AZ 628

AZ 628 verhindert die Aktivierung einer Reihe von Tyrosinproteinkinasen, einschließlich VEGFR2, DDR2, Lyn, Flt1, FMS und anderen. AZ 628 unterdrückt das verankerungsabhängige und -unabhängige Wachstum, führt zu einem Zellzyklusarrest und induziert Apoptosis in Kolon- und Melanomzelllinien, die die B-RafV600E-Mutation aufweisen. Das Kreuzreaktivitätsprofil von AZ 628 deutet darauf hin, dass es ähnlich wie AZ 628 antiangiogen wirken könnte, basierend auf der Verhinderung von VEGFR2. [1] AZ 628-resistente Klone sind etwa 100-fach resistenter gegenüber AZ 628 als die Elterzelllinie, mit einer IC50 von etwa 10 μM, verglichen mit 0,1 μM für die Elterzelllinie. Eine effektive Unterdrückung der p-ERK1/2-Spiegel wird in der M14-Elterzelllinie nach Behandlung mit steigenden Konzentrationen von AZ 628 beobachtet. AZ 628-resistente Klone exprimieren erhöhtes CRAF. Erhöhte CRAF-Expression ist ein potenzieller Mechanismus der erworbenen Resistenz gegenüber kontinuierlicher AZ 628-Exposition, was zu einer anhaltenden Aktivierung von ERK1/2 führt. Die p-ERK1/2-Aktivität wird durch die Exposition gegenüber AZ 628 in einer dieser drei AZ 628-unempfindlichen Zelllinien (Wm1552C) nicht signifikant gehemmt. Anders als in den AZ 628-resistenten M14-Zellen, in denen AZ 628 die Aktivierung von ERK nicht unterdrückt, dämpft die AZ 628-Behandlung die ERK-Aktivierung in den NRAS-mutierten Melanomzellen effizient.[2]

• Zelllinien

  M14 expressing the V600E BRAF mutation

• Konzentrationen

  0.01-10 μM

• Inkubationszeit

  Overnight

• Methode

  Approximately 0.5-2.5 × 10⁵ M14 cells are seeded in 12 or 24 - well plates, respectively, in medium supplemented with 5% FBS. After overnight incubation, the cells are treated with various concentrations of AZ628. Fresh medium and drug is replaced every 2 days until the untreated control wells reached confluence. At this time-point, the media is removed and the cells are fixed in 4% formaldehyde in PBS for 20 minutes at room temperature. Cells are then washed twice with PBS and stained with a 1:5000 solution of the fluorescent nucleic acid stain Syto60. Quantitation of fluorescent signal intensity is carried out at 700 nm, using an Odyssey Infrared Imager. Each experiment is performed in quadruplicate and the results shown represent the average of the four values compared to untreated wells. Error bars represent standard deviation of the 4 values from the mean. High-throughput cell growth/viability assays are performed.