Avitinib (Abivertinib)

AC0010 hemmt selektiv aktive EGFR- und T790M-Mutationen mit einer bis zu 298-fachen Potenzsteigerung im Vergleich zu Wildtyp-EGFR. AC0010 hemmte selektiv die Phosphorylierung von mutiertem EGFR mit IC50-Werten von 7,3 nM und 2,8 nM in NCI-H1975- und NIH/3T3_TC32T8-Zellen, etwa 115- bzw. 298-mal empfindlicher als die Hemmung von Wildtyp-EGFR in A431. Die Immunoblotting-Analyse bestätigte, dass AC0010 die EGFR-Tyr1068-Phosphorylierung in NCI-H1975-Zellen potent hemmte, und das Selektivitätsverhältnis beträgt 65-fach für NCI-H1975-Zellen gegenüber A431-Zellen. Zusätzlich zur Hemmung der EGFR-Tyr1068-Phosphorylierung hemmte AC0010 die Phosphorylierung der nachgeschalteten Ziele Akt und ERK1/2, zwei wichtige Kinasen, die an der Proliferation und dem Überleben von Krebszellen beteiligt sind, in NCI-H1975- und HCC827-Zellen. Die Selektivität von AC0010 wurde auch durch Testen seiner Aktivität gegen eine Panel von 349 Kinasen bewertet. Bei einer Konzentration von 1 μM zeigte AC0010 eine Hemmung von mehr als 80% in 33 von 349 einzigartigen Kinase-Assays (9,5%). Kinase-Ziele mit mehr als 80% Hemmung umfassen JAK3, BTK und 5 TEC-Familienmitglieder. Auf zellulärer Ebene ist die Kinase-Inhibitorpotenz jedoch viel geringer als beim enzymatischen Assay. Eine viel schwächere Hemmung wurde in BTK- und JAK3-zellulären Assays mit IC50-Werten von 59 nM und 360 nM beobachtet. Beim Test gegen ein ausgewähltes Panel von 55 Schlüsselmolekularzielen, einschließlich Rezeptoren, Ionenkanälen und Transportern, hemmte AC0010 (1 μM) 5 von 55 Zielen mit über 50% Hemmung der Radioligandenbindung, einschließlich Adenosin A3, L-Typ-Kalzium (Cav1.2)-Kanal, Dopamintransporter, 5-HT2A und 5-HT2B. In zellbasierten Funktionsassays wurde jedoch keine Hemmung für die oben genannten 5 Ziele nachgewiesen, was darauf hindeutet, dass das Risiko einer Off-Target-Bindung von AC0010 bei pharmakologisch relevanten Konzentrationen minimal ist[1].

In einem Xenograft-Modell führte die orale Verabreichung von AC0010 in einer Tagesdosis von 500 mg/kg zu einer vollständigen Remission von Tumoren mit aktiven EGFR- und T790M-Mutationen über 143 Tage ohne Gewichtsverlust. Für die PK-Analyse wurden nach intravenöser Verabreichung von 10 mg/kg AC0010 in NCI-H1975-Xenograft-Modellen die Gesamtkörperclearance und das Verteilungsvolumen von AC0010 auf 5,91 L/h/kg bzw. 14,76 L/kg geschätzt. Die Eliminationshalbwertszeit (t1/2) von AC0010 betrug etwa 1,73 Stunden, was darauf hindeutet, dass AC0010 schnell in Gewebe, einschließlich Tumorgewebe, verteilt wird. Nach oraler Verabreichung von 12,5 mg/kg, 50 mg/kg und 200 mg/kg AC0010 über 1 Tag oder 8 aufeinanderfolgende Tage wurde AC0010 mit einem Tmax von 1 bis 2 Stunden und einer Bioverfügbarkeit von 15,9-41,4% absorbiert. AC0010 und seine Metaboliten zeigen keine Off-Target-Effekte und keine Hautläsionen in Tiermodellen[1]. Avitinib ist bei EGFR T790m(+) NSCLC-Patienten gut verträglich und wirksam. Seine Konzentration im Liquor ist niedrig, und die Durchdringbarkeit der BBB ist schwach. Es zeigte jedoch immer noch eine gute Kontrolle der Hirnmetastasen (BM)[2].

• In-vitro-Kinase-Aktivitätsassay

  Der Kinase-Aktivitätsassay wurde von einem Dienstleister, Reaction Biology Corp (Malvern, PA, USA), durchgeführt. Für den Einzeldosis-Screening-Assay wurde eine AC0010-Konzentration von entweder 1 µM oder 10 µM verwendet. Für die Bestimmung der IC50-Werte wurde ein 10-Konzentrationsgradient von 5,1x10^-11-1,0x10^-6 mol/L für die getesteten Verbindungen eingestellt. Staurosporin diente als Kontrollverbindung zur Überwachung der Assay-Qualität für die Bestimmung der IC50-Werte und den Einzeldosis-Kinase-Aktivitätsassay.

• Zelllinien

  NCI-H1975, HCC827, A431 and NIH/3T3_TC32T8 cells

• Konzentrationen

  --

• Inkubationszeit

  72 h

• Methode

  Cell proliferation was assayed by a cell viability reagent, WST-1. Cells were seeded at optimal density onto 96-well plates and incubated for 24 hours, followed by compound treatment for 72 hours. Cell viability was then assayed by incubating cells with WST-1 reagent for 2~3 hrs.

• Tiermodelle

  Nu/Nu nude mice

• Dosierungen

  12.5 mg/kg, 50 mg/kg and 500 mg/kg

• Verabreichung

  oral