Temsirolimus (CCI-779)

Katalog-Nr.S1044 Charge:S104418

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Technische Daten

Formel

C56H87NO16
Molekulargewicht 1030.29 CAS-Nr. 162635-04-3
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (97.06 mM)
Ethanol 100 mg/mL (97.06 mM)
Water Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Temsirolimus ist ein spezifischer mTOR-Inhibitor mit einer IC50 von 1,76 μM in einem zellfreien Assay. Temsirolimus induziert Autophagy und Apoptosis.
Ziele
mTOR
(Cell-free assay)
1.76 μM
In vitro In Abwesenheit von FKBP12 hemmt Temsirolimus potent die mTOR-Kinase-Aktivität mit einer IC50 von 1,76 μM, ähnlich der von Rapamycin mit einer IC50 von 1,74 μM. Diese Verbindung zeigt bei nanomolaren Konzentrationen (10 nM bis <5 μM) eine moderate und selektive antiproliferative Aktivität über einen FKBP12-abhängigen Mechanismus, kann aber die Proliferation einer breiten Palette von Tumorzellen bei niedrigen mikromolaren Konzentrationen (5-15 μM) vollständig hemmen, was eine FKBP12-unabhängige Unterdrückung der mTOR-Signalgebung beinhaltet. Diese chemische Behandlung bei mikromolaren, aber nicht nanomolaren Konzentrationen (20 μM) führt zu einem deutlichen Rückgang der globalen Proteinsynthese und zur Disassemblierung von Polyribosomen, begleitet von einem schnellen Anstieg der Phosphorylierung des Translations-Elongationsfaktors eEF2 und des Translations-Initiationsfaktors eIF2A. Es hemmt die Phosphorylierung des ribosomalen Proteins S6, potenter in PTEN-positiven DU145-Zellen als in PTEN-negativen PC-3-Zellen, und hemmt das Zellwachstum und das klonogene Überleben beider Zellen in einer konzentrationsabhängigen Weise. Diese Verbindung (100 ng/mL) hemmt potent die Proliferation und induziert Apoptose in primären menschlichen lymphoblastischen Leukämie (ALL)-Zellen.
In vivo In den NOD/SCID-Xenograft-Modellen mit humaner ALL führt die Temsirolimus-Behandlung mit 10 mg/kg/Tag zu einer Abnahme der peripheren Blutblasten und der Splenomegalie Die Verabreichung dieser Verbindung (20 mg/kg i.p. 5 Tage/Woche) verzögert das Wachstum von DAOY-Xenografts nach 1 Woche um 160 % und nach 2 Wochen um 240 % signifikant im Vergleich zu Kontrollen. Eine einzelne hohe Dosis dieser Chemikalie (100 mg/kg i.p.) induziert innerhalb einer Woche eine 37%ige Regression des Tumorvolumens. Eine zweiwöchige Behandlung mit dieser Verbindung verzögert auch das Wachstum von Rapamycin-resistenten U251-Xenografts um 148 %. Die Hemmung von mTOR durch dieses Mittel verbessert die Leistung bei vier verschiedenen Verhaltensaufgaben und verringert die Aggregatbildung in einem Mausmodell der Huntington-Krankheit. Die Verabreichung dieser Verbindung induziert signifikante dosisabhängige Antitumor-Reaktionen gegen das subkutane Wachstum von 8226, OPM-2 und U266 Xenografts mit einer ED50 von 20 mg/kg bzw. 2 mg/kg für 8226 und OPM-2, die mit gehemmter Proliferation und Angiogenese, Induktion von Apoptose und Reduzierung der Tumorzellgröße verbunden sind.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:

[1]
  • In-vitro-Assay der mTOR-katalytischen Aktivität

    Die Flag-markierten Wildtyp-Human-mTOR (Flag-mTOR)-DNA-Konstrukte werden transient in HEK293-Zellen transfiziert. Die Proteinextraktion und -reinigung von Flag-mTOR werden 48 Stunden später durchgeführt. In-vitro-Kinase-Assays des gereinigten Flag-mTOR in Anwesenheit verschiedener Konzentrationen von Temsirolimus ohne FKBP12 werden in einer 96-Well-Platte durchgeführt und mittels Dissociations-verstärktem Lanthaniden-Fluoreszenzimmunoassay (DELFIA) unter Verwendung von His6-S6K1 als Substrat nachgewiesen. Enzyme werden zuerst in Kinase-Assay-Puffer (10 mM Hepes (pH 7,4), 50 mM NaCl, 50 mM -Glycerophosphat, 10 mM MnCl2, 0,5 mM DTT, 0,25 μM Microcystin LR und 100 μg/mL BSA) verdünnt. Zu jeder Vertiefung werden 12 μL des verdünnten Enzyms kurz mit 0,5 μL dieser Verbindung gemischt. Die Kinase-Reaktion wird durch Zugabe von 12,5 μL Kinase-Assay-Puffer, der ATP und His6-S6K enthält, initiiert, um ein finales Reaktionsvolumen von 25 μL zu ergeben, das 800 ng/mL FLAG-mTOR, 100 μM ATP und 1,25 μM His6-S6K enthält. Die Reaktionsplatte wird für 2 Stunden (linear bei 1-6 Stunden) bei Raumtemperatur unter sanftem Schütteln inkubiert und dann durch Zugabe von 25 μL Stopp-Puffer (20 mM Hepes (pH 7,4), 20 mM EDTA und 20 mM EGTA) beendet. Der DELFIA-Nachweis des phosphorylierten (Thr-389) His6-S6K wird bei Raumtemperatur unter Verwendung eines monoklonalen Anti-P(T389)-p70S6K-Antikörpers, der mit Europium-N1-ITC (Eu) (10,4 Eu pro Antikörper) markiert ist, durchgeführt. 45 μL des beendeten Kinase-Reaktionsgemischs werden auf eine MaxiSorp-Platte, die 55 μL PBS enthält, übertragen. His6-S6K wird 2 Stunden lang angeheftet, wonach die Vertiefungen abgesaugt und einmal mit PBS gewaschen werden. 100 μL DELFIA-Puffer mit 40 ng/mL Eu-P(T389)-S6K-Antikörper werden hinzugefügt. Die Antikörperbindung wird 1 Stunde lang unter sanftem Rühren fortgesetzt. Die Vertiefungen werden dann abgesaugt und viermal mit PBS, das 0,05% Tween 20 (PBST) enthält, gewaschen. 100 μL DELFIA-Verstärkungslösung werden zu jeder Vertiefung hinzugefügt und die Platten in einem PerkinElmer Victor Modell Plattenleser abgelesen.
Zell-Assay:

[1]
  • Zelllinien

    A549, H157, H460, H446, HCT116, HT29, SW480, DLD1, Caco2, LNCap, DU145, MDA468, MDA231, HEK293, and PC3-MM2

  • Konzentrationen

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~20 μM

  • Inkubationszeit

    72 hours

  • Methode

    Cells are exposed to various concentrations of Temsirolimus for 72 hours. After treatment, viable cell densities are determined by MTS dye conversion using CellTiter AQ assay kit.
Tierstudie:

[4]
  • Tiermodelle

    Female athymic nude mice injected s.c. with DAOY, or U251 cells

  • Dosierungen

    20 mg/kg

  • Verabreichung

    Injection daily 5 times per week

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18413763/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15805283/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16195324/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11245461/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15146184/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15304393/

Kundenproduktvalidierung

mTOR inhibitors attenuate ganetespib-driven elevation of HSPs in multiple tumor cell types. A375 melanoma cells were treated with vehicle, ganetespib (25 nmol/L), BEZ235 (500 nmol/L), or temsirolimus (500 nmol/L), either alone or in combination, for 24 hours. The levels of HSP90α, HSP70, HSP27, and GAPDH were determined by immunoblotting.

Daten von [ Mol Cancer Res , 2014 , 12, 703-13 ]

SCID mice with PC-9/Vec or PC-9/HGF tumors were administered 25 mg/kg erlotinib once daily for 4 days or 50 mg/kg temsirolimus once from day 8. Four hours after final erlotinib administration, tumors were harvested, and the relative levels of proteins in the tumor lysates were determined by western blotting.

Daten von [ PLoS One , 2013 , 8, e62104 ]

SCID mice with PC-9/Vec or PC-9/HGF tumors were administered as described in Figure. Four hours after final administration of erlotinib, tumors were harvested, and tumor cell angiogenesis (CD31) were determined by immunohistochemistry.

Daten von [ PLoS One , 2013 , 8, e62104 ]

<p>Breast cancer cells were pretreated with 100ng/ml EGF for 15 min and then treated with the indicated concentrations of Temsirolimus for 24 hours.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

Sellecks Temsirolimus (CCI-779) Wurde zitiert von 108 Publikationen

Haploinsufficiency of miR-143 and miR-145 reveal targetable dependencies in resistant del(5q) myelodysplastic neoplasm [ Leukemia, 2025, 39(4):917-928] PubMed: 40000845
Multi-layer stratified oncology platform utilizing transcriptomics, prostate cancer organoids, and modeling of drug response [ J Exp Clin Cancer Res, 2025, 44(1):290] PubMed: 41094672
PI3K/AKT signaling mediates stress-inducible amyloid formation through c-Myc [ Cell Rep, 2025, 44(5):115617] PubMed: 40272983
Lactate shuttle between cytotrophoblast and syncytiotrophoblast in the placenta enhances ferroptosis resistance and maintains placental homeostasis: implications for early pregnancy loss [ Cell Commun Signal, 2025, 23(1):438] PubMed: 41088442
Molecular control of PDPNhi macrophage subset induction by ADAP as a host defense in sepsis [ JCI Insight, 2025, e186456] PubMed: 39903516
A high-throughput screening platform to identify MYCN expression inhibitors for liver cancer therapy [ Front Oncol, 2025, 15:1486671] PubMed: 40027135
Single-Molecule-Based, Label-Free Monitoring of Molecular Glue Efficacies for Promoting Protein-Protein Interactions Using YaxAB Nanopores [ ACS Nano, 2024, 18(45):31451-31465] PubMed: 39482865
The mTOR pathway controls phosphorylation of BRAF at T401 [ Cell Commun Signal, 2024, 22(1):428] PubMed: 39223665
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
Enzymatic depletion of circulating glutamine is immunosuppressive in cancers [ iScience, 2024, 27(6):109817] PubMed: 38770139

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