AZD4547 (Fexagratinib)

Im Vergleich zu FGFR1-3 zeigt AZD4547 eine schwächere Aktivität gegen FGFR4 mit einem IC50-Wert von 165 nM. AZD4547 hemmt nur die rekombinante VEGFR2 (KDR)-Kinaseaktivität mit einem IC50-Wert von 24 nM, im In-vitro-Selektivitätstest gegen ein vielfältiges Panel repräsentativer menschlicher Kinasen. AZD4547 bei 0,1 μM zeigt keine Aktivität gegen eine Reihe rekombinanter Kinasen, einschließlich ALK, CHK1, EGFR, MAPK1, MEK1, p70S6K, PDGFR, PKB, Src, Tie2 und PI3-Kinase. Konsistent wird die potente Selektivität von AZD4547 für FGFR1-3 gegenüber FGFR4, IGFR und KDR auch in zellulären Phosphorylierungstests beobachtet. AZD4547 hat eine potente In-vitro-antiproliferative Aktivität nur gegen Tumorzelllinien, die dereguliert FGFRs exprimieren, wie KG1a, Sum52-PE und KMS11 mit IC50-Werten von 18-281 nM, und ist inaktiv gegen MCF7 sowie mehr als 100 zusätzliche Tumorzelllinien. Die Behandlung mit AZD4547 hemmt potent die FGFR- und MAPK-Phosphorylierung in menschlichen Tumorzelllinien in einer dosisabhängigen Weise. AZD4547 hemmt auch potent die Phosphorylierung von FRS2 und PLCγ, nachgeschalteten Markern der FGFR-Signalgebung. Bemerkenswerterweise beeinflusst AZD4547 die AKT-Phosphorylierung in den Brustzelllinien MCF7 und Sum52-PE, jedoch nicht in den KG1a- und KMS11-Linien. Die Behandlung mit AZD4547 induziert signifikant Apoptose in Sum52-PE- und KMS11-Zellen, erhöht dramatisch den G1-Arrest, aber nicht die Apoptose in KG1a-Zellen, und hat keinen Einfluss auf die Zellzyklusverteilung oder Apoptose in MCF7-Zellen. [1]

Die orale Verabreichung von AZD4547 mit 3 mg/kg zweimal täglich bei Mäusen mit KMS11-Tumoren führt zu einer signifikanten Hemmung des Tumorwachstums von 53 % im Vergleich zu Vehikel-behandelten Kontrollen, und AZD4547 mit 12,5 mg/kg einmal täglich oder 6,25 mg/kg zweimal täglich führt zu einer vollständigen Tumorstase, die mit einer dosisproportionalen pharmakodynamischen Modulation von Phospho-FGFR3 und einer reduzierten KMS11-Tumorzellproliferation verbunden ist. Darüber hinaus führt die orale Verabreichung von AZD4547 mit 12,5 mg/kg einmal täglich zu einer 65%igen Hemmung des Tumorwachstums im FGFR1-Fusions-KG1a-Xenograftmodell. Bei wirksamen Dosen zeigt AZD4547 keine antiangiogenen Effekte. AZD4547 hat keinen signifikanten Einfluss auf den Blutdruck und weist daher keine In-vivo-Anti-KDR-Aktivität auf. Folglich ist die orale Verabreichung von 6,25 mg/kg AZD4547 zweimal täglich in den Cediranib-sensitiven Xenograftmodellen, einschließlich Calu-6, HCT-15 und LoVo, inaktiv. [1]

• AZD4547 Kinaseaktivität

  Die Fähigkeit von AZD4547, die humanen rekombinanten Kinaseaktivitäten von FGFR1-3 zu hemmen, wird unter Verwendung von ATP-Konzentrationen bei oder knapp unter den jeweiligen K_m getestet.

• Zelllinien

  KG1a, Sum52-PE, KMS11, and MCF7

• Konzentrationen

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

• Inkubationszeit

  72 hours

• Methode

  Cells are exposed to various concentrations of AZD4547 for 72 hours. The antiproliferative IC50 values are obtained by MTS proliferation assay. For fluorescence-activated cell sorting (FACS), cells are fixed with 70% ethanol and then incubated with propidium iodide/RNase A labeling solution. Cell cycle profiles are assessed with a FACSCalibur instrument and CellQuest analysis software. For apoptotic analysis, cells and media are gently harvested and centrifuged, followed by washing of cell pellets. Cells are then processed for Annexin V isothiocyanate (FITC) staining and propidium iodide uptake. The proportion of cells staining positive for Annexin V are then assessed with a FACSCalibur instrument and quadrant sorting is done by CellQuest analysis software.

• Tiermodelle

  Female swiss derived nude (nu/nu) and severe combined immunodeficient mice (SCID) injected s.c. with LoVo, HCT-15, Calu-6, KMS11 or KG1a

• Dosierungen

  1.5-50 mg/kg

• Verabreichung

  Oral gavage once daily or twice daily