Alvespimycin (17-DMAG) Hydrochloride

17-DMAG zeigt eine ~2-fach höhere Potenz gegen menschliches Hsp90 als 17-AAG, mit einer IC50 von 62 nM gegenüber 119 nM. In SKBR3- und SKOV3-Zellen, die das Hsp90-Client-Protein Her2 überexprimieren, verursacht 17-DMAG eine Herunterregulierung von Her2 mit einer EC50 von 8 nM bzw. 46 nM, sowie eine Induktion von Hsp70 mit einer EC50 von 4 nM bzw. 14 nM, was zu einer signifikanten Zytotoxizität mit einer GI50 von 29 nM bzw. 32 nM führt, was mit der Hsp90-Inhibition übereinstimmt. [1] 17-DMAG induziert in Kombination mit Vorinostat synergistisch die Apoptose der kultivierten MCL-Zellen sowie primärer MCL-Zellen, potenter als jeder einzelne Wirkstoff, indem es die Spiegel von Cyclin D1 und CDK4 sowie von c-Myc, c-RAF und Akt deutlich abschwächt. [3] Im Gegensatz zu 17-AAG, das nur für IKKβ in chronischen lymphatischen Leukämie (CLL)-Zellen aktiv ist, führt die 17-DMAG-Behandlung effektiv zu einer Depletion des Hsp90-Client-Proteins, was zu einer verminderten NF-κB p50/p65 DNA-Bindung, einer verringerten NF-κB-Zielgen-Transkription und einer Caspase-abhängigen Apoptose führt. Durch die Targeting der NF-κB-Familie vermittelt 17-DMAG selektiv dosis- und zeitabhängige Zytotoxizität gegen CLL-Zellen, aber nicht gegen normale T-Zellen oder NK-Zellen, die für die Immunüberwachung wichtig sind. [5]

Eine 17-DMAG-Behandlung mit 5 mg/kg oder 25 mg/kg dreimal pro Woche reduziert das Tumorwachstum von TMK-1-Xenotransplantaten signifikant, indem sie die Gefäßfläche und die Anzahl proliferierender Tumorzellen in Schnitten signifikant reduziert. [2] In Übereinstimmung mit der Hemmung der FAK-Signalübertragung in vivo unterdrückt die 17-DMAG-Behandlung mit 25 mg/kg dreimal pro Woche das Tumorwachstum und die Metastasierung von ME180- und SiHa-Xenotransplantaten bei Mäusen signifikant. [4] Die Verabreichung von 17-DMAG mit 10 mg/kg über 16 Tage verringert die Anzahl der weißen Blutkörperchen signifikant und verlängert das Überleben in einem TCL1-SCID-Transplantationsmausmodell. [5]

• Fluoreszenzpolarisation (FP)-basierter Kompetitionsbindungsassay

  Dieser Assay verwendet ein Bor-Difluorid-Dipyrromethen (BODIPY)-markiertes Geldanamycin-Analogon (BODIPY-AG) als Sonde und misst die Fluoreszenzpolarisation bei der Bindung der Sonde an ein Protein. Nativ menschliches Hsp90-Protein (α + β Isoformen) wird aus HeLa-Zellen isoliert. Die BODIPY-AG-Lösung wird frisch in FP-Assay-Puffer (20 mM HEPES-KOH, pH 7,3, 1,0 mM EDTA, 100 mM KCl, 5,0 mM MgCl₂, 0,01 % NP-40, 0,1 mg/mL frisches Rinder-γ-Globulin (BGG), 1,0 mM frisches DTT und Proteaseinhibitor aus Stammlösung in DMSO) hergestellt. Kompetitionskurven werden durch Mischen von je 10 μL einer Lösung, die BODIPY-AG und Hsp90 enthält, und einer seriellen Verdünnung von 17-DMAG, frisch in FP-Assay-Puffer aus Stammlösung in DMSO hergestellt, erhalten. Die Endkonzentrationen sind 10 nM BODIPY-AG, 40 oder 60 nM Hsp90, variierende Konzentrationen von 17-DMAG (0,10 nM-10 μM) und ≤0,25 % DMSO in einer 384-Well-Mikroplatte. Nach 3 Stunden Inkubation bei 30 °C wird die Fluoreszenzanisotropie (γ_Ex = 485 nm, γ_Em = 535 nm) auf einem EnVision 2100 Multilabel-Plattenlesegerät gemessen. Der IC50-Wert von 17-DMAG wird aus den Kompetitionskurven erhalten.

• Zelllinien

  Chronic lymphocytic leukemia (CLL)

• Konzentrationen

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

• Inkubationszeit

  24, or 48 hours

• Methode

  Cells are exposed to various concentrations of 17-DMAG for 24, or 48 hours. For the assessment of cytotoxicity, MTT reagent is then added, and plates are incubated for an additional 24 hours before spectrophotometric measurement. Apoptosis is determined by staining with annexin isothiocyanate and propidium iodide (PI).

• Tiermodelle

  SCID mice engrafted with TCL1 leukemia cells

• Dosierungen

  10 mg/kg

• Verabreichung

  Intraperitoneal injection 5 times per week