Bafilomycin A1 (Baf-A1)

Katalog-Nr.S1413 Charge:S141311

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Technische Daten

Formel

C35H58O9
Molekulargewicht 622.83 CAS-Nr. 88899-55-2
Löslichkeit (25°C)* In vitro  
 
 
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
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Biologische Aktivität

Beschreibung Bafilomycin A1 (Baf-A1) ist ein vakuolärer H+-ATPase-Inhibitor mit einer IC50 von 0,44 nM, der Autophagy hemmt und gleichzeitig Apoptosis induziert.
Ziele
H+-ATPase
(Cell-free assay)
0.44 nM
In vitro Bafilomycin A1 (Baf-A1) ist ein toxisches Makrolid-Antibiotikum, das aus Streptomyces griseus gewonnen wird und den durch das äußere Mantel-Epithel (OME) induzierten Kurzschlussstrom hemmt. Die IC50 und die maximale Hemmdosis dieser Verbindung betragen 0,17 μM bzw. 0,5 μM. Darüber hinaus hemmt es den Säureeinstrom mit einem IC50-Wert von 0,4 nM. Es hemmt auch die Ansäuerung dosisabhängig, was zu einem geringeren Quenching und somit zu einer höheren Fluoreszenz führt. Diese Verbindung verhindert die Vakuolisierung von Hela-Zellen, die durch H. pylori induziert wird, mit einer inhibitorischen Konzentration, die 50 % des Maximalwerts (ID50) von 4 nM ergibt, und ist sehr effizient bei der Wiederherstellung eines normalen Aussehens vakuolisierter Zellen. Es beeinflusst auch den Transport von endozytiertem Material von frühen zu späten endozytischen Kompartimenten, indem es nicht nur den niedrigen endosomalen pH-Wert dissipiert, sondern auch den Transport von frühen zu späten Endosomen in HeLa-Zellen blockiert. In Dosen von 0,1-1 μM hemmt es die Ansäuerung von Lysosomen, die durch die Inkubation mit Acridinorange in BNL CL.2- und A431-Zellen sichtbar wird, vollständig. Bei Zugabe zu Hanks' balancierter Salzlösung wird der endogene Proteinabbau stark gehemmt und zahlreiche Autophagosomen reichern sich in H-4-II-E-Zellen an. Es verhindert auch das Auftreten von endozytiertem HRP in autophagischen Vakuolen.
In vivo Bafilomycin A1 (Baf-A1) (1 μM und 0,1 μM) hemmt die resorptive Aktivität kultivierter Osteoklasten vollständig. Diese Verbindung hemmt dosisabhängig die Rate der Na+-Aufnahme bei jungen Tilapia mit einem Ki von 0,16 μM.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:

[2]
  • ATPase-Enzymaktivitäts-Assays

    Das ATPase-Enzymassay-Medium enthält 6 mM MgSO4, 50 mM HEPES (pH 7,4), 200 mM Na2SO3 (V-ATPase-Aktivator), 0,5 mM Natriumorthovanadat (P-ATPase-Inhibitor), 0,5 mM Natriumazid (F-ATPase-Inhibitor) und 3 mM Na2ATP. Dieses Medium (1,0 mL), mit oder ohne Zusatz des V-type ATPase-Inhibitors Bafilomycin A1 (Baf-A1), wird mit dem filtrierten Homogenat (0,1 mL) 60 Minuten lang bei 23–25 °C inkubiert. Die Reaktion wird durch Zugabe von 1 mL TCA 3% gestoppt. Spektrometrische Leerwerte werden wie für den Enzymassay hergestellt, mit der Ausnahme, dass die Gewebeprobe nach der Säure hinzugefügt wird. Die Phosphatanalyse erfolgt durch Zugabe von 2 mL 1-Butanol und 0,2 mL Molybdatlösung (5 g Ammoniummolybdat, 22 mL H2SO4 auf 100 mL). Nach 15-sekündigem Vortexen wird die Lösung mit 0,5 mL Citratlösung (100 g/500 mL, pH 7,0) neutralisiert und erneut 15 Sekunden lang gevortext. Die Lösung wird dann zentrifugiert (2000 × g; 3 Minuten), um die Butanolphase zu trennen, und die Absorptionsrate dieser Phase wird bei 400 nm abgelesen. Orthophosphat-Standards werden hergestellt (0,1 μM–2,0 μM) und auf die gleiche Weise wie die Enzymaktivitätsassays behandelt. Die Enzymaktivität wird in μmol Orthophosphat pro Stunde und pro Milligramm Protein ausgedrückt. Die V-ATPase-Aktivität wird als die Differenz zwischen der gesamten ATPase-Aktivität, gemessen in Gegenwart von Na2SO3, Natriumorthovanadat und Natriumazid, und der ATPase-Aktivität, gemessen in Gegenwart dieser Reagenzien und dieser Verbindung, betrachtet.
Zell-Assay:

[4]
  • Zelllinien

    HeLa cells

  • Konzentrationen

    ~20 nM

  • Inkubationszeit

    20 hours

  • Methode

    H. pylori bacteria extract is treated with inhibitors, before addition to HeLa cells, as follows: DCCD 10 mM for 1 hour at 30 ºC; NBD-CI 100 μM for 1 hour at 30 ºC and the reaction is blocked with glycine 10 mM final concentration; NEM 275 μM for 1 hour at 30 ºC and the reaction is blocked by addition of β-mercaptoethanol 275 mM; Mg-ATP 14 μM for 1 hour at 0 ºC; 100 μM KNO3 and 14 μM Mg-ATP for 1 hour at 30 μM; NaCO3 100 μM, pH 11 for 1 hour at 0 ºC. The bacterial extract is then added to cell with a 40-fold dilution at a final concentration of 0.65 mg/mL. Controls are HeLa cells incubated with untreated bacterial extracts and cells treated with Bafilomycin A1 (Baf-A1) under the same conditions as bacterial extracts, at the same concentrations or after a 40-fold dilution. The vacuotating activity of the bacterial extracts is assayed.
Tierstudie:

[9]
  • Tiermodelle

    Young (approximately 9 days old) Mozambique tilapia, Oreochromis mossambicus

  • Dosierungen

    10 μM

  • Verabreichung

    --

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9684329/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15596387/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17576165/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/8446034/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9811698/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/1832676/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9639028/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/7817803/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10574743/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14713959/

Kundenproduktvalidierung

Mitochondrial depolarization mediated relocation of mitochondrial RC-TPP into lysosomes and the ensuing lysosomal acidity triggered rhodamine fluorescence. RC-TPP-loaded Tom20-GFP+ HeLa cells were treated without or with CCCP (20 μM) in the presence or absence of BFA (200 nM). Colocalization of Tom20-GFP (in green) and mitochondrial RC-TPP (in blue) is shown in cyan. Scale bar: 10 μm.

Daten von [ , , Chem Sci, 2017, 8(3):1915-1921 ]

A549 cells and SK-1 cells co-treated with Baf A1 (100 nM) and SFN-NAC (30 μM) for 24 h, the expression of LC3 I and LC3 II was determined by Western blot.

Daten von [ , , Cancer Lett, 2018, 431:85-95 ]

HOS cells were pretreated with Baf-A1 (100 nM) for 2 h prior to treatment with CAP (100 μM) and DDP (16.7 μM) alone or in combination for 24 h. The expression levels of autophagy-related and apoptosis-related proteins were measured by Western blotting (a).

Daten von [ , , J Exp Clin Cancer Res, 2018, 37(1):251 ]

Representative immunofluorescence images of TGF-β3-induced MUC5AC in 16HBE cells treated with 3-MA or Baf A1.

Daten von [ , , EBioMedicine, 2018, 33:242-252 ]

Sellecks Bafilomycin A1 (Baf-A1) Wurde zitiert von 572 Publikationen

Cytosolic acetyl-coenzyme A is a signalling metabolite to control mitophagy [ Nature, 2025, 10.1038/s41586-025-09745-x] PubMed: 41225001
Oncogenic RAS induces a distinctive form of non-canonical autophagy mediated by the P38-ULK1-PI4KB axis [ Cell Res, 2025, 10.1038/s41422-025-01085-9] PubMed: 40055523
Host FSTL1 defines the impact of stem cell therapy on liver fibrosis by potentiating the early recruitment of inflammatory macrophages [ Signal Transduct Target Ther, 2025, 10(1):81] PubMed: 40050288
LZTR1 regulates epithelial MHC-I expression via NF-κB1 to modulate CD8+ T cells activation [ Cell Discov, 2025, 11(1):84] PubMed: 41162356
Alterations in PD-L1 succinylation shape anti-tumor immune responses in melanoma [ Nat Genet, 2025, 57(3):680-693] PubMed: 40069506
ACSS2 drives senescence-associated secretory phenotype by limiting purine biosynthesis through PAICS acetylation [ Nat Commun, 2025, 16(1):2071] PubMed: 40021646
BiDAC-dependent degradation of plasma membrane proteins by the endolysosomal system [ Nat Commun, 2025, 16(1):4345] PubMed: 40346034
Rab27a regulates the transport of influenza virus membrane proteins to the plasma membrane [ Nat Commun, 2025, 16(1):6271] PubMed: 40623997
The O-glycosyltransferase C1GALT1 promotes EWSR1::FLI1 expression and is a therapeutic target for Ewing sarcoma [ Nat Commun, 2025, 16(1):1267] PubMed: 39894896
S100P is a ferroptosis suppressor to facilitate hepatocellular carcinoma development by rewiring lipid metabolism [ Nat Commun, 2025, 16(1):509] PubMed: 39779666

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