KD025 (Belumosudil)

Belumosudil (KD025) reguliert die IL-17- und IL-21-Sekretion in menschlichen PBMC herunter und führt zu einer Herunterregulierung der STAT3-Phosphorylierung, IRF4- und RORγt-Expression in CD4+-T-Zellen. [2]

Es hemmt auch die Sekretion von IL-21, IL-17 und IFNγ sowie die Verringerung der phosphorylierten STAT3- und reduzierten Proteinexpression von IRF4 und BCL6 in menschlichen peripheren Blutmononuklearzellen. [3]

Belumosudil (KD025) (200 mg/kg, p.o.) hemmt die ROCK-Aktivität in Gehirn und Herz, gemessen am Grad der MYPT1-Phosphorylierung. Es reduziert signifikant das Perfusionsdefektgebiet und den Gewebeverlust in der ipsilateralen Hemisphäre. [1]

In einem Mausmodell der kollageninduzierten Arthritis (CIA) reguliert diese Verbindung (200 mg/kg, i.p.) die Progression der kollageninduzierten Arthritis über die Th17-vermittelte Pathway herunter. [2]

Es (150 mg/kg, i.p. oder p.o.) verbessert effektiv die cGVHD in einem Modell mit vollständiger MHC-Diskrepanz der Multisystem-cGVHD mit Bronchiolitis-obliterans-Syndrom und einem Modell mit geringfügiger MHC-Diskrepanz der sklerodermieartigen GVHD. [3]

• Rekombinante ROCK1- und ROCK2-Assays

  Belumosudil (KD025) Compound-Verdünnungen und Reaktionen werden in 96-Well-Polystyrol-Low-Binding-Platten durchgeführt. Die Filtration erfolgt in 96-Well-Filterplatten, die hydrophile Phospho-Cellulose-Kationenaustauschermembranen enthalten. Die enzymatische Aktivität der rekombinanten ROCK1 und ROCK2 wird radiometrisch in 50 μL Reaktionsgemisch gemessen, das Assay-Puffer (50 mmol/L Tris, pH 7,5, 0,1 mmol/L Ethylenglykoltetraacetat, 10 mmol/L Magnesiumacetat und 1 mmol/L Dithiothreitol) enthält. Die Reaktion wird 45 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert und mit 25 μL 3%iger Phosphorsäure gestoppt. Phosphoryliertes langes S6-Peptid wird von nicht umgesetztem [[gamma]-³³P]ATP durch Filtration des abgebrochenen Reaktionsinhalts durch eine P30-Phosphocellulose-Filterplatte getrennt. Jeder Filter wird dreimal mit 75 μL 75 mmol/L Phosphorsäure und einmal mit 30 μL 100%igem Methanol gewaschen. Die Filterplatten lässt man trocknen, und 30 μL OptiPhase 'SuperMix'-Szintillationsflüssigkeit wird zu jeder Vertiefung gegeben. ³³Phosphor wird in einem I450 MicroBeta-Szintillationszähler quantifiziert und durch Subtrahieren der Radioaktivität, die mit den Hintergrundproben assoziiert ist, korrigiert. Die Daten werden analysiert und als prozentuale Hemmung unter Verwendung der Formel ((U - B)/(C - B)) × 100 ausgedrückt, wobei U der unbekannte Wert, B der Durchschnitt der Staurosporin-Hintergrundvertiefungen und C der Durchschnitt der Kontrollvertiefungen ist. Die Kurvenanpassung wird mit der GraphPad Prism-Software unter Verwendung einer sigmoidalen Dosis-Wirkungs-Analyse (variable Steigung) durchgeführt, um IC50-Werte zu generieren. Ki-Werte werden aus einer Gleichung von Ki = IC50/(1 + [S]/Km)) berechnet, wobei [S] und Km die Konzentration von ATP bzw. der Km-Wert von ATP sind.

• Zelllinien

  A7r5 cells

• Konzentrationen

  10 µM

• Inkubationszeit

  2 h

• Methode

  Cells were treated with Belumosudil (KD025) for 2 hours.

• Tiermodelle

  Young adult, aged, or type 2 diabetic mice

• Dosierungen

  300 mg/kg

• Verabreichung

  p.o.