Afatinib (BIBW2992)

Katalog-Nr.S1011 Charge:S101114

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Technische Daten

Formel

C24H25ClFN5O3
Molekulargewicht 485.94 CAS-Nr. 850140-72-6
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 97 mg/mL (199.61 mM)
Ethanol 97 mg/mL (199.61 mM)
Water Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Afatinib hemmt EGFR/ErbB irreversibel in vitro mit einer IC50 von 0,5, 0,4, 10, 14, 1 nM für EGFRwt, EGFR L858R , EGFR L858R/T790M ErbB2 (HER2) bzw. ErbB4 (HER4). Diese Verbindung induziert Autophagy.
Ziele
EGFR (L858R)
(Cell-free assay)		 EGFR (wt)
(Cell-free assay)		 ErbB4
(Cell-free assay)		 EGFR (L858R/T790M)
(Cell-free assay)		 HER2
(Cell-free assay)
0.4 nM 0.5 nM 1 nM 10 nM 14 nM
In vitro BIBW2992 zeigt eine potente Aktivität sowohl gegen Wildtyp- als auch gegen mutierte Formen von EGFR und HER2. Es ist ähnlich wie Gefitinib in der Wirksamkeit gegen L858R EGFR, aber etwa 100-mal aktiver gegen die Gefitinib-resistente L858R-T790M EGFR Doppelmutante. Diese Verbindung zeigt potente Effekte auf die Phosphorylierung von EGFR und HER2 in vivo. Es schneidet in allen getesteten Zelltypen, wie der menschlichen epidermoiden Karzinomzelllinie A431, die wt EGFR exprimiert, murinen NIH-3T3-Zellen, die mit wt HER2 transfiziert sind, sowie der Brustkrebszelllinie BT-474 und der Magenkrebszelllinie NCI-N87, die endogenes HER2 exprimieren, besser ab als Referenzverbindungen (wie Lapatinib et al.).
In vivo Die tägliche orale Verabreichung von BIBW2992 in einer Dosis von 20 mg/kg über 25 Tage führt zu einer dramatischen Tumorregression mit einem kumulativen Tumorvolumenverhältnis (T/C-Verhältnis) von 2 %. Eine reduzierte Phosphorylierung von EGFR und AKT wird durch immunhistochemische Färbung von Gewebeschnitten bestätigt. Daher ist diese Verbindung, wie Lapatinib und Neratinib, ein Tyrosine Kinase-Inhibitor (TKI) der nächsten Generation, der humane epidermale Wachstumsfaktorrezeptor 2 (Her2) und Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR)-Kinasen irreversibel hemmt. Es ist nicht nur wirksam gegen EGFR-Mutationen, die von TKIs der ersten Generation wie Erlotinib oder Gefitinib angegriffen werden, sondern auch gegen solche, die gegen diese Standardtherapien unempfindlich sind.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:

[1]
  • In-vitro-Kinaseaktivitätsassays

    Die Wildtyp-Tyrosinkinasedomäne des menschlichen EGFR sowie die des EGFR L858R/T790M Doppelmutanten werden an Glutathion-S-Transferase (GST) fusioniert und extrahiert. Die Enzymaktivität wird dann in Gegenwart des Inhibitors BIBW2992, seriell verdünnt in 50% DMSO, getestet. Ein zufälliges Polymer pEY (4:1) wird als Substrat verwendet und biotinyliertes pEY (bio-pEY) wird als Tracer-Substrat hinzugefügt. Die Kinasedomäne von HER2 wird mit dem Baculovirus-System kloniert und ähnlich wie die der EGFR-Kinase extrahiert. Details zu Assays für EGFR-, HER2-, SRC-, BIRK- und VEGFR2-Kinaseaktivität sind in den Zusatzinformationen verfügbar.
Zell-Assay:

[1]
  • Zelllinien

    NSCLC cells

  • Konzentrationen

    0-10 μM

  • Inkubationszeit

    1 hour

  • Methode

    1 × 104 NSCLC cells are transferred into each well of a 96-well plate and cultured overnight in serum-free media for the EGFR phosphorylation assay. After addition of this compound on the next day, the plates are incubated at 37 °C for 1 hour. EGF-stimulation is done using 100 ng/mL for 10 min at room temperature. Cells are washed with ice cold PBS, extracted with 120 μL HEPEX buffer per well and shaken at room temperature for 1 hour. In all 2 × 104 cells per well is used for the HER2 phosphorylation assay. Streptavidin precoated plates are coated with anti-EGFR-biotin at 1:100 dilution in blocking buffer and c-erb2/HER2 oncoprotein Ab-5(Clone N24)-Biotin. Cell extracts is then transferred to the antibody-coated wells and incubated at room temperature for 1 hour. Extinction is measured at 450 nm.
Tierstudie:

[1]
  • Tiermodelle

    Athymic NMRI-nu/nu female mice

  • Dosierungen

    20 mg/kg

  • Verabreichung

    Oral administration

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18408761/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24266694/

Kundenproduktvalidierung

<p>Inhibition of signaling pathway activation in lung tumor cell lines by kinase inhibitors. Lung tumor cells were cultured in 10% FBS until reaching ∼80% confluence and then the cells were starved in serum-free medium for overnight, followed by 4-hour treatment with the inhibitors. Cell lysates were then prepared and used for determination of the pathway activation signals by the CEER assay.</p>

Daten von [ Int J Proteomics , 2011 , 2011, 215496 ]

<p>Inhibition of anchorage-independent growth of lung tumor cell lines by selected inhibitors. Each selected cell line was treated with the indicated inhibitor at 0.1 μM and 1 μM concentrations for two weeks and cell colony size formation was scored under the Nikon inverted-phase microscope.</p>

Daten von [ Int J Proteomics , 2011 , 2011, 215496 ]

<p>After starved in serum-free medium for 24h, Breast cancer cells incubated with the indicated concentrations of BIBW2992 for 3h,followed by 15-minute stimolation of 100ng/ml EGF</p>

, , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

Immunoblot analysis of serum starved H2030 cells pre-treated with 500 nM or 1 µM of gefitinib, crizotinib, CP-724714, or afatinib for 12 hr, followed by stimulation with EGF, HGF, NRG1, or their combination (50 ng/ml) for 10 min.

Daten von [ , , Nature, 2016, 534(7609):647-51 ]

Sellecks Afatinib (BIBW2992) Wurde zitiert von 453 Publikationen

Lysosomal EGFR acts as a Rheb-GEF independent of its kinase activity to activate mTORC1 [ Cell Res, 2025, 10.1038/s41422-025-01110-x] PubMed: 40259053
Longitudinal single-cell multiomic atlas of high-risk neuroblastoma reveals chemotherapy-induced tumor microenvironment rewiring [ Nat Genet, 2025, 10.1038/s41588-025-02158-6] PubMed: 40229600
The potential of lazertinib and amivantamab combination therapy as a treatment strategy for uncommon EGFR-mutated NSCLC [ Cell Rep Med, 2025, 6(2):101929] PubMed: 39874964
AP1-mediated reprogramming of EGFR expression triggers resistance to BLU-667 and LOXO-292 in RET-rearranged tumors [ J Exp Clin Cancer Res, 2025, 44(1):154] PubMed: 40405293
Anti-galectin-9 therapy synergizes with EGFR inhibition to reprogram the tumor microenvironment and overcome immune evasion [ J Immunother Cancer, 2025, 13(7)e010926] PubMed: 40664443
Blocking cancer-fibroblast mutualism inhibits proliferation of endocrine therapy resistant breast cancer [ Mol Syst Biol, 2025, 10.1038/s44320-025-00104-6] PubMed: 40341770
PI3K-dependent GAB1/Erk phosphorylation renders head and neck squamous cell carcinoma sensitive to PI3Kα inhibitors [ Cell Death Dis, 2025, 16(1):457] PubMed: 40533463
Exercise-induced adipokine Nrg4 alleviates MASLD by disrupting hepatic cGAS-STING signaling [ Cell Rep, 2025, 44(2):115251] PubMed: 39891907
Rare mutations at EGFR L747 position: molecular characteristics and superior response to afatinib in NSCLC patients [ ESMO Open, 2025, 10(9):105558] PubMed: 40834500
PTEN loss and ERBB2/ERBB3-mediated AKT reactivation drive resistance to MET inhibition in MET-amplified hepatocellular carcinoma [ Cell Oncol (Dordr), 2025, 10.1007/s13402-025-01097-y] PubMed: 40991144

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