In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO
40%PEG300
5%Tween80
50%ddH2O
Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.
0.375mg/ml
(1.04mM)
Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 7.5 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution
5% DMSO
95% Corn oil
Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.
0.750mg/ml
(2.09mM)
Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 15 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich. * Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen. * Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)
Vorbereitung von Stammlösungen
Biologische Aktivität
Beschreibung
A-196 ist ein potenter und selektiver Inhibitor von SUV420H1 und SUV420H2 mit IC50-Werten von 0,025 bzw. 0,144 μM; mehr als 100-fach selektiver als andere Histone Methyltransferase und nicht-Epigenetics-Ziele.
Ziele
SUV420H1 (Cell-free assay)
SUV420H2 (Cell-free assay)
25 nM
144 nM
In vitro
In Zellen induziert A-196 eine globale Abnahme von H4K20me2 und H4K20me3 und einen gleichzeitigen Anstieg von H4K20me1, hat jedoch keine Auswirkungen auf andere Histonmodifikationen. Diese Verbindung hemmt die 53BP1-Fokusbildung bei ionisierender Strahlung und reduziert die NHEJ-vermittelte DNA-Bruchreparatur, beeinflusst jedoch nicht die homologiegerichtete Reparatur. Sie hemmt potent SUV420H1 und SUV420H2 bei 1 und 10 μM, zeigt jedoch bei keiner der Konzentrationen Aktivität gegen andere PKMTs im Panel, einschließlich des anderen H4K20-modifizierenden Enzyms, PR-SET7, und solche, die H3K4, H3K9, H3K27 und H3K79 als Substrate verwenden.
U2OS cells are seeded on 6-well plates with 3 μM A-196 or DMSO as a control, and incubated for 48 h. The cells are washed once in 1 X PBS and then lysis buffer (20 mM Tris-HCl pH 7.5, 0.5% Triton X-100, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 10 mM MgCl2, PMSF, protease inhibitors, benzonase) is added to half the cells to create whole cell extract (WCE). The remaining cells are subjected to sequential cellular fractionation. First the cell pellet is resuspended in hypotonic buffer A (10 mM HEPES pH 7.5, 10 mM KCl, 1.5 mM MgCl2, 0.3 M sucrose, 1 mM DTT and protease inhibitors) and then 0.1% triton X-100 is added. The cells are incubated for 15 min on ice and pelleted by centrifugation at 1,500g. The supernatant is clarified by centrifugation at max speed and saved as the cytoplasmic fraction. The pellet is resuspended in buffer B (3 mM EDTA, 3 mM EGTA, 1 mM DTT and protease inhibitors) and incubated on ice for 40 min and then centrifuged at 1,500g for 5 min. The supernatant is clarified and saved as the nucleoplasmic fraction. The pellet is resuspended in lysis buffer and incubated for 5 min at room temperature before being resuspended in 4× loading dye. The final lysate contains the solubilized chromatin fraction.
Referenzen
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28114273/
Sellecks A-196 Wurde zitiert von 8 Publikationen
Telomeres cooperate in zygotic genome activation by affecting DUX4/Dux transcription
[ iScience, 2023, 26(3):106158]
HeLa TI cell-based assay as a new approach to screen for chemicals able to reactivate the expression of epigenetically silenced genes
[ PLoS One, 2021, 16(6):e0252504]
Strategies for improving antitumor response in prostate cancer: BET Bromodomain inhibition and A2A Adenosine Receptor inhibition as methods of targeting prostate
[ Johns Hopkins University, 2019, ]
Strategies for improving antitumor response in prostate cancer: BET Bromodomain inhibition and A2A Adenosine Receptor inhibition as methods of targeting prostate
[ JScholarship, 2019, None]
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