AT7519 HCl

Katalog-Nr.S7808 Charge:S780801

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Technische Daten

Formel

C16H18Cl3N5O2
Molekulargewicht 418.71 CAS-Nr. 902135-91-5
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 52 mg/mL (124.19 mM)
Water 43 mg/mL (102.69 mM)
Ethanol 28 mg/mL (66.87 mM)
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
Saline

Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.

 30.000mg/ml (71.65mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 30 mg of this product to 1 ml of physiological saline (0.9% NaCL solution), mix evenly to make it clear, The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung AT7519 HCl ist ein Multi-CDK-Inhibitor für CDK1, 2, 4, 6 und 9 mit einer IC50 von 10-210 nM in zellfreien Assays. Er ist weniger wirksam gegenüber CDK3 und kaum aktiv gegenüber CDK7. Phase 2.
Ziele
CDK9/CyclinT
(Cell-free assay)		 CDK5/p35
(Cell-free assay)		 CDK2/CyclinA
(Cell-free assay)		 GSK-3β
(Cell-free assay)		 CDK4/CyclinD1
(Cell-free assay)		 Mehr anzeigen
<10 nM 13 nM 47 nM 89 nM 100 nM
In vitro AT7519 ist ein ATP-kompetitiver CDK-Inhibitor mit einem Ki-Wert von 38 nM für CDK1. AT7519 ist inaktiv gegen alle Nicht-CDK-Kinasen mit Ausnahme von GSK3β (IC50 = 89 nM). AT7519 zeigt eine potente antiproliferative Aktivität in einer Vielzahl menschlicher Tumorzelllinien mit IC50-Werten von 40 nM für MCF-7 bis 940 nM für SW620, was mit der Hemmung von CDK1 und CDK2 übereinstimmt. AT7519 induziert dosisabhängige Zytotoxizität in multiplen Myelom (MM)-Zelllinien mit IC50-Werten von 0,5 bis 2 μM nach 48 Stunden, wobei die empfindlichsten Zelllinien MM.1S (0,5 μM) und U266 (0,5 μM) und die resistentesten MM.1R (>2 μM) sind. Es induziert keine Zytotoxizität in peripheren mononukleären Blutzellen (PBMNC). AT7519 überwindet teilweise den proliferativen Vorteil, der durch IL6 und IGF-1 verliehen wird, sowie den schützenden Effekt von Knochenmarksstromazellen (BMSCs). AT7519 induziert eine schnelle Dephosphorylierung von RNA pol II CTD an Serin 2 und Serin 5 und führt zur Hemmung der Transkription, was teilweise zur AT7519-induzierten Zytotoxizität von MM-Zellen beiträgt. AT7519 induziert die Aktivierung von GSK-3β durch Herunterregulierung der GSK-3β-Phosphorylierung, was auch zur AT7519-induzierten Apoptose unabhängig von der Hemmung der Transkription beiträgt.
In vivo Eine zweimal tägliche Dosierung von AT7519 (9,1 mg/kg) führt zur Tumorregression sowohl bei frühen als auch bei fortgeschrittenen s.c.-Tumoren in den HCT116- und HT29-Kolonkarzinom-Xenograftmodellen. Die Behandlung mit AT7519 (15 mg/kg) hemmt das Tumorwachstum und verlängert das mittlere Gesamtüberleben von Mäusen im humanen MM-Xenograft-Mausmodell in Verbindung mit einer erhöhten Caspase-3-Aktivierung.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • In-vitro-Kinase-Assays

    Kinase-Assays für CDK1, CDK2 und GSK3-β werden alle in einem radiometrischen Filterbindungsformat durchgeführt. Assays für CDK5 sind im DELFIA-Format und für CDKs 4 und 6 im ELISA-Format. Für CDKs 1 und 2 werden die relevante CDK und 0,12 μg/mL Histon H1 in 20 mM MOPS, pH 7,2, 25 mM β-Glycerophosphat, 5 mM EDTA, 15 mM MgCl2, 1 mM Natriumorthovanadat, 1 mM DTT, 0,1 mg/mL BSA, 45 μM ATP (0,78 Ci/mmol) und verschiedene Konzentrationen von AT7519 für 2 bzw. 4 Stunden inkubiert. Für GSK3-β werden das relevante Enzym und 5 μM Glykogensynthasepeptid 2 zusammen mit 10 mM MOPS pH 7,0, 0,1 mg/mL BSA, 0,001% Brij-35, 0,5% Glycerin, 0,2 mM EDTA, 10 mM MgCl2, 0,01% β-Mercaptoethanol, 15 μM ATP (2,31 Ci/mmol) und verschiedene Konzentrationen von AT7519 für 3 Stunden inkubiert. Die Assay-Reaktionen werden durch Zugabe eines Überschusses an Orthophosphorsäure gestoppt und unter Verwendung von Millipore MAPH-Filterplatten filtriert. Die Platten werden dann gewaschen, Szintillationsmittel hinzugefügt und die Radioaktivität durch Szintillationszählung auf einem Packard TopCount gemessen. Für CDK5 werden CDK5/p35 und 1 μM eines biotinylierten Histon H1-Peptids (Biotin-PKTPKKAKKL) in 25 mM Tris-HCl, pH 7,5, 2,5 mM MgCl2, 0,025% Brij-35, 0,1 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 15 μM ATP und verschiedene Konzentrationen von AT7519 für 30 Minuten inkubiert. Die Assay-Reaktionen werden mit EDTA gestoppt, auf Neutravidin-beschichtete Platten übertragen und das phosphorylierte Peptid mittels eines polyklonalen Kaninchen-Phospho-CDK1-Substrat-Antikörpers und eines DELFIA Europium-markierten Anti-Kaninchen-IgG-Sekundärantikörpers unter Verwendung zeitaufgelöster Fluoreszenz bei λex=335nm, λem=620nm quantifiziert. Für CDK 4- und 6-Assays werden Platten mit GST-pRb769-921 beschichtet und mit Superblock blockiert. CDK4 oder 6 wird mit 15 mM MgCl2, 50 mM HEPES, pH 7,4, 1 mM DTT, 1 mM EGTA, pH 8,0, 0,02% Triton X-100, 2,5% DMSO und verschiedenen Konzentrationen von AT7519 inkubiert; die Reaktion wird durch Zugabe von ATP initiiert. Nach 30 Minuten werden die Reaktionen durch Zugabe von 0,5 M EDTA pH 8,0 gestoppt. Die Platten werden dann gewaschen und eine Stunde lang mit dem Primärantikörper (anti-p-Rb Serin 780), verdünnt in Superblock, inkubiert, gefolgt von einem Sekundärantikörper (Alkalische Phosphatase-gekoppeltes Anti-Kaninchen) für eine weitere Stunde. Die Platten werden mit dem Attophos-System entwickelt und die Fluoreszenz auf einem Spectramax Gemini Plattenlesegerät bei einer Anregung von 450 nm und einer Emission von 580 nm abgelesen. In allen Fällen werden die IC50-Werte aus replizierten Kurven unter Verwendung der GraphPad Prism Software berechnet.
Zell-Assay:[2]
  • Zelllinien

    MM.1S, MM.1R, RPMI8226, U266, RPMI8266, RPMI-Dox40, OPM1 cells, primary MM cells and PBMNCs

  • Konzentrationen

    Dissolved in DMSO at a concentration of 10 mM, final concentrations 0.25-4 μM

  • Inkubationszeit

    24 or 48 hours

  • Methode

    Cells are incubated with different concentrations of AT7519 for 24 or 48 hours at 37°C. Cell viability is assessed by measuring 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 diphenyl tetrasodium bromide (MTT) dye absorbance. DNA synthesis is measured by tritiated thymidine uptake (3H-TdR). Apoptosis is assessed by using Annexin V/PI staining. The percentage of cells undergoing apoptosis is defined as the sum of early apoptosis (Annexin V-positive cells) and late apoptosis (Annexin V-positive and PI-positive cells
Tierstudie:[2]
  • Tiermodelle

    Male SCID mice inoculated subcutaneously with MM.1S cells

  • Dosierungen

    15 mg/kg/day

  • Verabreichung

    Dosed i.p.

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19174555/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20101221/

Kundenproduktvalidierung

(c) Effect of AT7519 treatment on RNA pol II occupancy at the PRCC gene. MM1.S cells were treated with either DMSO vehicle (blue) or 2 μM AT7519 (brown) for 6 h, followed by RNA pol II ChIP-seq analysis. Twenty-fold magnifications of the rpm/bp scale of these gene tracks are shown in the right panel to show the difference in reads for elongating RNA pol II. TR, RNA pol II traveling ratio.(d) Genome-wide binding average RNA pol II (ChIP-seq) on active promoters and gene bodies following treatment of MM1.S cells with DMSO vehicle (blue) or 2 μM of AT7519 (brown) for 6 h. Magnification of the rpm/bp scale at gene bodies is shown in the inset. The inset includes RNA polymerase II traveling ratio distributions (TR, mean) derived from MM1.S cells treated with DMSO (blue) or 2 μM AT7519 (red).(e) Chemical structures of the pan-CDK inhibitor AT7519 and its biotinylated counterpart bio-AT7519.(f) In vitro kinase assays with recombinant cyclin T-CDK9 complex in the presence of increasing concentrations of AT7519 or bio-AT7519. The derived IC50 values for each compound are shown.(g) Effect of AT7519 and bio-AT7519 on MM1.S cell proliferation. Cells were treated with varying concentrations of drug for 72 h as indicated. The derived EC50 values for each compound are shown.

Daten von [ , , Nat Biotechnol, 2014, 32(1): 92-96. ]

(C) Western blot analyses following treatment with the indicated doses of cyclin-dependent kinase (CDK) inhibitors for apoptosis markers, poly(ADP-ribose) polymerase 1 (PARP-1), caspase 3, cleaved form of caspase 3 and β-actin.

Daten von [ , , Int J Oncol, 2018, 53(2):703-712 ]

Sellecks AT7519 HCl Wurde zitiert von 12 Publikationen

Interleukin-15 enhanced the survival of human γδT cells by regulating the expression of Mcl-1 in neuroblastoma [ Cell Death Discov, 2022, 8(1):139] PubMed: 35351861
O-GlcNAc transferase maintains metabolic homeostasis in response to CDK9 inhibition [ Glycobiology, 2022, cwac038] PubMed: 35708495
Cdk2 suppresses IL-23 expression and the onset of severe acute pancreatitis [ Immun Inflamm Dis, 2022, 10(6):e631] PubMed: 35634959
High-content image-based analysis and proteomic profiling identifies Tau phosphorylation inhibitors in a human iPSC-derived glutamatergic neuronal model of tauopathy [ Sci Rep, 2021, 11(1):17029] PubMed: 34426604
The cyclin-dependent kinase inhibitor AT7519 augments cisplatin's efficacy in ovarian cancer via multiple oncogenic signaling pathways [ Fundam Clin Pharmacol, 2021, 10.1111/fcp.12709] PubMed: 34212421
Development of a miRNA-controlled dual-sensing system and its application for targeting miR-21 signaling in tumorigenesis [ Exp Mol Med, 2020, 10.1038/s12276-020-00537-z] PubMed: 33311703
Inhibition of Cyclin-dependent Kinase (CDK) Decreased Survival of NB4 Leukemic Cells: Proposing a p53-Independent Sensitivity of Leukemic Cells to Multi-CDKs Inhibitor AT7519 [ Iran J Pharm Res, 2020, 19(3):144-155] PubMed: 33680018
Fibroblast growth factor receptor influences primary cilium length through an interaction with intestinal cell kinase [ Proc Natl Acad Sci U S A, 2019, 116(10):4316-4325] PubMed: 30782830
CDK Blockade Using AT7519 Suppresses Acute Myeloid Leukemia Cell Survival through the Inhibition of Autophagy and Intensifies the Anti-leukemic Effect of Arsenic Trioxide [ Iran J Pharm Res, 2019, 18(Suppl1):119-131] PubMed: 32802093
Frequent Genetic Aberrations in the CDK4 Pathway in Acral Melanoma Indicate the Potential for CDK4/6 Inhibitors in Targeted Therapy [Kong Y Clin Cancer Res, 2018, 23(22):6946-6957] PubMed: 28830923

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