A-769662

A-769662 stimuliert teilweise gereinigte AMPK aus Rattenleber mit einem EC50-Wert von 0,8 µM. Diese Verbindung aktiviert AMPK, die aus mehreren Geweben und Spezies gereinigt wurde, in einer dosisabhängigen Weise mit geringfügigen Variationen der beobachteten EC50-Werte. Die für diese Chemikalie unter Verwendung von teilweise gereinigten AMPK-Extrakten aus Rattenherz, Rattenmuskel oder menschlichen embryonalen Nierenzellen (HEKs) bestimmten EC50-Werte betragen 2,2 mM, 1,9 mM bzw. 1,1 mM. Eine 4-stündige Behandlung von primären Rattenhepatozyten mit dieser Verbindung erhöht die ACC-Phosphorylierung dosisabhängig, was mit einer Hemmung der Fatty Acid Synthase mit einem IC50 von 3,2 µM korrelierte. Es hemmt auch die Fatty Acid Synthase in Maushepatozyten mit einem IC50 von 3,6 µM [1] Diese Verbindung aktiviert AMPK sowohl allosterisch als auch durch Hemmung der Dephosphorylierung von AMPK an Thr-172, ähnlich den Effekten von AMP. [2] Es hemmt die proteasomale Funktion durch einen AMPK-unabhängigen Mechanismus. Diese Chemikalie beeinflusst die In-vitro-Aktivität von gereinigten 26S-Proteasomen, aber nicht die In-vitro-Aktivität von gereinigten 20S-Proteasomen. Sie hat toxische Wirkungen auf MEF-Zellen. [3] Eine aktuelle Untersuchung zeigt, dass diese Verbindung die Zellproliferation und DNA-Synthese hemmt. [4]

Kurzfristige Behandlung von normalen Sprague Dawley Ratten mit A-769662 verringert die Malonyl-CoA-Spiegel in der Leber und das respiratorische Austauschverhältnis, VCO2/VO2, was auf eine erhöhte Rate der Fettsäureoxidation im gesamten Körper hinweist. Die Behandlung von ob/ob-Mäusen mit 30 mg/kg b.i.d. dieser Verbindung verringert die hepatische Expression von PEPCK, G6Pase und FAS, senkt den Plasmaglukosespiegel um 40 %, reduziert die Gewichtszunahme und senkt signifikant sowohl die Plasma- als auch die Leber-Triglyceridspiegel. [1]

• 96-Well AMPK-Assay

  Die AMPK-Aktivität wird durch Überwachung der Phosphorylierung des SAMS-Peptidsubstrats (20 μM in Standardassays und 100 μM in Additivitätsassays) nach einem zuvor beschriebenen Protokoll (Anderson et al., 2004) gemessen. Um festzustellen, ob die A-769662-induzierte AMPK-Aktivierung reversibel ist, werden AMP oder diese Verbindung 10 Minuten lang mit AMPK aus Rattenleber bei 20-fachen Standardassay-Konzentrationen vorinkubiert, bevor sie verdünnt und die AMPK-Aktivität gemessen wird.

  [1]

• Zelllinien

  MEF cells

• Konzentrationen

  300 μM

• Inkubationszeit

  24 hours

• Methode

  Cell viability of MEF cells treated or not with A-769662 is performed as follows: cells are harvested by trypsinization and incubated with 0.5 mg/mL RNase and 50 μg/mL propidium iodine at room temperature in the dark; cell viability is analyzed by flow cytometry using a FACScanto flow cytometer, using an excitation laser at 488 nm and a propidium iodine fluorescence detection at 600 nm. To determine the proportion of cells in each phase of the cell cycle, cells are harvested by trypsinization, collected by centrifugation, washed in PBS and fixed overnight in 80% ethanol at -20 °C. Subsequently, these fixed cells are centrifuged to remove the fixative and incubated for 20 minutes in the dark at room temperature in PBS containing 0.5 mg/mL RNase and 50 μg/mL propidium iodine. Flow cytometry analysis is performed as above. The proportion of cells in G1, S, and G2 is determined using the MODFIT program. Cell culture pictures are taken at the indicated times using a camera coupled to an inverted microscope with a 20 × objective.

• Tiermodelle

  Sprague Dawley rats

• Dosierungen

  30 mg/kg

• Verabreichung

  Administered via i.p.