Bardoxolone Methyl (RTA 402)

Bardoxolone Methyl zeigt potente hemmende Aktivitäten gegen die Produktion von Stickstoffmonoxid, das durch Interferon-Ƴ in Mausmakrophagen induziert wird, mit einer IC50 von 0,1 nM. [1] Diese Verbindung verringert die Lebensfähigkeit von leukämischen HL-60-, KG-1- und NB4-Zellen mit einer IC50 von 0,4, 0,4 bzw. 0,27 μM. Sie induziert das proapoptotische Bax-Protein, hemmt die Aktivierung von ERK1/2 und blockiert die Bcl-2-Phosphorylierung, was zur Induktion der Apoptose beiträgt. [2] Diese Chemikalie hemmt potent sowohl die konstitutive als auch die induzierbare NF-kappaB-Aktivierung durch TNF, Interleukin (IL)-1beta, Phorbolester, Okadasäure, Wasserstoffperoxid, Lipopolysaccharid und Zigarettenrauch. [3]

Bardoxolone Methyl (60 mg/kg) reduziert die Anzahl, Größe und Schwere von Lungentumoren in vivo. [4] Diese Verbindung reduziert signifikant die in vivo entzündliche Zytokinreaktion nach LPS-Challenge, induziert die HO-1-Proteinexpression in der Milz und schützt Mäuse vor tödlichen LPS-Dosen. [5]

• IKK-Assay

  Um die Wirkung von CDDO-Me auf die TNF-induzierte IKK-Aktivierung zu bestimmen, wird IKK analysiert. Kurz gesagt, der IKK-Komplex aus Ganzzellextrakten wurde mit einem Antikörper gegen IKKα und IKKβ präzipitiert und dann mit Protein A/G-Sepharose-Kügelchen behandelt. Nach 2 Stunden werden die Kügelchen mit Lysepuffer gewaschen und dann in einem Kinase-Assay-Gemisch, das 50 mmol/L HEPES (pH 7,4), 20 mmol/L MgCl₂, 2 mmol/L DTT, 20 μCi [γ-³²P]ATP, 10 μmol/L unmarkiertes ATP und 2 μg des Substrats Glutathion-S-transferase-IκBα (Aminosäuren 1-54) enthält, resuspendiert. Nach 30-minütiger Inkubation bei 30°C wird die Reaktion durch Kochen mit SDS-Probenpuffer für 5 Minuten beendet. Schließlich wird das Protein auf 10% SDS-PAGE aufgetrennt, das Gel getrocknet und die radioaktiven Banden mit einem Storm820 sichtbar gemacht. Um die Gesamtmenge an IKK-α und IKK-β in jeder Probe zu bestimmen, werden 50 μg Ganzzellproteine auf 7,5% SDS-PAGE aufgetrennt, auf eine Nitrozellulosemembran elektrotransferiert und dann mit entweder Anti-IKK-α- oder Anti-IKK-β-Antikörper geblottet.

• Zelllinien

  HL-60, KG-1, and NB4 cells

• Konzentrationen

  ~5 μM

• Inkubationszeit

  72 hours

• Methode

  Leukemic cell lines are cultured at a density of 3.0 × 10⁵ cells/mL, and AML mononuclear cells are cultured at 5 × 10⁵ cells/mL in the presence or absence of indicated concentrations of this compound. Appropriate amounts of DMSO (final concentration less than 0.05%) are included as control. For cytotoxicity studies, 1 μM ara-C is added to the cultures. After 24 to 72 hours, viable cells are counted with the trypan blue dye exclusion method using a hematocytometer.

• Tiermodelle

  Female A/J mice are injected i.p. with vinyl carbamate.

• Dosierungen

  ~60 mg/kg

• Verabreichung

  Oral gavage