U0126-EtOH

U0126-EtOH antagonisiert funktional die transkriptionelle Aktivität von AP-1 und blockiert die Produktion einer Vielzahl von Zytokinen und Metalloproteinasen, die an der Entzündungsreaktion beteiligt sind. [1] Diese Verbindung hemmt die T-Zell-Proliferation als Reaktion auf antigene Stimulation oder quervernetzte Anti-CD3 plus Anti-CD28-Antikörper ohne Auswirkung auf die IL-2-induzierte Proliferation durch Herunterregulierung der IL-2-mRNA-Spiegel. [2] Eine aktuelle Studie zeigt, dass diese Chemikalie die Resveratrol-induzierte Apoptose in kastrationsresistenten menschlichen Prostatakrebs-C4-2-Zellen antagonisiert, die mitochondriale Funktion hemmt und die Zellen unabhängig von MEK auf aerobe Glykolyse umstellt. [3]

U0126-EtOH, als Inhibitor des intrazellulären Raf/MEK/ERK-Signalweges, zeigt antivirale Aktivität, indem es die Vermehrung der 2009 pandemischen IV H1N1-Variante und hochpathogener aviärer Influenzaviren (HPAIV) in vivo in der Mauslunge durch Hemmung unterdrückt. [4] Diese Verbindung zeigt das Potenzial für neuroprotektive Wirkung und verbessert das räumliche Lernen im Morris-Wasserlabyrinth (MWM) durch Aktivierung von Peroxisom-Proliferator-aktiviertem Rezeptor-Gamma-Coaktivator-1a, nukleärem respiratorischem Faktor 1 und mitochondrialem Transkriptionsfaktor A in Aβ-injizierten Ratten. [5]

• In-vitro-Kinase-Assays

  Die Menge an immunpräzipitiertem Wildtyp-MEK, die in diesen Assays verwendet wird, wird so eingestellt, dass sie eine ähnliche Menge an Aktivitätseinheiten ergibt, wie sie mit 10 nM rekombinantem MEK erhalten wird. Die Reaktionsgeschwindigkeiten werden unter Verwendung einer 96-Well-Nitrozellulosefilterapparatur wie unten beschrieben gemessen. Sofern nicht anders angegeben, werden die Reaktionen bei einer Enzymkonzentration von 10 nM in 20 mM Hepes, 10 mM MgCl₂, 5 mM β-Mercaptoethanol, 0,1 mg/mL BSA, pH 7,4, bei Raumtemperatur durchgeführt. Die Reaktionen werden durch Zugabe von [γ-³³P]ATP in die vorgemischte MEK/ERK/diese Verbindung-Reaktionsmischung initiiert, und ein Aliquot von 100 μL wird alle 6 Minuten entnommen und auf die 96-Well-Nitrozellulosemembranplatte übertragen, die 50 mM EDTA enthält, um die Reaktion zu stoppen. Die Membranplatte wird unter Vakuum viermal mit Puffer abgesaugt und gewaschen. Die Wells werden dann mit 30 μL Microscint-20 Szintillationsflüssigkeit gefüllt, und die Radioaktivität von ³³P-phosphoryliertem ERK wird mit einem Top Count Szintillationszähler gezählt. Die Geschwindigkeiten werden aus den Steigungen der Radioaktivität-gegen-Zeit-Diagramme erhalten. Die Konzentrationen von ERK und ATP betragen 400 nM bzw. 40 μM, sofern nicht anders angegeben. Für alle In-vitro-Enzymassays wird die prozentuale Hemmung als 100 (1 - Vi/Vo) berechnet, wobei Vi und Vo die anfänglichen Reaktionsgeschwindigkeiten in Anwesenheit bzw. Abwesenheit dieser Chemikalie sind. Die Daten werden dann als prozentuale Hemmung als Funktion der Konzentration dieser Verbindung aufgetragen und durch nichtlineare Kleinste-Quadrate-Regression an die Standardgleichung einer Langmuir-Isotherme angepasst, um die IC50 zu bestimmen. Wie berichtet, basieren die Enzymkonzentrationen auf Molekulargewichten und der Masse des Proteins, das im endgültigen Assayvolumen verwendet wird, und nicht auf der Aktivstellen-Titration. Daher kann die tatsächliche Enzymaktivstellenkonzentration von der angegebenen abweichen.

• Zelllinien

  A.E7 or Th17 cells

• Konzentrationen

  0 to 10 μM

• Inkubationszeit

  48 hours

• Methode

  A.E7 or Th17 cells are incubated with C-treated B10.BR or BALB/c splenocytes plus varying concentrations of pigeon cytochrome c or PR8 Ag, or with 5 U/mL human rIL-2. In addition, some assays contains U0126-EtOH or an inactive analogue, U0124, to determine direct effects of MEK inhibition on T cell proliferation. Two days after culture initiation, each well is pulsed with 1 µCi of [³H]TdR and harvested the following day. The incorporation of [³H]TdR into DNA is quantitated on a Packard Matrix 96 direct beta counter without the use of liquid scintillation mixtures.

• Tiermodelle

  Female C57Bl/6 mice infected by Mouse-adapted highly pathogenic avian influenza A/FPV/Bratislava/79 (H7N7; FPV) virus and swine origin human influenza A virus (SOIV) A/Regensburg/D6/2009 (H1N1v; RB1).

• Dosierungen

  ≤10 mM

• Verabreichung

  Administered via aerosol.