In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich. * Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen. * Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)
Vorbereitung von Stammlösungen
Biologische Aktivität
Beschreibung
Apremilast (CC-10004) ist ein potenter und oral aktiver PDE4- und TNF-α-Inhibitor mit einer IC50 von 74 nM bzw. 77 nM.
Ziele
PDE4
TNF-α
74 nM
77 nM
In vitro
Apremilast ist potenter in der Hemmung von PDE4 im Vergleich zu cAMP- oder cGMP-hydrolysierenden Enzymen aus anderen PDE-Familien. Diese Verbindung zeigt ein breites Spektrum an entzündungshemmender Aktivität in einer Vielzahl von Zelltypen, hemmt die Produktion von TNF-α, IL-12 und IL-23 sowie die Reaktionen von NK-Zellen und Keratinozyten. Es wurde festgestellt, dass es die Zymosan-induzierte PMN-Produktion von IL-8 mit einer IC50 von 94 nM hemmt. Diese Chemikalie hemmt die fMLF-induzierte PMN-CD18- und CD11b-Expression mit einer IC50 von 390 nM bzw. 74 nM und hemmt die fMLF-induzierte Adhäsion von PMN an HUVECs mit einer IC50 von 150 nM. Es hemmt die Keratinozyten-TNF-α-Produktion, ohne die Lebensfähigkeit der Keratinozyten, gemessen an den intrazellulären ATP-Spiegeln, zu beeinflussen. .
In vivo
Apremilast ist in Gegenwart menschlicher Mikrosomen stabil (t1/2 > 60 min). Es ist zu 90 % proteingebunden im menschlichen Plasma. Die orale und intravenöse Verabreichung dieser Verbindung bei weiblichen Ratten zeigte, dass es eine gute Pharmakokinetik mit geringer Clearance, einem moderaten Verteilungsvolumen und einer oralen Bioverfügbarkeit von 64 % aufweist. In einem LPS-induzierten TNF-α-Inhibitionsmodell bei Ratten wurde die TNF-α-inhibitorische Fähigkeit dieser Verbindung in vivo untersucht, und die ED50 wurde auf 0,03 mg/kg bestimmt. In einem anderen LPS-induzierten Neutrophilie-Modell bei Ratten zeigte diese Verbindung einen ED50-Bereich von 0,3 mg/kg bis 0,9 mg/kg.
Zellen (1 × 109) werden in PBS gewaschen und in kaltem Homogenisationspuffer (20 mM Tris-HCl, pH 7,1, 3 mM 2-Mercaptoethanol, 1 mM MgCl2, 0,1 mM EGTA, 1 μM PMSF, 1 μg/mL Leupeptin) lysiert. Nach der Homogenisation in einem Dounce-Homogenisator wird der Überstand durch Zentrifugation gesammelt und auf eine Sephacryl S-200-Säule geladen, die in Homogenisationspuffer äquilibriert ist. PDE wird in Homogenisationspuffer eluiert, und die Rolipram-empfindlichen Fraktionen werden gepoolt und in Aliquots gelagert. Die Enzymaktivität wird in 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 5 mM MgCl2 und 1 μM cAMP (wovon 1 % 3H cAMP ist) in Gegenwart unterschiedlicher Inhibitorkonzentrationen bestimmt. Die verwendete Extraktmenge wird vorab bestimmt, um sicherzustellen, dass die Reaktionen im linearen Bereich liegen und weniger als 15 % des Gesamtsubstrats verbraucht werden. Die Reaktionen werden bei 30 °C für 30 Minuten durchgeführt und durch 2-minütiges Kochen beendet. Die Proben werden dann gekühlt und mit Schlangengift (1 mg/mL) bei 30 °C für 15 Minuten behandelt. Nicht verwendetes Substrat wird durch Inkubation mit 200 μL AG1-X8-Harz für 15 Minuten entfernt. Die Proben werden dann bei 3000 U/min für 5 Minuten zentrifugiert und 50 μL der wässrigen Phase zur Zählung entnommen. Jeder Datenpunkt wird doppelt durchgeführt, wobei die Aktivität als Prozentsatz der Kontrolle ausgedrückt wird. Die IC50 wird aus Dosis-Wirkungs-Kurven von drei unabhängigen Experimenten bestimmt.
For proliferation studies, human neonatal foreskin epidermal keratinocytes (HEKn cells) are plated at 3000 cells per well in 96-well flat bottom tissue culture plates for 2 days. HEKn cells are treated with apremilast or 0.1% DMSO as the vehicle control for 1 h before ultraviolet B (UVB) irradiation with 50 mJ/cm2 in a UV Stratalinker 2400, calibrated with 312 nm UVB bulbs. Media and this compound are replaced, and cells are incubated for 18 h. Lysates are transferred to plates and shaken for 2 min before chemiluminescence is read on a TopCount NXT Luminescence Counter.
Sellecks Apremilast Wurde zitiert von 9 Publikationen
Intestinal dysbiosis exacerbates the pathogenesis of psoriasis-like phenotype through changes in fatty acid metabolism
[ Signal Transduct Target Ther, 2023, 8(1):40]
Targeting PDE4 as a promising therapeutic strategy in chronic ulcerative colitis through modulating mucosal homeostasis
[ Acta Pharm Sin B, 2022, 12(1):228-245]
Phosphodiesterase-4 Inhibition Reduces Cutaneous Inflammation and IL-1β Expression in a Psoriasiform Mouse Model but Does Not Inhibit Inflammasome Activation
[ Int J Mol Sci, 2021, 22(23)12878]
Application of a newly-developed cynomolgus macaque BiTE-mediated cytotoxic T-lymphocyte activity assay to various immunomodulatory agents in vitro
[ J Immunotoxicol, 2021, 18(1):154-162]
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