Tozasertib (VX-680)

Katalog-Nr.S1048 Charge:S104806

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Technische Daten

Formel

C23H28N8OS
Molekulargewicht 464.59 CAS-Nr. 639089-54-6
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 49 mg/mL (105.46 mM)
Ethanol 49 mg/mL (105.46 mM)
Water 3 mg/mL (6.45 mM)
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Tozasertib (VX-680) ist ein Pan-Aurora-Inhibitor, der hauptsächlich gegen Aurora A mit einem Kiapp von 0,6 nM in einem zellfreien Assay wirkt, weniger potent gegenüber Aurora B/Aurora C und 100-fach selektiver für Aurora A als 55 andere Kinasen ist. Die einzigen Ausnahmen sind Fms-related tyrosine kinase-3 (FLT-3) und BCR-ABL tyrosine kinase, die von dieser Verbindung mit einem Ki von 30 nM gehemmt werden. Es induziert apoptosis und autophagy und befindet sich in Phase 2.
Ziele
Aurora A
(Cell-free assay)		 Aurora C
(Cell-free assay)		 Aurora B
(Cell-free assay)		 FLT3
(Cell-free assay)		 Bcr-Abl
(Cell-free assay)
0.6 nM(Ki app) 4.6 nM(Ki app) 18 nM(Ki app) 30 nM(Ki) 30 nM(Ki)
In vitro Obwohl Tozasertib (VX-680) ein Multi-Kinase-Profil aufweist, induziert es eine ähnliche Zytotoxizität mit einer IC50 von ca. 300 nM und zeigt einen AUR B-ähnlichen inhibitorischen Phänotyp von G2/M-Arrest, Endoreduplikation und Apoptose in BaF3-Zellen, die mit ABL- oder FLT-3-Kinasen (mutiert und Wildtyp) transfiziert wurden. Diese Verbindung verhindert die CAL-62-Proliferation zeitabhängig. Eine 14-tägige Behandlung verringert die Anzahl und Größe der Kolonien um etwa 70 % in den 8305C und 90 % in den CAL-62, 8505C und BHT-101. Die Behandlung der verschiedenen ATC-Zellen damit hemmt die Proliferation mit einer IC50 zwischen 25 und 150 nM. Es beeinträchtigt signifikant die Fähigkeit der verschiedenen Zelllinien, Kolonien in Weichagar zu bilden. Die Analyse der Caspase-3-Aktivität zeigt, dass VX-680 Apoptose in den verschiedenen Zelllinien induziert. CAL-62-Zellen, die 12 Stunden lang der Verbindung ausgesetzt waren, zeigten eine Akkumulation von Zellen mit ≥4N DNA-Gehalt. Die Zeitrafferanalyse zeigt, dass behandelte CAL-62-Zellen die Metaphase ohne Teilung verlassen. Darüber hinaus wird die Histon-H3-Phosphorylierung nach der Behandlung aufgehoben. Es besitzt eine signifikante hemmende Aktivität gegen BCR-Abl mit der T315I-Mutation in patientenabgeleiteten Proben.
In vivo Tozasertib (VX-680) führt zu einer deutlichen Verringerung der Tumorgröße in einem humanen AML (HL-60) Xenograft-Modell. In Nacktmäusen, die mit 75 mg/kg zweimal täglich intraperitoneal (b.i.d. i.p.) über 13 Tage behandelt wurden, wurden die mittleren Tumorvolumina um 98 % reduziert. Die Tumorwachstumsreduktion ist dosisabhängig und signifikant bei einer Dosis von 12,5 mg/kg b.i.d. Diese Verbindung wird gut vertragen, wobei eine geringe Abnahme des Körpergewichts nur bei der höchsten Dosis beobachtet wurde. Sie löst auch die Tumorregression in Pankreas- und Kolon-Xenograft-Modellen aus. Tozasertib zeigt auch eine potente Antitumoraktivität, wenn es i.v. in Nacktratten mit etablierten HCT116-Tumoren infundiert wird. Eine höhere Dosis (2 mg/kg/h) verbessert die Wirksamkeit mit einer 56%igen Abnahme des mittleren Tumorvolumens.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:

[3]
  • Kinase-Inhibitions-Assays

    Der ATP-Verbrauch wird über das Pyruvatkinase/Lactatdehydrogenase-Enzympaar mit der Oxidation von NADH gekoppelt, die durch die Abnahme der Absorption bei 340 nm überwacht werden kann. Reaktionen enthalten 100 mM Tris (pH 8), 10 mM MgCl2, 2,2 mM ATP, 1 mM Phosphoenolpyruvat, 0,6 mg/mL NADH, 75 Einheiten/mL Pyruvatkinase, 105 Einheiten/mL Lactatdehydrogenase und 0,5 mM Substratpeptid (Sequenz: EAIYAAPFAKKK). Reaktionen (75 μL) werden durch Zugabe von ausreichend Kinase gestartet, um die Reaktionen auf eine 30 nM Kinasekonzentration zu bringen, und die Abnahme der Absorption wird über 30 Minuten bei 30 °C in einem Mikrotiterplatten-Spektrophotometer überwacht. Hemmkonstanten werden durch Zugabe von 3,75 μL Tozasertib (VX-680) in 100 % DMSO oder DMSO allein erhalten. Ki-Werte werden wie folgt berechnet: Ki = IC50 / (1 + [S]/Kd), wobei [S] = [ATP] = 2,2 mM und Kd (von ATP zu Abl) = 70 μM. Diese Werte werden unter Annahme eines Kd (ATP) von 70 μM für Wildtyp- und H396P-Abl-Kinasedomänen berechnet.
Zell-Assay:

[2]
  • Zelllinien

    CAL-62 cells

  • Konzentrationen

    5-500 nM

  • Inkubationszeit

    4 days

  • Methode

    The CAL-62 cells are cultured in the absence (dimethyl sulfoxide, DMSO) or the presence of 500  nM Tozasertib (VX-680) for different periods of time (1-5 days). The dose-dependent effects of this compound on cell proliferation are evaluated by treating the different ATC cells for 4 days with different concentrations of the Aurora inhibitor (5–500  nM). The cells are pulse labeled with 30  mM BrdU for 2  hours before the end of the incubation time. The BrdU incorporation is analyzed by means of a colorimetric immunoassay using the cell proliferation ELISA kit. The results from VX-680-treated cells are compared with those observed in control cells and expressed as a fold of variation versus control.
Tierstudie:

[1]
  • Tiermodelle

    Female athymic NCr-nu mice bearing HL-60 leukemia cells

  • Dosierungen

    50 mg/kg, 75 mg/kg

  • Verabreichung

    Administered via i.p.

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14981513/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18430894/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16424036/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17240048/

Kundenproduktvalidierung

<p>Senescence induction upon PKCι depletion combined with aurora kinase inhibition. ( a) MCF7 cells were transfected as above to deplete PKCι . Two days after transfection, cells were treated for the indicated time period with 400 n M VX-680. Medium with VX-680 was then removed and fresh medium was added. Cells were stained for SA-b -gal activity 5 days after the start of transfection.* indicates a P value <0.05. ( b) MCF7 cells were treated as above. Five days after transfection, cells were fixed and assessed for the presence of gH2AX foci by immunofluorescence microscopy. (c, d) MCF7 cells were treated with dimethyl sulfoxide (DMSO) control or 400 n M VX-680 for the indicated time periods. Total cell lysates were then analyzed by western blotting for levels of p21 and GAPDH (as loading control). A representative blot is shown in panel c. Quantitation of changes in p21 levels (normalized to vehicle-treated controls) is shown in panel d. The data shown are the means ±s.e. of three independent experiments.</p>

Daten von [ Oncogene , 2012 , 31, 3584-96 ]

<p>Senescence induction upon PKCι depletion combined with aurora kinase inhibition in glioblastoma cells. (a, b) U87MG cells were transfected as above to deplete PKCι. Two days after transfection, cells were treated for 72 ( a)or24h (b) with 400 nM VX-680. Medium with VX-680 was then removed and fresh medium was added. Cells were stained for SA-b-gal activity 5 days after the start of transfection. * indicates a P value <0.05. (c) U87MG cells were treated as described in panel a above. Five days after transfection, cells were fixed and assessed for the presence of gH2AX foci by immunofluorescence microscopy. (d) U87MG cells were treated with the dimethyl sulfoxide (DMSO) control or 400 n M VX-680 for the indicated time periods. Total cell lysates were then analyzed by western blotting for levels of p21. The bar graph shows quantitation of p21 levels (normalized to vehicle-treated controls) from three independent experiments. A representative blot is also shown, with lanes aligned to correspond to the labels on the graph.</p>

Daten von [ Oncogene , 2012 , 31, 3584-96 ]

<p>MTT assay reveals a dose-dependent decrease in cell viability in mouse derived brainstem glioma cells treated with VX-680 ( P < 0.001) after 72 h of treatment. The error bars represent the standard deviation. Propidium iodide based cell sorting of mouse derived brainstem glioma cells after 72 h treatment with 5 μM reversine or 100 nM VX-680 respectively reveals increased cell populations with 4N and 8N DNA content as compared to vehicle control.</p>

Daten von [ Brain Pathol , 2012 , 23, 244-53 ]

<p>Treatment of mouse derived brainstem glioma cells for 72 h with 5 μM reversine or 100 nM VX-680 increases cell size compared with vehicle-treated control and leads to irregular-shaped nuclei and micronuclei (F–H). Images F–H represent immunofluorescent staining for GFAP (green) with DAPI counter-stain (blue) and were taken at 400 ×magnification.</p>

Daten von [ Brain Pathol , 2012 , 23, 244-53 ]

Sellecks Tozasertib (VX-680) Wurde zitiert von 139 Publikationen

A patient-derived T cell lymphoma biorepository uncovers pathogenetic mechanisms and host-related therapeutic vulnerabilities [ Cell Rep Med, 2025, S2666-3791(25)00102-8] PubMed: 40147445
Overcoming MET-targeted drug resistance in MET-amplified lung cancer by aurora kinase B inhibition [ Biochim Biophys Acta Mol Cell Res, 2025, 1872(7):120001] PubMed: 40499687
Hedgehog signalling is involved in acquired resistance to KRASG12C inhibitors in lung cancer cells [ Cell Death Dis, 2024, 15(1):56] PubMed: 38225225
Dynamic phosphorylation of FOXA1 by Aurora B guides post-mitotic gene reactivation [ Cell Rep, 2024, 43(9):114739] PubMed: 39276350
The molecular basis of Abelson kinase regulation by its αI-helix [ Elife, 2024, 12RP92324] PubMed: 38588001
Tozasertib activates anti-tumor immunity through decreasing regulatory T cells in melanoma [ Neoplasia, 2024, 48:100966] PubMed: 38237304
Machine learning based androgen receptor regulatory gene-related random forest survival model for precise treatment decision in prostate cancer [ Heliyon, 2024, 10(17):e37256] PubMed: 39296076
Visualization strategies to aid interpretation of high-dimensional genotoxicity data [ Environ Mol Mutagen, 2024, 10.1002/em.22604] PubMed: 38757760
Molecular landscape and functional characterization of centrosome amplification in ovarian cancer [ Nat Commun, 2023, 14(1):6505] PubMed: 37845213
Mitotic Dysregulation at Tumor Initiation Creates a Therapeutic Vulnerability to Combination Anti-Mitotic and Pro-Apoptotic Agents for MYCN-Driven Neuroblastoma [ Int J Mol Sci, 2023, 10.3390/ijms242115571] PubMed: 37958555

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