AMG-900

AMG 900 ist eine neuartige Klasse von ATP-kompetitiven Phthalazinamin-Kleinmolek l-Inhibitoren von aurora kinases. In HeLa-Zellen hemmt AMG 900 die Autophosphorylierung von Aurora-A und -B sowie die Phosphorylierung von Histon H3 an Ser, einem proximalen Substrat von Aurora-B. Die erwiegende zellul e Reaktion von Tumorzellen auf die Behandlung mit AMG 900 ist eine abgebrochene Zellteilung ohne verl gerten Mitose-Arrest, was letztendlich zum Zelltod f\hrt. AMG 900 hemmt die Proliferation von 26 Tumorzelllinien, einschlie lich Zelllinien, die gegen andere aurora kinase-Inhibitoren (AZD1152, MK-0457 und PHA-739358) resistent sind, bei niedrigen nanomolaren Konzentrationen (etwa 2-3 nM). Darer hinaus ist AMG 900 in einer AZD1152-resistenten HCT116-Variantenzelllinie aktiv, die eine Aurora-B-Mutation (W221L) aufweist. [1]

Die orale Verabreichung von AMG 900 blockiert die Phosphorylierung von Histon H3 dosisabh gig und hemmte signifikant das Wachstum von HCT116-Tumorxenotransplantaten. AMG 900 ist in mehreren Xenotransplantatmodellen weitgehend aktiv, einschlie lich 3 multiresistenten Xenotransplantatmodellen, die 5 Tumortypen repr sentieren. [1] AMG 900 weist eine geringe bis moderate Clearance und ein kleines Verteilungsvolumen auf. Seine terminale Eliminationshalbwertszeit lag zwischen 0,6 und 2,4 Stunden. AMG 900 wird bei n chternen Tieren gut resorbiert mit einer oralen Bioverf keit von 31 % bis 107 %. Die Nahrungsaufnahme hat einen Einfluss auf die Rate (Ratten) oder das Ausma (Hunde) der oralen Resorption von AMG 900. Die Clearance und das Verteilungsvolumen im Steady State beim Menschen werden auf 27,3 mL/h/kg bzw. 93,9 mL/kg gesch zt. AMG 900 zeigt akzeptable PK-Eigenschaften bei pr\nischen Spezies und wird voraussichtlich eine geringe Clearance beim Menschen aufweisen. [2]

• Enzymkinasetests

  Rekombinante GST- oder His-getaggte Aurora-A (TPX2) und Aurora-B-Proteine werden unter Verwendung eines Baculovirus-Systems exprimiert und mittels Affinit schromatographie gereinigt. Die AMG 900-Aktivit wird mittels eines standardisierten homogenen zeitaufgelten Fluoreszenz (HTRF)-Assays bewertet. Enzymtests f 24 weitere Kinasen (Aurora-C, p38 , TYK2, JNK2, JAK3, c-Met, VEGFR2, p38, TIE-2, ABL (T315I), ERK1, BTK, JNK3, CDK5, PKA , JNK1, p70S6K, PKB , MSK1, LCK, SRC, IGFR, JAK2 und c-KIT) werden intern auf hnliche Weise durchgef ht. Die Konzentrationen von Enzym, Peptidsubstrat und ATP in der Reaktion werden in Abh gigkeit von der spezifischen Aktivit der Kinase und den gemessenen K_m-Werten f ihre entsprechenden Substrate optimiert. AMG 900 wird in einem Kinom-Kompetitionsbindungsassay (n = 353 einzigartige Kinasen) von Ambit Biosciences evaluiert. AMG 900 wird zun chst bei einer einzelnen Konzentration von 1000 nM gescreent, und quantitative Bindungskonstanten (Kd) werden f jeden positiven Treffer (< 20 Prozent der Kontrolle) bestimmt.

• Zelllinien

  Different tumor cell lines including NCI-H460, MDA-MB231, MES-SA, NCI-H460 PTX, MDA-MB-231 PTX, MES-SA Dx5, and HCT-15.

• Konzentrationen

  0.5, 5.0, 50 nM

• Inkubationszeit

  48 hours

• Methode

  Tumor cells are treated with AMG 900 for 48 hours, washed twice with complete media, and cells are replated at a density of 5000 cells per well in drug-free complete media. Cells are grown until the DMSO control wells are confluent. Cells are stained with crystal violet dye, washed with distilled water, and imaged using a digital scanner.

• Tiermodelle

  Nude mice bearing established HCT116 tumors

• Dosierungen

  3.75, 7.5, or 15 mg/kg

• Verabreichung

  Orally administered