A-674563 HCl

Katalog-Nr.S2670 Charge:S267002

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Technische Daten

Formel

C22H22N4O.CIH
Molekulargewicht 394.9 CAS-Nr. 2070009-66-2
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 72 mg/mL (182.32 mM)
Water 72 mg/mL (182.32 mM)
Ethanol 18 mg/mL (45.58 mM)
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung A-674563 HCl ist ein Akt1-Inhibitor mit einem Ki von 11 nM in zellfreien Assays, mäßig potent gegenüber PKA und >30-fach selektiv für Akt1 gegenüber PKC.
Ziele
Akt1
(Cell-free assay)		 PKA
(Cell-free assay)		 CDK2
(Cell-free assay)		 GSK-3β
(Cell-free assay)		 ERK2
(Cell-free assay)		 Mehr anzeigen
11 nM(Ki) 16 nM(Ki) 46 nM(Ki) 110 nM(Ki) 260 nM(Ki)
In vitro

A-674563 HCl wird aus A-443654 gewonnen, indem das Indol durch einen Phenylrest ersetzt und orale Aktivität erreicht wird. A-674563 verlangsamt die Proliferation von Tumorzellen mit einer EC50 von 0,4 μM. A-674563 hemmt nicht die Akt-Phosphorylierung an sich, blockiert aber die Phosphorylierung von Akt-nachgeschalteten Zielen dosisabhängig. Die durch A-674563 induzierte Akt-Blockade führt zu einer verringerten Phosphorylierung von nachgeschalteten Zielen in STS-Zellen und einer Hemmung des Tumorzellwachstums. A-674563 induziert G2-Zellzyklusarrest und Apoptose in STS-Zellen.

In vivo

A-674563 zeigt keine signifikante monotherapeutische tumorhemmende Aktivität; die Wirksamkeit der Kombinationstherapie ist im Vergleich zur Monotherapie deutlich verbessert. Mit A-674563 behandelte Mäuse (20 mg/kg/bid, p.o.) zeigen ein langsameres Tumorwachstum und eine mehr als 50%ige Abnahme des Tumorvolumens am Ende der Studie im Vergleich zur Kontrollgruppe. A-674563 wird als eine Verbindung mit drastisch verbessertem PK-Profil und einer oralen Bioverfügbarkeit von 67 % bei Mäusen identifiziert, ist jedoch 70-fach weniger aktiv als A-443654.

Merkmale Oral bioverfügbare Verbindung (erreicht durch Ersetzen von Indol von A-443654 durch Phenylanteil) und etwas weniger selektiv für Akt gegenüber PKA als A-443654.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:

[1]
  • Akt-Kinase-Assay

    Der Kinase-Assay verwendet His-Akt1 und ein biotinyliertes Maus-Bad-Peptid als Substrat. Der Kinase-Assay wird bei Raumtemperatur 30 Minuten lang in 50 μL Reaktionspuffer [20 mM HEPES, pH 7,5, 10 mM MgCl2, 0,1 % (w/v) Triton X-100, 5 μM ATP (Km = 40 μM), 5 μM Peptid (Km = 15 μM), 1 mM DTT, 60 ng Akt1 und 0,5 μCi [γ-33P]ATP] in Gegenwart verschiedener Konzentrationen von A-674563 durchgeführt. Jede Reaktion wird durch Zugabe von 50 μL Terminationspuffer (0,1 M EDTA, pH 8,0, und 4 M NaCl) gestoppt. Die biotinylierten Bad-Peptide werden auf Streptavidin-beschichteten FLASH-Platten immobilisiert. Nach dem Waschen mit PBS-Tween 20 (0,05 %) wird das auf den FLASH-Platten eingefangene 33P-Phosphopeptid mit einem TopCount Packard Instruments γ-Zähler gemessen.
Zell-Assay:

[1]
  • Zelllinien

    MiaPaCa-2 cells

  • Konzentrationen

    0-30 μM

  • Inkubationszeit

    48 hours

  • Methode

    The cells on 96-well plates are gently washed with 200 μL of PBS. Alamar Blue reagent is diluted 1:10 in normal growth media. The diluted Alamar Blue reagent (100 M) is added to each well on the 96-well plates and incubated until the reaction is complete as per manufacturer's instructions. Analysis is done using an fmax Fluorescence Microplate Reader, set at the excitation wavelength of 544 nm and emission wavelength of 595 nm. Data are analyzed using SOFTmax PRO software provided by the manufacturer.
Tierstudie:

[1]
  • Tiermodelle

    Fasted mice

  • Dosierungen

    20 or 100 mg/kg

  • Verabreichung

    A-674563 is administered 30 minutes before the 1 g/kg glucose challenge.

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15956255/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20582381/
  • http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2932704/

Kundenproduktvalidierung

<p>B cells were pre-treated with the indicated concentrations of A-674563 for 1h prior to R848 treatment (500 ng/ml).  Thymidine incorporation was analyzed 24h later.</p>

, 2012 , Lee lay hoon from National University of Singapore

<p>Akt1 and Akt2 isoforms are required for Wnt5a-induced RhoA activity. a, c Human osteosarcoma cells MG-63 (a) and U20S (c), serum-deprived for 24 h, were pre-treated with 10 nmol/L MK-2206 (Akt inhibitor) for 1 h, were incubated with 100 ng/mL Wnt5a and harvested at 30 min after the start of Wnt5a treatment. The relative RhoA activity was normalized to the average value of LY294002/Wnt5a-untreated group. b, d Serum-deprived MG-63 (b) and U20S cells (d) were pre-treated with 10 nmol/L A-674563 (Akt1 inhibitor) and 10 nmol/L CCT128930 (Akt2 inhibitor) for 1 h, then were incubated with 100 ng/mL Wnt5a and harvested at 30 min after the start of Wnt5a treatment. Data were presented as mean ± SD of 3 determinations. The relative RhoA activity was normalized to the average value of each inhibitor-untreated group</p>

, , Cancer Cell Int, 2017, 17:27

Cell survival was determined using a WST-1 assay in the human lung cancer cells A549 A. and NCI-H358 B. following treatment with either an AKT1 specific inhibitor, A-674563 (black circle and line) or a pan-AKT inhibitor MK-2206 (gray square and line). *p < 0.05.

Daten von [ , , Oncotarget, 2016, 7(3):3297-316 ]

Sellecks A-674563 HCl Wurde zitiert von 29 Publikationen

Medium from human iPSC-derived primitive macrophages promotes adult cardiomyocyte proliferation and cardiac regeneration [ Nat Commun, 2025, 16(1):3012] PubMed: 40148355
Disruption of lysosomal nutrient sensing scaffold contributes to pathogenesis of a fatal neurodegenerative lysosomal storage disease [ J Biol Chem, 2024, 300(2):105641] PubMed: 38211816
Methionine adenosyltransferase2A inhibition restores metabolism to improve regenerative capacity and strength of aged skeletal muscle [ Nat Commun, 2023, 14(1):886] PubMed: 36797255
Functional restoration of lysosomes and mitochondria through modulation of AKT activity ameliorates senescence [ Exp Gerontol, 2023, 173:112091] PubMed: 36657533
Antagonistic effect of cyclin-dependent kinases and a calcium-dependent phosphatase on polyglutamine-expanded androgen receptor toxic gain of function [ Sci Adv, 2023, 9(1):eade1694] PubMed: 36608116
Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
Reducing Akt2 in retinal pigment epithelial cells causes a compensatory increase in Akt1 and attenuates diabetic retinopathy [ Nat Commun, 2022, 13-1:6045] PubMed: 36229454
Cyclin B/CDK1 and Cyclin A/CDK2 phosphorylate DENR to promote mitotic protein translation and faithful cell division [ Nat Commun, 2022, 13(1):668] PubMed: 35115540
Identification of New Vulnerabilities in Conjunctival Melanoma Using Image-Based High Content Drug Screening [ Cancers (Basel), 2022, 14(6)1575] PubMed: 35326726
Akt isoforms differentially provide for chemoresistance in prostate cancer [ Cancer Biol Med, 2021, j.issn.2095-3941.2020.0747] PubMed: 34591413

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