In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich. * Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen. * Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)
Vorbereitung von Stammlösungen
Biologische Aktivität
Beschreibung
AMG319 ist ein potenter und selektiver PI3Kδ-Inhibitor mit einer IC50 von 18 nM und einer >47-fachen Selektivität gegenüber anderen PI3Ks. Phase 2.
Ziele
PI3Kδ
PI3Kγ
18 nM
850 nM
In vitro
AMG319 hemmt die Anti-IgM/CD40L-induzierte B-Zell-Proliferation mit einer IC50 von 8,6 nM und reduziert den pAkt-Spiegel mit einer IC50 von 1,5 nM. Diese Verbindung hemmt auch die Anti-IgD-induzierte CD-69-Expression in HWB.
In vivo
Bei weiblichen Lewis-Ratten hemmt AMG319 (3 mg/kg, p.o.) die KLH-induzierte Entzündungsreaktion um 88 %. Bei transgenen (IgMm)-Mäusen hemmt diese Verbindung (, p.o.) in vivo pAKT mit einer IC50 von 1,9 nM.
Ein PI3K-Alphascreen-Assay wird verwendet, um die Aktivität eines Panels von vier Phosphoinositid-3-Kinasen zu messen: PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kγ und PI3Kδ. Enzymreaktionspuffer wird unter Verwendung von sterilem Wasser und 50 mM Tris-HCl, pH 7, 14 mM MgCl2, 2 mM Natriumcholat und 100 mM NaCl hergestellt. 2 mM DTT wird am Tag des Experiments frisch hinzugefügt. Der Alphascreen-Puffer wird unter Verwendung von sterilem Wasser und 10 mM Tris-HCl, pH 7,5, 150 mM NaCl, 0,10 % Tween 20 und 30 mM EDTA hergestellt. Dann wird 1 mM DTT am Tag des Experiments frisch hinzugefügt. Für diesen Assay verwendete Compound-Quellplatten sind 384-Well Greiner Polypropylen-Platten, die Testverbindungen bei 5 mM enthalten und 1:2 über 22 Konzentrationen verdünnt sind. Die Spalten 23 und 24 enthielten nur DMSO, da diese Wells die positiven bzw. negativen Kontrollen umfassten. Quellplatten werden durch Übertragen von 0,5 μL pro Well in 384-Well Optiplates repliziert. Jede PI3K-Isoform wird in Enzymreaktionspuffer auf 2× Arbeitslösungen verdünnt. PI3Kα wird auf 1,6 nM verdünnt, PI3Kβ auf 0,8 nM, PI3Kγ auf 15 nM und PI3Kδ auf 1,6 nM. PI(4,5)P2 wird auf 10 μM verdünnt, und ATP wurde auf 20 μM verdünnt. Dieser 2×-Stock wird in den Assays für PI3Kα und PI3Kβ verwendet. Für den Assay von PI3Kγ und PI3Kδ wird PI(4,5)P2 auf 10 μM verdünnt und ATP auf 8 μM verdünnt, um eine ähnliche 2×-Arbeitslösung herzustellen. Alphascreen-Reaktionslösungen werden unter Verwendung von Beads aus dem Anti-GST-Alphascreen-Kit hergestellt. Zwei 4×-Arbeitslösungen der Alphascreen-Reagenzien werden in Alphascreen-Reaktionspuffer hergestellt. In einem Stock wird biotinyliertes-IP4 auf 40 nM verdünnt und Streptavadin-Donor-Beads auf 80 μg/mL verdünnt. Im zweiten Stock wird PIP3-bindendes Protein auf 40 nM verdünnt und Anti-GST-Akzeptor-Beads auf 80 μg/mL verdünnt. Als Negativkontrolle wird ein Referenzinhibitor in einer Konzentration ≫Ki (40 μM) in Spalte 24 als Negativkontrolle (100 % Hemmung) eingeschlossen. Mit einem 384-Well Multidrop werden 10 μL/Well des 2×-Enzymstocks zu den Spalten 1–24 der Assayplatten für jede Isoform hinzugefügt. Eine Menge von 10 μL/Well des entsprechenden Substrat-2×-Stocks (enthält 20 μM ATP für die PI3Kα- und -β-Assays und 8 μM ATP für die PI3Kγ- und -δ-Assays) wird dann zu den Spalten 1–24 aller Platten hinzugefügt. Die Platten werden dann 20 min bei Raumtemperatur inkubiert. Im Dunkeln werden 10 μL/Well der Donor-Bead-Lösung zu den Spalten 1–24 der Platten hinzugefügt, um die Enzymreaktion zu löschen. Die Platten werden 30 min bei Raumtemperatur inkubiert. Immer noch im Dunkeln werden 10 μL/Well der Akzeptor-Bead-Lösung zu den Spalten 1–24 der Platten hinzugefügt. Die Platten werden dann 1,5 h im Dunkeln inkubiert. Die Platten werden auf einem Envision Multimode-Plattenleser unter Verwendung eines 680 nm Anregungsfilters und eines 520–620 nm Emissionsfilters gelesen.
Impaired airway epithelial barrier integrity was mediated by PI3Kδ in a mouse model of lipopolysaccharide-induced acute lung injury
[ Int Immunopharmacol, 2021, 95:107570]
Topical Application of the PI3Kβ-Selective Small Molecule Inhibitor TGX-221 Is an Effective Treatment Option for Experimental Epidermolysis Bullosa Acquisita
[ Front Med (Lausanne), 2021, 8:713312]
In vivo microscopy reveals macrophage polarization locally promotes coherent microtubule dynamics in migrating cancer cells
[ Nat Commun, 2020, 11(1):3521]
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