BI 2536

BI 2536 blockiert die Aktivitäten von Plk2 und Plk3 in geringerem Maße mit IC50-Werten von 3,5 nM bzw. 9,0 nM. In HeLa-Zellen führt die Behandlung mit dieser Verbindung im Bereich von 10-100 nM zur Blockierung der Rekrutierung von γ-Tubulin und der Phosphorylierung von Apc6 an mitotischen Zentrosomen, zur Hemmung der Kohäsinfreisetzung von Chromosomenarmen, zur Induktion monopolarer Spindeln sowie zu einer Reihe anderer mitotischer Prozesse, die bekanntermaßen von Plk1 abhängen. Diese chemische Behandlung führt dazu, dass HeLa-Zellen in G2/M arretiert werden, gefolgt von einem Sub-G1-DNA-Peak, der auf DNA-Abbau und Apoptose hinweist, und akkumulierten gespaltenen PARP-p85-Fragmenten in konzentrationsabhängiger Weise. Es hemmt das Wachstum einer Reihe von 32 menschlichen Krebszelllinien mit einer EC50 von 2-25 nM, während es die Proliferation von exponentiell wachsenden hTERT-RPE1-, humanen Nabelvenen-Endothelzellen (HUVECs) und normalen Rattennieren-(NRK)-Zellen mit einer EC50 von 12-31 nM blockiert. [1] Die Plk1-Hemmung durch diese Verbindung reduziert das Wachstum und die Lebensfähigkeit von anaplastischen Schilddrüsenkarzinom-(ATC)-Zellen wie CAL62, OCUT-1, SW1736, 8505C und ACT-1 mit EC50-Werten von 1,4-5,6 nM. [2]

BI 2536, i.v. einmal oder zweimal pro Woche verabreicht, ist in verschiedenen Xenograft-Modellen hochwirksam mit akzeptabler Verträglichkeit, indem es die Zellproliferation durch einen mitotischen Arrest und anschließende Induktion des Tumorzelltods hemmt. Die Verabreichung dieser Verbindung in einer Dosis von 50 mg/kg einmal oder zweimal pro Woche hemmt signifikant das Wachstum von HCT 116-Xenografts mit T/C von 15% bzw. 0,3%. Diese zweimal wöchentliche chemische Behandlung führt auch zu einem ausgezeichneten Tumorwachstum in BxPC-3- und A549-Modellen mit T/C von 5% bzw. 14%. [1]

• Plk1 In-vitro-Kinase-Assay

  Rekombinantes humanes Plk1 (Reste 1-603) wird als N-terminales, GST-markiertes Fusionsprotein mit einem baculoviralen Expressionssystem exprimiert und mittels Affinitätschromatographie mit Glutathion-Agarose gereinigt. Enzymaktivitätsassays für Plk1 werden in Gegenwart von seriell verdünntem BI 2536 mit 20 ng rekombinanter Kinase und 10 μg Kasein aus Kuhmilch als Substrat durchgeführt. Die Kinase-Reaktionen werden in einem Endvolumen von 60 μL für 45 Minuten bei 30 °C durchgeführt (15 mM MgCl₂, 25 mM MOPS [pH 7.0], 1 mM DTT, 1% DMSO, 7.5 mM ATP, 0.3 μCi γ-³³P-ATP). Die Reaktionen werden durch Zugabe von 125 μL eiskalter 5%iger TCA beendet. Nach Übertragung der Präzipitate auf Multi-Screen-Mischester-Cellulosefilterplatten werden die Platten mit 1%iger TCA gewaschen und radiometrisch quantifiziert. Die Dosis-Wirkungs-Kurve wird zur Berechnung des IC50-Wertes verwendet.

• Zelllinien

  HeLa, A43, SKOV-3, HT-29, K562, A549, Saos-2, MCF7, HCT116, COLO 205, Hep G2, Raji and PC-3 cells, etc.

• Konzentrationen

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

• Inkubationszeit

  24 and 72 hours

• Methode

  Cells are exposed to various concentrations of BI 2536 for 24, and 72 hours. Cell growth is assessed by the measurement of Alamar Blue dye conversion in a fluorescence spectrophotometer. For determining the DNA content of the cultures, cell suspensions are fixed in 80% ethanol, treated for 5 minutes with 0.25% Triton X-100 in PBS, and incubated with 0.1% RNase and 10 μg/mL propidium iodide (PI) in PBS for 20 minutes at RT. Cell-cycle profiles are determined by flow cytometric analysis.

• Tiermodelle

  Female BomTac:NMRI-Foxn1^nu mice injected subcutaneously with HCT 116, NCI-H460, or A549 cells

• Dosierungen

  ~50 mg/kg

• Verabreichung

  Injection i.v. once or twice per week