Semagacestat (LY450139)

Katalog-Nr.S1594 Charge:S159402

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Technische Daten

Formel

C19H27N3O4
Molekulargewicht 361.44 CAS-Nr. 425386-60-3
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 73 mg/mL (201.96 mM)
Ethanol 41 mg/mL (113.43 mM)
Water Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension
0.5% methylcellulose

Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.

 10.000mg/ml (27.67mM) Taking the 1 mL working solution as an example, take 10 mg of this product, add it to 1 ml of 0.5% methylcellulose clear solution, and mix evenly to form a uniform suspension. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Semagacestat (LY450139) ist ein γ-Secretase-Blocker für Aβ42, Aβ40 und Aβ38 mit IC50 von 10,9 nM, 12,1 nM bzw. 12,0 nM. Es hemmt auch die Notch-Signalgebung mit IC50 von 14,1 nM in H4 menschlichen Gliomzellen. Diese Verbindung hat Phase-3-Studien erreicht.
Ziele
Aβ42
(H4 human glioma cells)		 Aβ38
(H4 human glioma cells)		 Aβ40
(H4 human glioma cells)		 Notch
(H4 human glioma cells)
10.9 nM 12.0 nM 12.1 nM 14.1 nM
In vitro Semagacestat (LY450139) reduziert die Sekretion von Aβ42, Aβ40 und Aβ38 aus humanen H4-Gliomzellen, die stabil humanes Wildtyp-APP überexprimieren, in das Kulturmedium, mit IC50 von 10,9 nM, 12,1 nM bzw. 12,0 nM, ohne die Zellviabilität zu beeinflussen. Es erhöht auch β-CTF in Zelllysaten mit einem ECmax von 16,0 nM, und die Erhöhung kann bei hohen Konzentrationen unerwartet abgeschwächt werden. Diese Verbindung hemmt die Notch-Signalgebung mit einer IC50 von 14,1 nM und zeigt eine minimale Notch-sparende Selektivität mit Notch IC50/Aβ42 IC50 von nur 1,3. Es verursacht eine konzentrationsabhängige Abnahme von Aβ40, das mit einer IC50 von 111 nM aus murinen CTX, die endogenes murines APP exprimieren, in das Medium sezerniert wird, aber die murine Aβ42-Bildung in CTX ist etwa 12-mal geringer als Aβ40, was mit Daten für Neuronen von Wildtyp-Mäusen übereinstimmt.
In vivo Die orale Verabreichung von Semagacestat (LY450139) (1 mg/kg) an 5,5 Monate alte APP-transgene Tg2576-Mäuse verbessert signifikant Gedächtnisdefizite im räumlichen Arbeitsgedächtnis unter Verwendung des Y-Labyrinth-Tests, was nach 8 Tagen subchronischer Dosierung verschwindet. Es senkt die hippokampalen Spiegel von Aβ42 und Aβ40 bei 10 mg/kg (22-23 % Reduktion) und 30 mg/kg (36-41 % Reduktion) und erhöht β-CTF bei 0,3-10 mg/kg dosisabhängig ohne Hemmung der Verarbeitung anderer γ-Secretase-Substrate wie Notch, N-Cadherin oder EphA4 im Gehirn, beeinträchtigt jedoch die normale Kognition bei Wildtyp-Mäusen und 3 Monate alten Tg2576-Mäusen, wobei es die kognitiven Defizite im Y-Labyrinth-Test nicht wiederherstellen kann.
Merkmale Der am besten charakterisierte γ-Secretase-Inhibitor, der die Klinik erreicht hat.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • Zellulärer APP-Verarbeitungsassay und Notch-Signalgebungsassay

    Humane H4-Gliomzellen, die stabil humanes Wildtyp-APP695 überexprimieren, werden 24 Stunden lang mit Semagacestat (LY450139) in verschiedenen Konzentrationen behandelt. Die Spiegel von Aβ42, Aβ40 und Aβ38 in den Medien werden mit separaten ELISA-Kits gemessen. Der Expressionsvektor der konstitutiv aktiven Form von Notch (NotchΔE), der die Basen 1-60 und 5193-6657 der humanen Notch1-Kodierungsregion (NM_017617) kodiert, wird in einen pcDNA3.1-Vektor mit einer Sequenzmodifikation von Maus zu Mensch konstruiert. Die Notch-Signalaktivität wird mit dem Cignal RBP-Jk Reporter Assay Kit bewertet. RBP-Jk-Protein [CSL/CBF1/Su(H)/Lag1] ist ein Transkriptionsfaktor, der mit der durch γ-Secretase produzierten intrazellulären Notch-Domäne aktiviert wird. H4-Zellen werden transient mit dem humanen NotchΔE-Expressionsvektor und dem RBP-Jk-responsiven Luciferase-Konstrukt unter Verwendung von Lipofectamine 2000 transfiziert und dann 16 Stunden lang verschiedenen Konzentrationen dieser Verbindung ausgesetzt. Die Notch-Signalgebung wird basierend auf der Luciferase-Aktivität im Zelllysat unter Verwendung des Dual-Glo Luciferase Assay System gemessen.
Zell-Assay:[2]
  • Zelllinien

    Murine cortical neurons and cerebellar granule cells

  • Konzentrationen

    Dissolved in DMSO, final concentration ~10 μM

  • Inkubationszeit

    24 hours

  • Methode

    Cells are incubated with Semagacestat (LY450139) for 24 hours. For detection of cell viability, the percentage of viable cells is quantified by their capacity to reduce 3-(4,5-dimethylthiazole-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) following incubation with 0.5 mg/mL MTT for 60 minutes. For the detection of sAPP species, cells are lysed and analysed by western blotting.
Tierstudie:[1]
  • Tiermodelle

    Female Tg2576 mice expressing human APP695 with the Swedish mutation (K670N/M671L)

  • Dosierungen

    ~30 mg/kg

  • Verabreichung

    Orally administered once daily

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22323718/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19519664/

Kundenproduktvalidierung

<p>HEK/APPswe cells were either left non-treated (-) or exposed to the γ-secretase inhibitor (GSI) semagacestat (+) for 19 h prior to cell harvesting and membrane preparation (Substrate accumulation). Exposure of cells with GSI prior to membrane preparation results in higher Aβ1-42 and Aβx-42 signals as compared to membranes derived from non-GSI treated cells. Direct addition of semagacestat to the membranes in the novo Aβ production assay inhibited Aβ production (Semagacestat (1 µM)). The amount of Aβx-42 is higher than Aβ1-42 suggesting that C83 is the major substrate for the Aβ42 signal detected.</p>

Daten von [ J Biol Chem , 2014 , 289(3), 1540-50 ]

<p>None of the AZ GSMs (square, triangle, and ×) or E2012 (O) affect Notch processing, whereas the GSIs L685458, DBZ, MRK-560, and Semagacestat do, as measured by quantifying the amount of nuclearly trans- located NICD in HEK293 cells stably transfected with △ENotch using immunocytochemistry. % NICD translocation is set relative to 0.5% DMSO (100%) and 0.5 μM L685458(0%)controls(mean±S.E., n＝2).</p>

Daten von [ J Biol Chem , 2012 , 287(15), 11810-9 ]

Cultures were assessed in A for TRAP by enzyme histochemistry 5-8 days following exposure to Rankl. Values are means ± S.D.; n = 6 for all data sets except for Notch2Q2319X DMSO at day 5 where n = 5; the right upper panel shows representative culture fields of TRAP-stained multinucleated cells 8 days after the addition of Rankl.

Daten von [ , , J Biol Chem, 2016, 291(4):1538-51. ]

Sellecks Semagacestat (LY450139) Wurde zitiert von 23 Publikationen

A patient-derived T cell lymphoma biorepository uncovers pathogenetic mechanisms and host-related therapeutic vulnerabilities [ Cell Rep Med, 2025, S2666-3791(25)00102-8] PubMed: 40147445
Impaired ciliogenesis in small airway epithelial cells involves in the development of idiopathic pulmonary fibrosis [ Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis, 2025, 1871(8):167992] PubMed: 40712987
Simultaneous Inhibition of Ceramide Hydrolysis and Glycosylation Synergizes to Corrupt Mitochondrial Respiration and Signal Caspase Driven Cell Death in Drug-Resistant Acute Myeloid Leukemia [ Cancers (Basel), 2023, 15(6)1883] PubMed: 36980769
Establishment and characterization of immortalized sweat gland myoepithelial cells [ Sci Rep, 2022, 12(1):7] PubMed: 34997030
LY450139 Inhibited Ti-Particle-Induced Bone Dissolution via Suppressing Notch and NF-κB Signaling Pathways [ Calcif Tissue Int, 2022, 111(2):211-223] PubMed: 35588014
TrkA-mediated endocytosis of p75-CTF prevents cholinergic neuron death upon γ-secretase inhibition [ Life Sci Alliance, 2021, 4(4)e202000844] PubMed: 33536237
Treatment-Induced Tumor Dormancy through YAP-Mediated Transcriptional Reprogramming of the Apoptotic Pathway. [ Cancer Cell, 2020, 13;37(1):104-122e12] PubMed: 31935369
Amyloidogenic Processing of Alzheimer's Disease β-amyloid Precursor Protein Induces Cellular Iron Retention [ Mol Psychiatry, 2020, 10.1038/s41380-020-0762-0] PubMed: 32444869
A novel human colon signet-ring cell carcinoma organoid line: establishment, characterization and application [ Carcinogenesis, 2020, 41(7):993-1004] PubMed: 31740922
In Vitro Evaluation of Clinical Candidates of γ-Secretase Inhibitors: Effects on Notch Inhibition and Promoting Beige Adipogenesis and Mitochondrial Biogenesis [ Pharm Res, 2020, 37(10):185] PubMed: 32888109

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