Afatinib Dimaleate

Katalog-Nr.S7810 Charge:S781001

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Technische Daten

Formel

C24H25ClFN5O3.2C4H4O4
Molekulargewicht 717.18 CAS-Nr. 850140-73-7
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (139.43 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Afatinib Dimaleate hemmt irreversibel EGFR/HER2, einschließlich EGFR(wt), EGFR(L858R), EGFR(L858R/T790M) und HER2 mit IC50-Werten von 0,5 nM, 0,4 nM, 10 nM bzw. 14 nM; 100-fach aktiver gegen Gefitinib-resistenten L858R-T790M EGFR-Mutanten. Afatinib (BIBW2992) Dimaleate induziert Autophagy.
Ziele
EGFR (L858R)
(Cell-free assay)		 EGFR (wt)
(Cell-free assay)		 EGFR (L858R/T790M)
(Cell-free assay)		 HER2
(Cell-free assay)
0.4 nM 0.5 nM 10 nM 14 nM
In vitro BIBW2992 ist wirksamer als Erlotinib, Gefitinib oder Lapatinib bei der Hemmung des Überlebens von Lungenkrebszelllinien, die Wildtyp (H1666) oder L858R/T790M (NCI-H1975) EGFR aufweisen. BIBW2992 ist ähnlich wirksam gegen NSCLC-Linien, die HER2 776insV (NCI-H1781) oder EGFR E746_A750del (HCC827) exprimieren, zeigt aber keine Aktivität gegenüber A549-Zellen, die Wildtyp EGFR und HER2 exprimieren. Afatinib verstärkt die Zytotoxizität von Topotecan und Mitoxantron gegenüber SP-Zellen und erhöht die durch Topotecan und Mitoxantron induzierte Apoptose in SP-Zellen.
In vivo Im MDA-MB-453 Xenograft-Modell führt BIBW2992 (20 mg/kg, p.o.) zu einer dramatischen Tumorrückbildung mit einem kumulativen Tumorvolumenverhältnis (T/C-Verhältnis) von 2 % und einer Herunterregulierung der EGFR- und AKT-Phosphorylierung. In A7-, A431-, FaDu-, UT-SCC-14- und UT-SCC-15-Xenograft-Modellen führt die Anwendung von BIBW 2992 (30 mg/kg, p.o.) zu einer signifikanten Verlängerung der Tumorwachstumszeit. Im HER2-amplifizierten Xenograft-Modell führt Afatinib (30 mg/kg, p.o.) zu einer deutlichen Hemmung des Tumorwachstums und einer signifikanten Verbesserung der Dauer des Gesamtüberlebens. Im HER2-positiven Magenkrebs-Xenograft NCI-N87 führt Afatinib (25 mg/kg, p.o.) innerhalb von 4 Tagen zu einer dramatischen Tumorrückbildung und nach 21 Tagen Behandlung zu einer nahezu vollständigen Tumorauflösung.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • In-vitro-Kinaseaktivitätsassay

    EGFR-Kinase: Jede 100 µL Enzymreaktion enthielt 10 μL Inhibitor in 50 % Me2SO, 20 μL Substratlösung (200 mM HEPES pH 7,4, 50 mM Mg-Acetat, 2,5 mg/mL Poly (EY), 5 μg/mL Bio-pEY) und 20 µL Enzympräparation. Die enzymatische Reaktion wird durch Zugabe von 50 µL einer 100 µM ATP-Lösung in 10 mM MgCl2 gestartet. Die Assays werden 30 min bei Raumtemperatur durchgeführt und durch Zugabe von 50 µL Stopplösung (250 mM EDTA in 20 mM HEPES pH 7,4) beendet. 100 µL werden auf eine Streptavidin-beschichtete Mikrotiterplatte transferiert, nach einer Inkubationszeit von 60 min bei Raumtemperatur wird die Platte mit 200 µL Waschlösung (50 mM Tris, 0,05 % Tween20) gewaschen. Ein 100 µL Aliquot eines HRPO-markierten Anti-PY-Antikörpers (PY20H Anti-Ptyr:HRP) 250 ng/mL wird zu den Vertiefungen gegeben. Nach 60 min Inkubation wird die Platte dreimal mit 200 µL Waschlösung gewaschen. Die Proben werden dann mit einer 100 µL TMB-Peroxidase-Lösung (A:B= 1:1) entwickelt. Die Reaktion wird nach 10 min gestoppt. Die Platte wird in einen ELISA-Reader transferiert und die Extinktion bei OD450nm gemessen. HER2-IC-Enzym: Die Enzymaktivität wird in An- oder Abwesenheit von seriellen Inhibitorverdünnungen in 50 % Me2SO bestimmt. Jede 100 µL Reaktion enthält ähnliche Komponenten wie für den EGFR-Kinase-Assay beschrieben, mit Zusatz von 1000 µM Na3VO4. Die enzymatische Reaktion wird durch Zugabe von 50 µL einer 500 µM ATP-Lösung in 10 mM Mg-Acetat gestartet. Die Verdünnung des Enzyms wird so eingestellt, dass die Phosphatinkorporation in Bio-pEY linear bezüglich Zeit und Enzymmenge ist. Die Enzympräparation wird in 20 mM HEPES pH 7,4, 130 mM NaCl, 0,05 % Triton X-100, 1 mM DTT und 10 % Glycerin verdünnt. Die Assays werden 30 min bei Raumtemperatur durchgeführt und durch Zugabe von 50 µL Stopplösung beendet. Src-Kinase-Assays: Jede 100 µL Reaktion enthielt 10 µL Inhibitor in 50 % Me2SO, 20 µL Enzympräparation, 20 µL Substratlösung ergänzt mit 1000 µM Na3VO4. Die enzymatische Reaktion wird durch Zugabe von 50 µL einer 1000 µM ATP-Lösung in 10 mM Mg-Acetat gestartet. BIRK-Kinase-Assay: 250 mM Tris pH 7,4, 10 mM DTT, 2,5 mg/mL Poly(EY), 5 mg/mL Bio-pEY wird als Substratlösung verwendet, und die enzymatische Reaktion wird durch Zugabe von 50 µL einer 2 mM ATP-Lösung in 8 mM MnCl2, 20 mM Mg-Acetat gestartet. VEGF2- und HGFR-Kinase-Assays: Die Assays werden 20 Minuten bei Raumtemperatur durchgeführt und durch Zugabe von 10 µL 5 % H3PO4 beendet. Der Niederschlag wird dann auf GF/B-Filtern unter Verwendung eines 96-Well-Filter-Mate-Universal-Harvester aufgefangen. Nach ausgiebigem Waschen wird die Filterplatte 1 Stunde bei 50 °C getrocknet, versiegelt und die inkorporierte Radioaktivität wird durch Szintillationszählung unter Verwendung eines TopCount™- oder eines Microbeta b-Zählers™ bestimmt.
Zell-Assay:[2]
  • Zelllinien

    SP and NSP cell lines

  • Konzentrationen

    1 μM

  • Inkubationszeit

    48 h

  • Methode

    Cytotoxicity is determined using MTT assay. The IC 50 value is defined as the drug concentration resulting in 50% cell death. Both the fitted sigmoidal dose response curve and IC50 are calculated by Bliss method.
Tierstudie:[4]
  • Tiermodelle

    SCID mice harbouring ARK2 xenografts

  • Dosierungen

    25 mg/kg

  • Verabreichung

    p.o.

Referenzen

  • http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2748240/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24972892/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25444177/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25268372/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23578997/

Kundenproduktvalidierung

<p>Inhibition of signaling pathway activation in lung tumor cell lines by kinase inhibitors. Lung tumor cells were cultured in 10% FBS until reaching ∼80% confluence and then the cells were starved in serum-free medium for overnight, followed by 4-hour treatment with the inhibitors. Cell lysates were then prepared and used for determination of the pathway activation signals by the CEER assay.</p>

Daten von [ Int J Proteomics , 2011 , 215496 ]

<p>Inhibition of anchorage-independent growth of lung tumor cell lines by selected inhibitors. Each selected cell line was treated with the indicated inhibitor at 0.1 μM and 1 μM concentrations for two weeks and cell colony size formation was scored under the Nikon inverted-phase microscope.</p>

Daten von [ Int J Proteomics , 2011 , 215496 ]

(F) Stably transduced MCF10A cells were treated with the indicated drugs at 100 nM for 4 h in EGF- and serum-free media. Cell lysates were subjected to immunoblot analyses with the indicated antibodies.

Daten von [ , , Cancer Discov, 2017, 7(6):575-585 ]

Immunoblotting of lysates from EGFR L858R and EGFR L858M/L861Q NIH-3T3 cells treated with the indicated concentrations of gefitinib, osimertinib, or afatinib. The ratio of phospho-EGFR in treated vs. untreated samples was quantified by densitometry for each cell line.

Daten von [ , , J Thorac Oncol, 2017, 12(5):884-889 ]

Sellecks Afatinib Dimaleate Wurde zitiert von 173 Publikationen

Human fetal brain self-organizes into long-term expanding organoids [ Cell, 2024, 187(3):712-732.e38] PubMed: 38194967
Clinical efficacy and identification of factors confer resistance to afatinib (tyrosine kinase inhibitor) in EGFR-overexpressing esophageal squamous cell carcinoma [ Signal Transduct Target Ther, 2024, 9(1):153] PubMed: 38937446
Romidepsin and afatinib abrogate JAK-STAT signaling and elicit synergistic antitumor effects in cutaneous T-cell lymphoma [ J Invest Dermatol, 2024, S0022-202X(23)03210-4] PubMed: 38219917
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
HB-EGF activates EGFR to induce reactive neural stem cells in the mouse hippocampus after seizures [ Life Sci Alliance, 2024, 7(9)e202201840] PubMed: 38977310
Discovery of nontriterpenoids from the rot roots of Panax notoginseng with cytotoxicity and their molecular docking study and experimental validation [ RSC Adv, 2023, 13(16):11037-11043] PubMed: 37033442
Irreversible tyrosine kinase inhibitors induce the endocytosis and downregulation of ErbB2 [ Biochem Biophys Rep, 2023, 34:101436] PubMed: 36824069
Silent mutations reveal therapeutic vulnerability in RAS Q61 cancers [ Nature, 2022, 603(7900):335-342] PubMed: 35236983
Group 3 innate lymphoid cells produce the growth factor HB-EGF to protect the intestine from TNF-mediated inflammation [ Nat Immunol, 2022, 23(2):251-261] PubMed: 35102343
PI3Kγ stimulates a high molecular weight form of myosin light chain kinase to promote myeloid cell adhesion and tumor inflammation [ Nat Commun, 2022, 13(1):1714] PubMed: 35361816

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