In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich. * Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen. * Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)
Vorbereitung von Stammlösungen
Biologische Aktivität
Beschreibung
Zorifertinib (AZD3759) ist ein potenter, oral aktiver, ZNS-gängiger EGFR-Inhibitor mit IC50-Werten von 0,3 nM, 0,2 nM und 0,2 nM für EGFR (WT), EGFR (L858R) und EGFR (Exon 19Del). Diese Verbindung befindet sich in Phase 1.
Ziele
EGFR (L858R) (Cell-free assay)
EGFR (exon 19Del) (Cell-free assay)
EGFR (WT) (Cell-free assay)
0.2 nM
0.2 nM
0.3 nM
In vitro
In H3255 (L858R)-Zellen hemmt Zorifertinib (AZD3759) die EGFR-Phosphorylierung mit einer IC50 von 7,2 nM. Diese Verbindung zeigte eine hemmende Wirkung auf den pEGFR-Signalweg und die Proliferation von EGFR-mutierten Zellen PC-9 und H3255 mit IC50-Werten von 7,7 nM bzw. 7 nM, zeigte jedoch keine signifikante Aktivität gegen die Proliferation von H838-Zellen.
In vivo
Zorifertinib (AZD3759) zeigt eine gute orale Bioverfügbarkeit bei Hunden und dringt ausgiebig in das Gehirn von Affen ein. In einem PC-9 (Exon19Del)-Modell für Hirnmetastasen verursacht diese Verbindung (15 mg/kg) eine signifikante dosisabhängige Antitumorwirksamkeit.
IC50-Bestimmung von Verbindungen gegen EGFR-Enzyme
Die Hemmwirkung von Zorifertinib (AZD3759) gegen EGFR WT- und mutierte Enzyme wird mit dem CisBio homogenen zeitaufgelösten Fluoreszenzansatz (HTRF, Kat.-Nr. 62TK0PEJ) gemäß den Anweisungen des Herstellers bewertet. Die in diesem Assay verwendeten endgültigen Enzymkonzentrationen betragen 0,1 nM, 0,03 nM und 0,026 nM für EGFR Wildtyp, L858R bzw. Exon19Del, und es werden 0,8 μM, 4 μM und 25 μM ATP verwendet, die den Km-Werten der EGFR-Enzyme entsprechen. Kurz gesagt, 3 μL ATP und 2 μM TK-Biotin-Peptid-Substrat werden in Gegenwart oder Abwesenheit von seriell verdünnter Verbindung bei Raumtemperatur in 384-Well Greiner weißen Polystyrol-Assayplatten inkubiert. Die Reaktion wird durch Zugabe von 3 μL Kinase initiiert, die das Substratpeptid phosphorylieren kann, und der Assaypuffer enthält 1 mM DTT, 5 mM MgCl2, 1 mM MnCl2 und 0,01 % CHAPS. Nach 30 Minuten Inkubation wird die Reaktion durch Zugabe von 6 μl Detektionsreagenz-Mischung gestoppt, die 250 nM Strep-XL665 und TK Ab Europium Cryptate, verdünnt in Detektionspuffer, enthält. Die Platten werden 1 Stunde lang inkubiert, bevor die Fluoreszenz dann bei 615 nm bzw. 665 nm mit einer Anregungswellenlänge von 320 nm durch den EnVision Multilabel Reader von Perkin Elmer unter Verwendung der Standard-HTRF-Einstellungen gemessen wird. Das berechnete Signalverhältnis von 665 nm/615 nm ist proportional zur Kinaseaktivität. Die Konzentration dieser Verbindung, die eine 50%ige Hemmung der jeweiligen Kinase (IC50) hervorruft, wird unter Verwendung einer Vier-Parameter-Logistik-Anpassung berechnet.
PC-9 (exon 19Del), H3255 (L858R) and H838 (wt) cells
Konzentrationen
~30 mM
Inkubationszeit
72 h
Methode
Zorifertinib (AZD3759) cell proliferation is determined by MTS methods. Briefly, cells are seeded in 96-well plates (at a density to allow for logarithmic growth during the 72-hour assay) and incubated overnight at 37 °C and 5% CO2. Cells are then exposed to concentrations of this compound ranging from 30 to 0.0003 mM for 72 hours. For the MTS endpoint, cell proliferation is measured by the CellTiter AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay reagent in accordance with the manufacturer’s protocol. Absorbance is measured with a Tecan Ultra instrument. Predose measurements are made, and concentration needed to reduce the growth of treated cells to half that of untreated cells (GI50) values are determined using absorbance readings.
Sellecks Zorifertinib (AZD3759) Wurde zitiert von 6 Publikationen
A Novel Network Pharmacology Strategy Based on the Universal Effectiveness-Common Mechanism of Medical Herbs Uncovers Therapeutic Targets in Traumatic Brain Injury
[ Drug Des Devel Ther, 2024, 18:1175-1188]
Aurora kinase blockade drives de novo addiction of cervical squamous cell carcinoma to druggable EGFR signalling
[ Oncogene, 2022, 10.1038/s41388-022-02256-3]
YH25448, an Irreversible EGFR-TKI with Potent Intracranial Activity in EGFR Mutant Non-Small Cell Lung Cancer
[ Clin Cancer Res, 2019, 25(8):2575-2587]
Brain distribution of a panel of EGFR inhibitors using cassette-dosing in wild-type and Abcb1/Abcg2 deficient mice
[Kim M Drug Metab Dispos, 2019, 10.1124/dmd.118.084210]
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