BAY 1000394

BAY 1000394 hemmt die Kinaseaktivität der Zellzyklus-CDKs CDK1/Cyclin B, CDK2/Cyclin E und CDK4/Cyclin D mit IC50-Werten von 7, 9 bzw. 11 nM. Die transkriptionellen CDKs CDK9/Cyclin T1 und CDK7/Cyclin H/MAT1 werden von dieser Verbindung ebenfalls in einem ähnlichen Bereich (5 und 25 nM) gehemmt, ebenso wie andere Mitglieder der CDK-Familie, wodurch es als pan-CDK-Inhibitor klassifiziert wird. Diese Chemikalie hemmt gleichzeitig die Zellzyklusprogression und die RNA-Polymerase-II-vermittelte Gentranskription. In einem Panel von 214 Nicht-CDK-Ser/Thr- und Tyr-Kinasen wurden 16 zusätzliche Kinasen gefunden, die von diesem Inhibitor mit IC50-Werten unter 100 nM gehemmt werden. Es zeigt eine breite und gleichmäßige Hemmung der Krebszellproliferation mit IC50-Werten zwischen 9 und 79 nM (Mittelwert 39 nM) für ein Panel von 40 menschlichen Lungenkrebszelllinien und IC50-Werten zwischen 6 und 84 nM (Mittelwert 37 nM) für ein Panel von 24 menschlichen Brustkrebs- und immortalisierten Zelllinien. Innerhalb dieser Panels, die eine breite Palette genetischer Hintergründe (p53, pRB, K-Ras, PGP usw.) repräsentieren, konnte keine Zelllinie identifiziert werden, die gegenüber der Behandlung mit diesem Mittel schlecht empfindlich ist. Die antiproliferative Aktivität der Verbindung ist mit der Induktion des apoptotischen Zelltods verbunden. Die Exposition von asynchron wachsenden HeLa-Zellen gegenüber dieser Substanz für 24 Stunden reduziert den Anteil der Zellen mit 2N-Gehalt von 69% auf 52% im Vergleich zu Vehikel-behandelten Zellen und erhöht den Anteil der Zellen mit weniger als 2N-DNA-Gehalt stark von 1% auf 16%. Nur geringfügige Verschiebungen werden für Zellen in der S-, G2- oder M-Phase beobachtet. [1]

BAY 1000394 zeigt eine potente Tumorwachstumshemmung in der Monotherapie nach oraler Anwendung in verschiedenen Dosierungsschemata dosisabhängig, Aktivität in Modellen therapieresistenter Tumoren und Wirksamkeit in Zelllinien-abgeleiteten sowie in Patiententumor-abgeleiteten Modellen. Diese Verbindung (2 mg/kg) unterdrückt das Wachstum von HeLa-MaTu-Xenografttumoren mit T/C-Werten von 0,03 und Anzeichen einer Tumorregression. Es zeigt additive Wirksamkeit in Kombination mit Cisplatin. Die Zugabe dieser Chemikalie zu Cisplatin führt zu einer starken Tumorwachstumshemmung von NCI-H82 SCLC-Xenografttumoren mit T/C-Werten von 0,01 (1,0 mg/kg dieser Verbindung) und -0,02 (1,5 mg/kg dieser Verbindung). [1]

• Kinaseassays

  Rekombinante CDK1- und CycB-GST-Fusionsproteine sowie CDK2- und CycE-GST-Fusionsproteine werden aus Baculovirus-infizierten Sf9-Insektenzellen gereinigt. Histon IIIS wird als Kinasesubstrat verwendet. Die Hemmung der Kinaseaktivität wird durch Substratphosphorylierungsassays unter Verwendung von ³P-Gamma-Adenosintriphosphat bestimmt. Diese Verbindung wird gegen ein Panel von 220 Kinasen unter Verwendung des Kinaseprofiler-Screens bei 500 nM gescreent.

• Zelllinien

  Human cervical cancer cell HeLa-MaTu

• Konzentrationen

  ~10 μM

• Inkubationszeit

  4 days

• Methode

  Proliferation assays are conducted in 96 well plates at densities between 1,000 and 5,000 cells per well in the appropriate medium containing 10% fetal calf serum (FCS). Cells are treated in quadruplicates with serial dilutions of BAY 1000394 for 96 hours followed by quantification of relative cell numbers upon crystal violet staining. This compound is profiled on panels of 40 human lung and 24 human breast cell lines using the Oncology Profiling Service.