Xevinapant (AT406)

Katalog-Nr.S2754 Charge:S275401

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Technische Daten

Formel

C32H43N5O4
Molekulargewicht 561.71 CAS-Nr. 1071992-99-8
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (178.02 mM)
Ethanol 100 mg/mL (178.02 mM)
Water Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Xevinapant (AT406, ARRY-334543, Debio1143, SM-406) ist ein potenter Smac-Mimetikum und ein Antagonist von IAP (Inhibitor des Apoptose-Proteins über E3 Ubiquitinligase), der an XIAP-BIR3, cIAP1-BIR3 und cIAP2-BIR3 mit Ki von 66,4 nM, 1,9 nM und 5,1 nM bindet, 50- bis 100-fach höhere Affinitäten als das Smac AVPI-Peptid. Phase 1.
Ziele
cIAP1-BIR3
(cell-free assay)		 cIAP2-BIR3
(cell-free assay)		 XIAP-BIR3
(cell-free assay)
1.9 nM(Ki) 5.1 nM(Ki) 66.4 nM(Ki)
In vitro AT-406 ist ein Smac-Mimetikum und scheint das AVPI-Peptid sowohl in Wasserstoffbrückenbindungen als auch in hydrophoben Wechselwirkungen mit XIAP genau nachzuahmen, mit zusätzlichen hydrophoben Kontakten mit W323 von XIAP. AT-406 ist empfindlicher gegenüber diesen IAPs als das Smac AVPI-Peptid, mit 50-100-fach höheren Bindungsaffinitäten. AT-406 (bei 1 μM) stellt die Aktivität von Caspase-9 vollständig wieder her, die durch 500 nM XIAP BIR3 in einem zellfreien System unterdrückt wird. In MDA-MB-231-Zellen induziert AT-406 einen schnellen zellulären cIAP1-Abbau und zieht auch das zelluläre XIAP-Protein herunter. AT-406 hemmt effektiv viele menschliche Krebszelllinien und zeigt IC50-Werte von 144 und 142 nM in MDA-MB-231-Zellen und SK-OV-3-Ovarialzellen, mit geringer Toxizität gegenüber normalen menschlichen Brustepithelzellen (MCF-12F) und primären menschlichen normalen Prostataepithelzellen. AT-406 induziert Apoptosis in MDA-MB-231-Zellen durch Induktion der Aktivierung von Caspase-3 und Spaltung von PARP.
In vivo AT-406 weist gute pharmakokinetische (PK) Eigenschaften und eine orale Bioverfügbarkeit bei Mäusen, Ratten, nicht-humanen Primaten und Hunden auf. Im MDA-MB-231-Xenograft induziert AT-406 effektiv den cIAP1-Abbau und die Prozessierung von Procaspase-8 sowie die Spaltung von PARP in Tumorgeweben bei 100 mg/kg mit guter Verträglichkeit sogar bei 200 mg/kg. AT-406 induziert eine signifikante Tumorwachstumshemmung mit p von 0,0012 bei 100 mg/kg.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:

[1]
  • Fluoreszenzpolarisationsbasierte Assays für XIAP, cIAP1 und cIAP2 BIR3 Proteine

    FL-AT-406 (das fluoreszenzmarkierte AT-406) wird verwendet, um eine Reihe neuer FP-Assays zur Bestimmung der Bindungsaffinitäten von Smac-Mimetika an XIAP, cIAP-1 und cIAP-2 BIR3-Proteine zu entwickeln. Der Kd-Wert von FL-AT-406 zu jedem IAP-Protein wird durch Titrationsexperimente unter Verwendung einer festen Konzentration von FL-AT-406 und unterschiedlicher Proteinkonzentrationen bis zur vollständigen Sättigung bestimmt. Fluoreszenzpolarisationswerte werden mit einem Infinite M-1000 Plattenlesegerät in Microfluor 2 96-Well, schwarzen, runden Mikrotiterplatten gemessen. Zu jeder Vertiefung werden FL-AT-406 (2, 1 und 1 nM für Experimente mit XIAP BIR3, cIAP-1 BIR3 bzw. cIAP-2 BIR3) und unterschiedliche Proteinkonzentrationen zu einem Endvolumen von 125 μL im Assaypuffer (100 mM Kaliumphosphat, pH 7,5, 100 μg/mL bovines γ-Globulin, 0,02% Natriumazid, mit 4% DMSO) hinzugefügt. Die Platten werden gemischt und bei Raumtemperatur 2-3 Stunden mit leichtem Schütteln inkubiert. Die Polarisationswerte in Millipolarisationseinheiten (mP) werden bei einer Anregungswellenlänge von 485 nm und einer Emissionswellenlänge von 530 nm gemessen. Gleichgewichtsdissoziationskonstanten (Kd) werden dann durch Anpassung der sigmoidalen dosisabhängigen FP-Zunahmen als Funktion der Proteinkonzentrationen mit der Software Graphpad Prism 5.0 berechnet. In kompetitiven Bindungsexperimenten für XIAP3 BIR3 wird AT-406 mit 20 nM XIAP BIR3-Protein und 2 nM FL-AT-406 im Assaypuffer (100 mM Kaliumphosphat, pH 7,5; 100 μg/mL bovines γ-Globulin; 0,02% Natriumazid) inkubiert. In kompetitiven Bindungsexperimenten für cIAP1 BIR3-Protein werden 3 nM Protein und 1 nM FL-AT-406 verwendet. In kompetitiven Bindungsexperimenten für cIAP2 BIR3 werden 5 nM Protein und 1 nM FL-AT-406 verwendet. Für jedes kompetitive Bindungsexperiment werden die Polarisationswerte nach 2-3 Stunden Inkubation mit einem Infinite M-1000 Plattenlesegerät gemessen. Der IC50-Wert, die Inhibitorkonzentration, bei der 50% des gebundenen Tracers verdrängt werden, wird aus der Kurve mittels nichtlinearer Kleinste-Quadrate-Analyse bestimmt. Die Kurvenanpassung erfolgt mit der PRISM-Software. Ein Ki-Wert für AT-406 wird berechnet.
Zell-Assay:

[1]
  • Zelllinien

    MDA-MB-231 breast cancer and SK-OV-3 ovarian cancer cell lines

  • Konzentrationen

    ~ 1 μM

  • Inkubationszeit

    4 days

  • Methode

    Cells are seeded in 96-well flat bottom cell culture plates at a density of (3-4) × 103 cells/well with AT-406 and incubated for 4 days. The rate of cell growth inhibition after treatment with different concentrations of AT-406 is determined by assaying with (2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium monosodium salt (WST-8). WST-8 is added to each well to a final concentration of 10%, and then the plates are incubated at 37 °C for 2−3 hours. The absorbance of the samples is measured at 450 nm using a TECAN ULTRA reader. Concentration of AT-406 that inhibited cell growth by 50% (IC50) is calculated by comparing absorbance in the untreated cells and the cells treated with AT-406.
Tierstudie:

[1]
  • Tiermodelle

    MDA-MB-231 xenograft tumors in severe combined immune deficiency (SCID) mice

  • Dosierungen

    10 mg/kg (i.v.), 10 mg/kg (p.o.), 30 mg/kg (p.o.) and 100 mg/kg (p.o.)

  • Verabreichung

    Administered via intravenously (i.v.) or oral gavage (p.o.)

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21443232/

Kundenproduktvalidierung

<p>G, cells treated with the SM406 (1 μmol/L) for 48 hours were subjected to Western blotting.</p>

, , Cancer Res, 2015, 75(8):1736-48.

<p>(C) The U2OS cells were treated with TRAIL for 5 h, and with or without pre-treatment of A(AT406) for 1 h, and transient transfection with c-FLIP-siRNA for 24 h as indicated in the graph.</p>

, , Int J Oncol, 2016, 49(1):153-63.

<p>AT406 is cytotoxic to human pancreatic cancer cells. Panc-1 cells (A-C), Mia-PaCa-2 cells (D), primary human pancreatic cancer cells (“Primary Pan Can”, D) or epithelial HPDE6c7 cells (D) were either left untreated (“Ctrl”, same for all figures) or stimulated with applied concentrations of AT406 (10-1000 nM) for indicated periods of time, cell survival was tested by CellTiter-Glo luminescent assay (A and D) and the clonogenic assay (B); Cell proliferation was tested by BrdU incorporation assay (C). All values were expressed as mean ± SD. For each assay, n = 5. Experiments in this figure were repeated three times, and similar results were obtained. *p < 0.05 vs. group of “Ctrl”.</p>

, , Biochem Biophys Res Commun, 2016, 478(1):293-9.

HepG2 cells were treated with AT406 (10 μM) or plus OSI-027 (“OSI”, 100 nM), cells were further cultured for indicated periods of time, expression of listed proteins was tested by Western blotting assay (A). HepG2 cells transfected with scramble non-sense control siRNA (“NS-siRNA”) or Mcl-1 siRNA (“-1/-2”, 200 nM each, 24 hours) were stimulated with AT406 (10 μM) for indicated periods of time, Mcl-1 expression (B, upper panel); Cell viability (B, lower panel) and cell apoptosis (C) were tested. *indicated statistically significant differences as compared to “Ctrl” group. ##indicated statistically significant differences as compared to “NS-siRNA” group.

Daten von [ , , Oncotarget, 2017, 8(6):9466-9475 ]

Sellecks Xevinapant (AT406) Wurde zitiert von 39 Publikationen

Caspase 9-induced apoptosis enables efficient fetal cell ablation and disease modeling [ Nat Commun, 2025, 16(1):2572] PubMed: 40089478
The cancer-associated SF3B1K700E spliceosome mutation confers enhanced sensitivity to BV-6-induced cytotoxicity [ Cell Death Dis, 2025, 16(1):476] PubMed: 40595498
Potentiating CAR-T bystander killing by enhanced Fas/FasL signaling mitigates antigen escape in heterogeneous tumors [ bioRxiv, 2025, 2025.09.22.677496] PubMed: 41040218
Complex IIa formation and ABC transporters determine sensitivity of OSCC to Smac mimetics [ Cell Death Dis, 2024, 15(11):855] PubMed: 39578442
Combination Treatment of Resistant Acute Promyelocytic Leukemia Cells with Arsenic Trioxide and Anti-Apoptotic Gene Inhibitors [ Pharmaceuticals (Basel), 2024, 17(11)1529] PubMed: 39598439
The Effect of Xevinapant Combined with Ionizing Radiation on HNSCC and Normal Tissue Cells and the Impact of Xevinapant on Its Targeted Proteins cIAP1 and XIAP [ Cells, 2023, 12(12)1653] PubMed: 37371123
Mycoplasma hyorhinis infection promotes TNF-α signaling and SMAC mimetic-mediated apoptosis in human prostate cancer [ Heliyon, 2023, 9(10):e20655] PubMed: 37867861
CD137 (4-1BB) requires physically associated cIAPs for signal transduction and antitumor effects [ Sci Adv, 2023, 9(33):eadf6692] PubMed: 37595047
CD4+ T cell-mimicking nanoparticles encapsulating DIABLO/SMAC mimetics broadly neutralize HIV-1 and selectively kill HIV-1-infected cells [ Theranostics, 2021, 11(18):9009-9021] PubMed: 34522224
Targeting c-IAP1, c-IAP2, and Bcl-2 Eliminates Senescent Glioblastoma Cells Following Temozolomide Treatment [ Cancers (Basel), 2021, 13(14)3585] PubMed: 34298797

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