TW-37

TW-37 zielt auf die BH3-Bindungsfurche in Bcl-2 ab, an die proapoptotische Bcl-2-Proteine binden, und zeigt eine höhere Affinität und Selektivität für Bcl-2 und Mcl-1 gegenüber Bcl-xL mit Ki-Werten von 0,29 μM, 0,26 μM bzw. 1,11 μM. [1] In vitro zeigt diese Verbindung eine signifikante antiproliferative und pro-apoptotische Wirkung in einer de novo chemoresistenten WSU-DLCL2 Lymphomzelllinie und primären Zellen, die von einem Lymphompatienten stammen, ohne Auswirkungen auf normale periphere Blutlymphozyten. [1] Es zeigt die hemmende Wirkung sowohl auf das Zellwachstum als auch auf den Zelltod in Endothelzellen mit einem IC50 von ca. 1,8 μM ohne Wirkung auf Fibroblasten, die dem gleichen Konzentrationsbereich wie die Endothelzellen ausgesetzt waren. Darüber hinaus zeigt diese Chemikalie auch antiproliferative Effekte in MCF-7, LNCaP und SLK Tumorzelllinien mit dem gleichen oder einem niedrigeren Konzentrationsbereich als die, die zur Hemmung des Endothelzellwachstums erforderlich sind. [2]

TW-37 zeigt eine maximal tolerierte Dosis (MTD) von 40 mg/kg für drei i.v. Injektionen bei SCID-Mäusen (Severe Combined Immunodeficient), wenn es allein verabreicht wird, und verstärkt die tumorhemmende Wirkung des CHOP-Regimes. [1] Diese Verbindung, i.v. verabreicht, erzeugt den antiangiogenen Effekt, indem sie die Dichte funktioneller menschlicher Mikrogefäße im SCID-Mausmodell der menschlichen Angiogenese verringert. [2] Die Kombination dieser Chemikalie und MEK-Inhibitoren blockiert synergistisch das Melanomzellwachstum bei Mäusen durch eine signifikante Reduktion des Tumorvolumens und der Tumormasse. [3]

• Fluoreszenzpolarisationsbasierter Bindungsassay für rekombinantes Bcl-2-, Bcl-XL- und Mcl-1-Protein

  Für diesen Assay werden das 21-Reste BH3-Peptid QEDIIRNIARHLAQVGDSMDR, abgeleitet von Bid, markiert mit FAM-Bid, und rekombinante Proteine, abgeleitet von menschlichem Bcl-2, Bcl-X L und Mcl-1, verwendet. Es wird bestimmt, dass FAM-Bid einen K_i von 11 nM zu Bcl-2-Protein, 25 nM zu Bcl-XL-Protein und 5,7 nM zu Mcl-1-Protein hat. Der kompetitive Bindungsassay für Bcl-XL ist derselbe wie der für Bcl-2 mit folgenden Ausnahmen: 30 nM Bcl-XL-Protein und 2,5 nM FAM-Bid-Peptid im folgenden Assaypuffer [50 mM Tris-Bis (pH 7.4) und 0.01% bovines Gamma-Globulin].

• Zelllinien

  HDMECs

• Konzentrationen

  0 - 100 μM

• Inkubationszeit

  96 hours

• Methode

  The sulforhodamine B (SRB) cytotoxicity assay is used as described. Briefly, optimal cell density for cytotoxicity assay is determined by growth curve analysis. HDMECs are seeded in a 96-well plate and allowed to adhere overnight. Drug or control is diluted in EGM2-MV and layered onto cells, which are allowed to incubate for times as indicated in the figures. Alternatively, HDMECs are coincubated with TW37 and 0 to 100 ng/mL recombinant human VEGF (rhVEGF)165 or 0 to 100 ng/mL recombinant human CXCL8. Cells are fixed on the plates by addition of cold trichloroacetic acid (10% final concentration) and incubation for 1 hour at 4 °C. Cellular protein is stained by addition of 0.4% SRB in 1% acetic acid and incubation at room temperature for 30 minutes. Unbound SRB is removed by washing with 1% acetic acid and the plates are air dried. Bound SRB is resolubilized in 10 mM unbuffered Tris-base and absorbance is determined on a microplate reader at 560 nm. Test results are normalized against initial plating density and drug-free controls. Data are obtained from triplicate wells per condition and are representative of at least three independent experiments

• Tiermodelle

  Athymic NCr-nu/nu mice bearing SK-Mel-147 melanoma xenografts

• Dosierungen

  ~40 mg/kg

• Verabreichung

  Administered via i.v. or i.p.