Opaganib (ABC294640)

Katalog-Nr.S7174 Charge:S717403

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Technische Daten

Formel

C23H25ClN2O
Molekulargewicht 380.91 CAS-Nr. 915385-81-8
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 76 mg/mL (199.52 mM)
Ethanol 28 mg/mL (73.5 mM)
Water Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
10%DMSO 40%PEG300 5%TWEEN80 45%ddH2O

Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.

 24.000mg/ml (63.01mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 100 μL of 240 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 450 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Opaganib (ABC294640) ist ein oral bioverfügbarer und selektiver Sphingosinkinase-2 (SphK2)-Inhibitor mit einer IC50 von ungefähr 60 μM. Diese Verbindung befindet sich in Phase 1/2.
Ziele
SphK2
(Cell-free assay)
60 μM
In vitro Opaganib (ABC294640) verändert das Verhältnis von Ceramid/S1P deutlich, was mit einer Hemmung der SK-Aktivität in MDA-MB-231-Zellen übereinstimmt. Es hemmt die Proliferation von Tumorzellen mit IC50-Werten im Bereich von ungefähr 6 bis 48 μM und beeinträchtigt die Migration von Tumorzellen einhergehend mit dem Verlust von Mikrofilamenten. Diese Verbindung induziert nicht-apoptotischen Zelltod, morphologische Veränderungen in Lysosomen, die Bildung von Autophagosomen und eine Zunahme saurer Vesikel in A-498-, PC-3- und MDA-MB-231-Zellen. Sowohl in MCF-7- als auch in ER-transfizierten HEK293-Zellen verringert es die E2-stimulierte ERE-Luciferase-Aktivität.
In vivo Opaganib (ABC294640) reduziert das Tumorwachstum bei Mäusen mit Brustadenokarzinom-Xenotransplantaten signifikant, was mit einer Depletion der S1P-Spiegel verbunden ist. Bei SCID-Mäusen (severe combined immunodeficient mice) mit A-498-Xenotransplantaten verzögert es das Tumorwachstum und erhöht Autophagie-Marker. Diese Verbindung schützt auch vor lebertransplantationsinduzierter Entzündung und dem Zusammenspiel zwischen angeborener und adaptiver Immunität, wichtigen Ereignissen, die die Transplantatverletzung auslösen und verschlimmern, und verbessert die Leberfunktion und das Überleben.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • Sphingosinkinase-Assays

    Die IC50-Werte für Opaganib (ABC294640) und DMS werden mittels eines neu entwickelten HPLC-basierten SK-Aktivitätstests bestimmt. Kurz gesagt, werden die Testverbindungen mit rekombinantem SK1 oder SK2 und NBD-Sph in den isozymselektiven Assaypuffern inkubiert, die unten detailliert sind, mit 1 mg/ml fettsäurefreiem Rinderserumalbumin, 100 μM ATP und 400 μM MgCl2. Das Produkt, d.h. NBD-S1P, wird von NBD-Sph mittels HPLC wie folgt getrennt: Waters 2795 HPLC-System mit einem Waters 2495 Fluoreszenzdetektor, C8 Chromolith RP-8e Säule (100 × 4,6 mm), 1 ml/min mobile Phase (Acetonitril/20 mM Natriumphosphatpuffer, pH 2,5, bei 45:55). Die Fluoreszenz wird bei einer Anregung von 465 nm und einer Emission von 531 nm überwacht. Das Verhältnis von NBD-S1P/(NBD-Sph + NBD-S1P) wird als Maß für die SK-Aktivität verwendet. Die SK-Isozym-selektiven Assaypuffer enthielten jeweils 20 mM Tris, pH 7,4, 5 mM EDTA, 5 mM EGTA, 3 mM β-Mercaptoethanol, 5% Glycerin, 1× Proteaseinhibitoren und 1× Phosphataseinhibitoren. Für den SK1-Assaypuffer wird 0,25% (final) Triton X-100 hinzugefügt; und für den SK2-Puffer wird 1 M (final) KCl hinzugefügt. Die Assays werden 2 Stunden bei Raumtemperatur durchgeführt, und dann wird ein 1,5-faches Volumen Methanol hinzugefügt, um die Kinase-Reaktion zu beenden. Nach 10 Minuten werden die Proben bei 20.000 g zentrifugiert, um das präzipitierte Protein abzuscheiden, und die Überstände werden mittels HPLC analysiert. In Experimenten zur Bestimmung des Ki für die Hemmung von SK2 durch diese Verbindung wird das ADP Quest Assay-System verwendet, um die Kinase-Aktivität in Gegenwart variierender Konzentrationen von Sphingosin und ihr zu messen. Um die Auswirkungen von Opaganib auf die zelluläre SK-Aktivität zu bestimmen, werden nahezu konfluente MDA-MB-231-Zellen über Nacht serumgehungert und dann mit variierenden Konzentrationen von ihm behandelt. Die Zellen werden dann mit [3H]Sphingosin in einer Endkonzentration von 1 μM inkubiert. Die Zellen nehmen das exogene Sphingosin auf, das über die SK-Aktivität in S1P umgewandelt wird, und [3H]S1P wird durch Extraktion von [3H]Sphingosin getrennt und durch Szintillationszählung quantifiziert.
Zell-Assay:[1]
  • Zelllinien

    1025LU, Hep-G2, A-498, MCF-7, Caco-2, MDA-MB-231, HT-29, Panc-1, DU145, T24, and SK-OV-3 cell lines

  • Konzentrationen

    ~50 μM

  • Inkubationszeit

    72 h

  • Methode

    To determine the effects of the test compounds on proliferation, cells are plated into 96-well microtiter plates and allowed to attach for 24 h. Varying concentrations of Opaganib (ABC294640) are added to individual wells and the cells are incubated for an additional 72 h. At the end of this period, the number of viable cells is determined by use of the sulforhodamine-binding assay. The percentage of cells killed is calculated as the percentage decrease in sulforhodamine-binding compared with control cultures. Regression analyses of inhibition curves are performed by use of GraphPad Prism.
Tierstudie:[1]
  • Tiermodelle

    Female BALB/c mice bearing JC tumors

  • Dosierungen

    ~100 mg/kg

  • Verabreichung

    p.o.

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20061445/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20179157/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20861237/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22848628/

Kundenproduktvalidierung

Macrophages treated with ABC294640 at concentrations of 0, 0.5, 1, 5, 10, 50, or 100 nM. Ratios of OD/OD (NC) are presented as means ± standard deviation. *p < 0.05 vs. NC group (1‰ DMSO).

Daten von [ , , Inflammation, 2018, 41(4):1498-1507 ]

Sellecks Opaganib (ABC294640) Wurde zitiert von 22 Publikationen

Sphingosine kinase 1 promotes M2 macrophage infiltration and enhances glioma cell migration via the JAK2/STAT3 pathway [ Sci Rep, 2025, 15(1):4152] PubMed: 39900970
Comprehensive metabolomics expands precision medicine for triple-negative breast cancer [ Cell Res, 2022, 10.1038/s41422-022-00614-0] PubMed: 35105939
Injectable cartilage matrix hydrogel loaded with cartilage endplate stem cells engineered to release exosomes for non-invasive treatment of intervertebral disc degeneration [ Bioact Mater, 2022, 15:29-43] PubMed: 35386360
The central role of Sphingosine kinase 1 in the development of neuroendocrine prostate cancer (NEPC): A new targeted therapy of NEPC [ Clin Transl Med, 2022, 12(2):e695] PubMed: 35184376
The sphingosine kinase inhibitor SKI-V suppresses cervical cancer cell growth [ Int J Biol Sci, 2022, 18(7):2994-3005] PubMed: 35541904
Targeting sphingosine kinase 1/2 by a novel dual inhibitor SKI-349 suppresses non-small cell lung cancer cell growth [ Cell Death Dis, 2022, 13(7):602] PubMed: 35831279
Upregulated flotillins and sphingosine kinase 2 derail AXL vesicular traffic to promote epithelial-mesenchymal transition [ J Cell Sci, 2022, 135(7)jcs259178] PubMed: 35394045
Overcoming enzalutamide resistance in metastatic prostate cancer by targeting sphingosine kinase [ EBioMedicine, 2021, 72:103625] PubMed: 34656931
SPHK Inhibitors and Zoledronic Acid Suppress Osteoclastogenesis and Wear Particle-Induced Osteolysis [ Front Pharmacol, 2021, 12:794429] PubMed: 35237148
SphK2/S1P Promotes Metastasis of Triple-Negative Breast Cancer Through the PAK1/LIMK1/Cofilin1 Signaling Pathway [ Front Mol Biosci, 2021, 8:598218] PubMed: 33968977

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