gemessen an der Citratsynthase-Aktivität. [1] Höhere Konzentrationen von SRT1720 (15 μM) induzieren eine leichte (10-20 %) Abnahme der Viabilität normaler Zellen. SRT1720 hemmt auch signifikant die VEGF-abhängige MM-Zellmigration. [2]

Bei DIO-Mäusen imitiert SRT1720 mehrere der nach Kalorienrestriktion beobachteten Effekte, einschließlich verbesserter Insulinsensitivität, normalisierter Glukose- und Insulinspiegel und erhöhter mitochondrialer Kapazität. Zusätzlich verbessert SRT1720 bei diätinduziert fettleibigen und genetisch fettleibigen Mäusen die Insulinsensitivität, senkt den Plasmaglukosespiegel und erhöht die mitochondriale Kapazität. Somit ist SRT1720 ein vielversprechendes neues Therapeutikum zur Behandlung von altersbedingten Krankheiten wie Typ-2-Diabetes. Im Einklang mit einer verbesserten Glukosetoleranz ist die Glukoseinfusionsrate, die zur Aufrechterhaltung der Euglykämie erforderlich ist, bei SRT1720-behandelten fa/fa-Ratten etwa 35 % höher, und die Gesamtglukoseentsorgungsrate ist um etwa 20 % erhöht. [1] SRT1720 verhindert auch das Wachstum von Multiples Myelom-Tumoren. 

• SIRT1-Fluoreszenzpolarisationsassay

  Im SIRT1-FP-Assay wird die SIRT1-Aktivität unter Verwendung eines 20 Aminosäuren umfassenden Peptids (Ac-Glu-Glu-Lys(Biotin)-Gly-Gln-Ser-Thr-Ser-Ser-His-Ser-Lys(Ac)-Nle-Ser-Thr-Glu-Gly–Lys(MR121 oder Tamra)-Glu-Glu-NH₂) überwacht, das aus der Sequenz von p53 abgeleitet ist. Das Peptid ist N-terminal mit Biotin verknüpft und C-terminal mit einem Fluoreszenz-Tag modifiziert. Die Reaktion zur Überwachung der Enzymaktivität ist ein gekoppelter Enzymassay, wobei die erste Reaktion die von SIRT1 katalysierte Deacetylierungsreaktion ist und die zweite Reaktion die Spaltung durch Trypsin an dem neu exponierten Lysinrest ist. Die Reaktion wird gestoppt und Streptavidin wird hinzugefügt, um die Massenunterschiede zwischen Substrat und Produkt zu betonen. Die Empfindlichkeit des FP-Assays ermöglicht die Identifizierung von SRT1720. Die Reaktionsbedingungen der Fluoreszenzpolarisation sind wie folgt: 0,5 μM Peptidsubstrat, 150 μM βNAD⁺, 0-10 nM SIRT1, 25 mM Tris-Acetat pH 8, 137 mM Na-Ac, 2,7 mM K-Ac, 1 mM Mg-Ac, 0,05 % Tween-20, 0,1 % Pluronic F127, 10 mM CaCl 2, 5 mM DTT, 0,025 % BSA und 0,15 mM Nicotinamid. Die Reaktion wird bei 37 °C inkubiert und durch Zugabe von Nicotinamid gestoppt, und Trypsin wird hinzugefügt, um das deacetylierte Substrat zu spalten. Diese Reaktion wird bei 37 °C in Gegenwart von 1 μM Streptavidin inkubiert. Die Fluoreszenzpolarisation wird bei Anregungs-(650 nm) und Emissions-(680 nm) Wellenlängen bestimmt.

• Zelllinien

  Human vascular endothelial cells (HUVECs)

• Konzentrationen

  5 μM

• Inkubationszeit

  2 hours

• Methode

  Transwell Insert Assays are utilized to measure migration. In vitro angiogenesis is assessed by Matrigel capillary-like tube structure formation assay. For endothelial tube formation assay, human vascular endothelial cells (HUVECs) are obtained from Clonetics and maintained in endothelial cell growth medium-2 containing 5% FBS. After three passages, HUVEC cell viability is measured with the trypan blue exclusion assay, and <5% of cell death is observed with SRT1720 treatment.

• Tiermodelle

  Chase-SCID mice with MM.1S cells

• Dosierungen

  200 mg/kg

• Verabreichung

  Orally