(R)-(-)-Gossypol (AT-101) acetic acid

Katalog-Nr.S2812 Charge:S281201

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Technische Daten

Formel

C30H30O8.C2H4O2
Molekulargewicht 578.61 CAS-Nr. 866541-93-7
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 116 mg/mL (200.48 mM)
Ethanol 89 mg/mL (153.81 mM)
Water Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung (R)-(-)-Gossypol (AT-101)-Essigsäure, das R-(-)-Enantiomer der Gossypol-Essigsäure, bindet an Bcl-2, Bcl-xL und Mcl-1 mit Ki von 0,32 μM, 0,48 μM und 0,18 μM in zellfreien Assays; hemmt nicht die BIR3-Domäne und BID. AT-101 löst gleichzeitig Apoptose und eine zytoprotektive Art von Autophagy aus. Phase 2.
Ziele
Mcl-1
(Cell-free assay)		 Bcl-2
(Cell-free assay)		 Bcl-xL
(Cell-free assay)
0.18 μM(Ki) 0.32 μM(Ki) 0.48 μM(Ki)
In vitro AT-101 hemmt eine Reihe verschiedener lymphoproliferativer Malignome mit IC50-Werten von 1,2 μM bis 7,4 μM. AT-101 (10 μM) stört das Δψm in einer konzentrations- und zeitabhängigen Weise in einer diffusen großzelligen B-Zell- und in Mantelzell-Lymphomlinien. AT-101 (1 μM oder 2 μM) in Kombination mit Carfilzomib (6 nM oder 10 nM) induziert Apoptosis in HBL-2- und Granta-Zelllinien. AT-101 (20 μM für 24 Stunden) führt zu einer medianen Apoptosis von 72 % und einer Herunterregulierung von Mcl-1 in CLL-Lymphozyten sowohl in Suspensionskultur als auch in Stromazell-Kokultur. Stromazellen exprimieren nicht nachweisbare Spiegel von Anti-Apoptosis, aber hohe Spiegel von aktivierten ERK- und AKT-Proteinen und zeigen eine geringe oder keine Apoptosis mit AT-101. AT-101 induziert Apoptosis in einer zeit- und dosisabhängigen Weise, mit ED50-Werten von 1,9 mM bzw. 2,4 mM in Jurkat T- und U937-Zellen. AT-101 (10 μM) in Kombination mit Strahlung (32 Gy) induziert mehr Apoptosis als Strahlung allein und übertrifft die Summe der Effekte, die durch die Einzelwirkstoffbehandlungen verursacht werden. AT-101 aktiviert SAPK/JNK in einer dosis- und zeitabhängigen Weise. AT-101 (10 µM) induziert Apoptosis durch Aktivierung von Caspase-9, -3 und -7 in VCaP-Zellen. AT-101 (10 µM) verringert die Bcl-2- und Mcl-1-Expression in VCaP-Zellen. AT-101 (< 20 μM) ist in der Lage, das Wachstum von multiplen Myelomzellen zu hemmen, trotz der stimulierenden Wachstumseffekte, die von Stromazellen im Knochenmarkmilieu bereitgestellt werden. AT-101 (10 μM) induziert Apoptosis in multiplen Myelomzellen über die Aktivierung von Caspasen 3, Caspasen 9 und PARP. AT-101 (10 μM) fördert Apoptosis in multiplen Myelomzellen, indem es das Bax/Bcl-2-Verhältnis und das mitochondriale Membranpotential stört.
In vivo AT-101 ist im Plasma mit durchschnittlichen Konzentrationen von 0,49 μM für die 35 mg/kg-Gruppe und 0,39 μM für die 200 mg/kg-Gruppe in SCID-Beige-Mäusen mit RL-DLBCL-Xenograft immer noch nachweisbar. Die maximale Plasmakonzentration von AT-101 wird nach 30 Minuten der Verabreichung des Medikaments bei beiden Dosisstufen beobachtet, wobei die 200 mg/kg-Gruppe eine durchschnittliche Plasmakonzentration aufweist, die fast 4-mal höher ist als die der 35 mg/kg-Gruppe (7,88 μM bzw. 27,78 μM) in SCID-Beige-Mäusen. AT-101 (25 mg/kg bis 100 mg/kg, oral) führt auf unbestimmte Zeit zu einem früheren Beginn des Gewichtsverlusts, der mehr als 10 % des Vorbehandlungsgewichts entspricht, und zum Tod bei SCID-Beige-Mäusen. AT-101 (35 mg/kg, oral pro Tag für 10 Tage) plus intraperitoneales Cyclophosphamid (Cy) und intraperitoneales Rituximab (R) zeigen eine signifikante Tumorkontrolle im Vergleich zu jeder anderen Behandlungsgruppe. AT-101 (15 mg/kg, p.o., 5 Tage/Woche) als Einzelwirkstoff in intakten Mäusen reduziert signifikant die Entwicklung des VCaP-Tumorwachstums im Vergleich zu unbehandelten Tumoren in den Wochen 2 bis 6. AT-101 in Kombination mit chirurgischer Kastration verzögert den Beginn des androgenunabhängigen VCaP-Tumorwachstums im Vergleich zu den Gruppen nur mit Kastration oder nur mit AT-101 bei Mäusen.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • Fluoreszenz-Polarisations-basierter Bindungstest

    Für kompetitive Bindungsexperimente werden Bcl-2-Protein (40 nM) und FAM-Bid-Peptid (2,5 nM) in dem Assaypuffer (100 mM Kaliumphosphat, pH 7,5; 100 μg/mL bovines Gammaglobulin; 0,02 % Natriumazid) vorinkubiert, 5 μL einer Lösung von AT101 in DMSO werden der Bcl-2/FAM-Bid-Lösung in Dynex 96-Well, schwarzen, Rundbodenplatten zugesetzt, um ein Endvolumen von 125 μL zu erhalten. Für jedes Experiment werden eine Kontrolle, die Bcl-2 und Flu-Bid-Peptid (entspricht 0 % Hemmung) enthält, und eine weitere Kontrolle, die nur FAM-Bid enthält, auf jeder Assayplatte eingeschlossen. Nach 4 Stunden Inkubation wurden die Polarisationswerte in Milipolarisationseinheiten (mP) bei einer Anregungswellenlänge von 485 nm und einer Emissionswellenlänge von 530 nm unter Verwendung des Ultra-Plattenlesers gemessen. IC50, die Inhibitorkonzentration, bei der 50 % des gebundenen Peptids verdrängt werden, wird aus der Kurve unter Verwendung einer nichtlinearen Kleinste-Quadrate-Analyse und einer Kurvenanpassung, die mit der GraphPad Prizm 4 Software durchgeführt wurde, bestimmt. Das unmarkierte Bid BH3-Peptid wird als positive Kontrolle verwendet. PF für Bcl-xL-Protein, Bak BH3-Peptid, markiert mit 6-Carboxyfluorescein-Succinimidylester (FAM-Bak) anstelle des FAM-Bim, um das Signal zu maximieren. Es wird festgestellt, dass FAM-Bak eine Kd von 6 nM zu Bcl-xL-Protein hat. Der kompetitive Bindungstest für Bcl-xL ist derselbe wie für Bcl-2 mit folgenden Ausnahmen: 30 nM Bcl-xL-Protein und 2,5 nM FAM-Bak-Peptid im folgenden Assaypuffer: 50 mM Tris-Bis, pH 7,4 und 0,01 % bovines Gammaglobulin. PF für Mcl-1-Protein, FAM-Bid-Peptid und humanes Mcl-1-Protein werden verwendet. Es wird festgestellt, dass FAM-Bid-Peptid mit einer Kd von 1,71 nM an humanes Mcl-1-Protein bindet. Die kompetitiven Bindungstests für Mcl-1 werden auf die gleiche Weise wie die für Bcl-2 durchgeführt, mit folgenden Ausnahmen: 5 nM Mcl-1 und 1 nM Flu-Bid-Peptid im folgenden Assaypuffer: 25 mM Tris, pH 8,0; 150 mM NaCl und 0,05 % Pluronic-Säure
Zell-Assay:[2]
  • Zelllinien

    RL, H9, SKI, HBL-2, Granta and JJN-3 cell lines

  • Konzentrationen

    ~10 μM

  • Inkubationszeit

    72 hours

  • Methode

    Cells are counted and resuspended at an approximate concentration of 3×105 cells/well in a 24-well plate. AT-101 is diluted in DMSO that is maintained at a final concentration of less than 0.5%. Concentrations of AT-101 from 1 nM to 10 μM are used in most experiments. Following incubation at 37 ℃ in a 5% CO2 humidified incubator, 100 μL from each well is transferred to a 96-well opaque-walled plate; cell-Titer-Glo Reagent is added in a 1:1 ratio. Contents are mixed for 2 minutes on an orbital shaker to induce cell lysis. The plates are allowed to incubate at room temperature for 10 minutes before recording luminescence with a Synergy HT Multi-Detection Microplate Reader. In the schedule dependency experiments, serial dilutions of each drug are prepared in ratios relative to their IC50. Cells are preincubated with AT-101 for up to 72 hours, while 4-HC is added for a 24-hour period, being added at time 0, 24 hours, and 48 hours from the start of incubation. Each experiment is performed in triplicate and repeated at least twice.
Tierstudie:[2]
  • Tiermodelle

    SCID beige mice bearing RL-DLBCL xenograft

  • Dosierungen

    100 mg/kg

  • Verabreichung

    Oral gavage

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17034116/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18292288/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18836097/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19852810/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18084610/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18346839/

Kundenproduktvalidierung

<p>(B and C) assessment of antimigration capacity in each group by transwell migration assay. Abbreviations: CDDP, cisplatin; DMSO, dimethyl sulfoxide.</p>

, , Drug Des Devel Ther, 2014, 8:2517-29.

The cellular autophagy induced by the concentration of AT101 (5 μM) and APE1 siRNA was examined by confocal microscopy with the application of Cyto-IDr autophagy detection kit.

Daten von [ , , Oncotarget, 2016, 7(23):34430-41 ]

Effect of AT-101 (AT) on MM cell lines survival. The survival of human (MM-B1, H-Meso-1, and MM-F1) and mouse (#40a) MM cell lines were assessed by the SRB assay after 24, 48, and 72 h of treatment with DMSO or AT-101. The percentage of surviving cells treated with the compound was calculated by normalizing the OD value to that of the control cultures (DMSO). The results are expressed as the means ± SD of three independent experiments performed in triplicate (xp ≤ 0.05, ∗p ≤ 0.01, #p ≤ 0.001 compared with the cultures treated with DMSO).

Daten von [ , , Front Pharmacol, 2018, 9:1269 ]

AT-101 enhances the antimigration ability of CDDP in A549 cells exposed to A549 cell-conditioned medium. Notes: (A) The cell migration assay was conducted using Transwell® plates. A549 cells were treated with the control vehicle, 5 μM CDDP, 5 μM AT-101, or 5 μM AT-101 plus 5 μM CDDP and the supernatants were collected as the tumor conditioned medium. A549 cells were suspended in serum-free Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium. A549 cells were seeded to the upper chambers, and the lower chambers were filled with RPMI 1640 medium containing 10% fetal bovine serum or tumor conditioned medium. After incubation for 18 hours at 37°C, cells were fixed, stained, and analyzed under inverted light microscopy (40× magnification). The number of migrated cells was counted using an inverted microscope. (B) Bar graph showing the migrating cell numbers of different treatment groups. Data are presented as the mean ± standard deviation of at least three independent experiments. **P<0.01 by one-way analysis of variance. Abbreviation: CDDP, cisplatin.

Daten von [ , , Drug Des Devel Ther, 2015, 9:2887-910 ]

Sellecks (R)-(-)-Gossypol (AT-101) acetic acid Wurde zitiert von 20 Publikationen

Follicle stimulating hormone controls granulosa cell glutamine synthesis to regulate ovulation [ Protein Cell, 2024, pwad065] PubMed: 38167949
Pharmacological Targeting of Bcl-2 Induces Caspase 3-Mediated Cleavage of HDAC6 and Regulates the Autophagy Process in Colorectal Cancer [ Int J Mol Sci, 2023, 24(7)6662] PubMed: 37047634
Exploiting ulnerabilities induced b recurrent mutations in chondrosarcoma and giant cell tumour of bone: therapeutic targeting of the altered epigenome and be [ Leiden University The Netherlands, 2023, ] PubMed: None
Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
Lactate Dehydrogenase B Is Required for Pancreatic Cancer Cell Immortalization Through Activation of Telomerase Activity [ Front Oncol, 2022, 12:821620] PubMed: 35669414
Gossypol Acetic Acid Attenuates Cardiac Ischemia/Reperfusion Injury in Rats via an Antiferroptotic Mechanism [ Biomolecules, 2021, 11(11)1667] PubMed: 34827665
AT101 [(-)-Gossypol] Selectively Inhibits MCL1 and Sensitizes Carcinoma to BH3 Mimetics by Inducing and Stabilizing NOXA [ Cancers (Basel), 2020, 12(8):E2298] PubMed: 32824203
Using CETSA assay and a mathematical model to reveal dual Bcl-2/Mcl-1 inhibition and on-target mechanism for ABT-199 and S1. [ Eur J Pharm Sci, 2020, 142:105105] PubMed: 31669390
Comparison of putative BH3 mimetics AT-101, HA14-1, sabutoclax and TW-37 with ABT-737 in platelets. [ Platelets, 2020, 10.1080/09537104.2020.1724276] PubMed: 32079453
Effect of Exosomal APE1 on Sensitivity of NSCLC A549 Cells to Cisplatin [ Cancer Research on Prevention and Treatment, 2020, (7): 492-497] PubMed: None

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