Spebrutinib (AVL-292)

Katalog-Nr.S7173 Charge:S717302

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Technische Daten

Formel

C₂₂H₂₂FN₅O₃

Molekulargewicht

423.44

CAS-Nr.

1202757-89-8

Löslichkeit (25°C)*

In vitro

In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)

Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.	4.250mg/ml (10.04mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 85 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.	0.530mg/ml (1.25mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 10.6 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Biologische Aktivität

Beschreibung

Spebrutinib (AVL-292) ist ein kovalenter, oral aktiver und hochselektiver BTK-Inhibitor mit einer IC50 von <0,5 nM, der eine mindestens 1400-fache Selektivität gegenüber den anderen getesteten Kinasen aufweist. Er befindet sich in Phase 1.

Ziele

BTK
(Cell-free assay)

<0.5 nM

In vitro

Spebrutinib (AVL-292) zeigt eine dosisabhängige Hemmung von Btk mit einer EC50 von 8 nM und nachgeschalteter BCR-Signalgebungskomponenten in Ramos-Zellen. Durch die Hemmung der BTK-Aktivitäten hemmt es ferner die B-Zell-Proliferation mit einer EC50 von 3 nM.

In vivo

In einem Mausmodell für kollageninduzierte Arthritis hemmt Spebrutinib (AVL-292) (3-30 mg/kg, p.o.) dosisabhängig die klinischen Anzeichen entzündlicher Erkrankungen, einschließlich der Reduktion von Gelenk- und Pfotenschwellungen und sichtbarer Rötung der betroffenen Pfoten.

Merkmale

Oral bioverfügbarer BTK-selektiver Inhibitor, der in klinischen Phase-I-Studien zur Behandlung von rezidivierendem oder refraktärem B-NHL, CLL und WM getestet wurde.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:^{^[2]}	Verfahren für den BTK OMNIA Assay Der Omnia-Kontinuum-Assay wird im Wesentlichen wie vom Hersteller beschrieben durchgeführt. Die Assay-Bedingungen sind: 40 μM ATP (1X K_MATP), 10 μM Y5-Sox und 10 nM BTK-Enzym. Kurz gesagt, eine Substratmischung, die 1,13X ATP und das Y5-Sox-Substrat enthält, wird zuerst in 1X Omnia Kinase Reaction Buffer (KRB) hergestellt, der aus 20 mM Tris, pH 7,5, 5 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 5 mM β-Glycerophosphat, 5% Glycerin und 0,2 mM DTT besteht. Für IC50-Messungen von Spebrutinib (AVL-292) werden 5 μL Enzym mit seriell verdünnten (3-fach) Verbindungen, die in 50% DMSO hergestellt wurden, in einer Corning (#3574) 384-Well, weißen, nicht-bindenden Oberflächen-Mikrotiterplatte bei 25°C für 30 Minuten inkubiert. Kinase-Reaktionen werden mit der Zugabe von 45 μL der ATP/Y5-Substratmischung gestartet und bei λex360/λem485 in einem Synergy 4-Plattenleser 60 Minuten lang überwacht. Fortschrittskurven aus jeder Vertiefung werden auf lineare Reaktionskinetik und Fit-Statistik untersucht. Die Anfangsgeschwindigkeit jeder Reaktion wird aus der Steigung eines Plots der relativen Fluoreszenzeinheiten gegen die Zeit bestimmt und dann gegen die Inhibitorkonzentration aufgetragen, um die IC50 mit dem Response, Variable Slope-Modell in GraphPad Prism von GraphPad Software zu schätzen.
Zell-Assay:^{^[2]}	Zelllinien Human B cells Konzentrationen ~1000 nM Inkubationszeit 72 hours Methode A suspension of resting purified naïve human B cells isolated by negative selection in RPMI is prepared at 0.4–0.5 × 10⁶ cells/ml. Cells are mixed together with α-human IgM (final concentration of 5 μg/ml in each well) and vehicle (dimethyl sulfoxide) or Spebrutinib (AVL-292) (final concentrations of 0.01, 0.1, 1.0, 10.0, 100.0, or 1000 nM per well) and seeded in a 96-well plate. This compound is used at the specified concentrations. Cells are incubated for 56 hours in a humidified incubator maintained at 37°C and 5% CO₂. ³H-Thymidine is added (final concentration of 1 μCi in each well) and cells are incubated overnight, harvested, and measured for ³H incorporation. Experiments are performed in triplicate.

Kinase-Assay:^{^[2]}

Verfahren für den BTK OMNIA Assay
Der Omnia-Kontinuum-Assay wird im Wesentlichen wie vom Hersteller beschrieben durchgeführt. Die Assay-Bedingungen sind: 40 μM ATP (1X K_MATP), 10 μM Y5-Sox und 10 nM BTK-Enzym. Kurz gesagt, eine Substratmischung, die 1,13X ATP und das Y5-Sox-Substrat enthält, wird zuerst in 1X Omnia Kinase Reaction Buffer (KRB) hergestellt, der aus 20 mM Tris, pH 7,5, 5 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 5 mM β-Glycerophosphat, 5% Glycerin und 0,2 mM DTT besteht. Für IC50-Messungen von Spebrutinib (AVL-292) werden 5 μL Enzym mit seriell verdünnten (3-fach) Verbindungen, die in 50% DMSO hergestellt wurden, in einer Corning (#3574) 384-Well, weißen, nicht-bindenden Oberflächen-Mikrotiterplatte bei 25°C für 30 Minuten inkubiert. Kinase-Reaktionen werden mit der Zugabe von 45 μL der ATP/Y5-Substratmischung gestartet und bei λex360/λem485 in einem Synergy 4-Plattenleser 60 Minuten lang überwacht. Fortschrittskurven aus jeder Vertiefung werden auf lineare Reaktionskinetik und Fit-Statistik untersucht. Die Anfangsgeschwindigkeit jeder Reaktion wird aus der Steigung eines Plots der relativen Fluoreszenzeinheiten gegen die Zeit bestimmt und dann gegen die Inhibitorkonzentration aufgetragen, um die IC50 mit dem Response, Variable Slope-Modell in GraphPad Prism von GraphPad Software zu schätzen.

Zell-Assay:^{^[2]}

Zelllinien
Human B cells
Konzentrationen
~1000 nM
Inkubationszeit
72 hours
Methode
A suspension of resting purified naïve human B cells isolated by negative selection in RPMI is prepared at 0.4–0.5 × 10⁶ cells/ml. Cells are mixed together with α-human IgM (final concentration of 5 μg/ml in each well) and vehicle (dimethyl sulfoxide) or Spebrutinib (AVL-292) (final concentrations of 0.01, 0.1, 1.0, 10.0, 100.0, or 1000 nM per well) and seeded in a 96-well plate. This compound is used at the specified concentrations. Cells are incubated for 56 hours in a humidified incubator maintained at 37°C and 5% CO₂. ³H-Thymidine is added (final concentration of 1 μCi in each well) and cells are incubated overnight, harvested, and measured for ³H incorporation. Experiments are performed in triplicate.

Referenzen

http://www.celgene.com/pdfs/2011_ASH_AVL-292.pdf
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23709115/

Kundenproduktvalidierung

: , , Allergy, 2017, 72(11):1666-1676

: , , J Biomol Screen, 2015, 20(7):876-886.

Sellecks Spebrutinib (AVL-292) Wurde zitiert von 12 Publikationen

Temporal mapping and pharmacological manipulation of signaling architecture of Tyrosine kinases in Traumatic Brain Injury (TBI) [ oparu, 2023, 10.18725/OPARU-47820]	PubMed: None
Surface-associated antigen induces permeabilization of primary mouse B-cells and lysosome exocytosis facilitating antigen uptake and presentation to T-cells [ Elife, 2021, 10e66984]	PubMed: 34704555
Assessment of the effects of Syk and BTK inhibitors on GPVI-mediated platelet signaling and function [ Am J Physiol Cell Physiol, 2021, 320(5):C902-C915]	PubMed: 33689480
Combining ibrutinib and checkpoint blockade improves CD8+ T-cell function and control of chronic lymphocytic leukemia in Em-TCL1 mice. [ Haematologica, 2020, 10.3324/haematol.2019.238154]	PubMed: 32139435
Differential impact of BTK active site inhibitors on the conformational state of full-length BTK [ Elife, 2020, 9e60470]	PubMed: 33226337
Effects of Inhibitors against Syk-BTK-PI3K Signaling on Platelet Function [ ScholarsArchive@OSU, 2020, 51]	PubMed: N/A
Effects of Inhibitors against Syk-BTK-PI3K Signaling on Platelet Function [ ScholarsArchive@OSU, 2020, None]	PubMed: None
Inhibition of Bruton's Tyrosine Kinase Modulates Microglial Phagocytosis: Therapeutic Implications for Alzheimer's Disease [ J Neuroimmune Pharmacol, 2019, 10.1007/s11481-019-09839-0]	PubMed: 30758770
Improving CLL Vγ9Vδ2-T-cell fitness for cellular therapy by ex vivo activation and ibrutinib [ Blood, 2018, 132(21):2260-2272]	PubMed: 30213872
BTK inhibition is a potent approach to block IgE-mediated histamine release in human basophils. [Smiljkovic D, et al. Allergy, 2017, 10.1111/all.13166]	PubMed: 28328081

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