BMS-345541

BMS-345541 hemmt dosisabhängig die TNF-α-stimulierte Phosphorylierung von IκBα in THP-1-Monozytenzellen mit einer IC50 von ~4 μM. Diese Verbindung hemmt die Lipopolysaccharid-stimulierten Tumornekrosefaktor-α, Interleukin-1β, Interleukin-8 und Interleukin-6 in THP-1-Zellen mit IC50-Werten im Bereich von 1 bis 5 μM. Es bindet in einer wechselseitig ausschließenden Weise in Bezug auf einen Peptidinhibitor, der den Aminosäuren 26 - 42 von IκBα mit Ser-32 und Ser-36, die zu Aspartaten geändert wurden, entspricht, und in einer nicht-wechselseitig ausschließenden Weise in Bezug auf ADP. Diese Chemikalie bindet an ähnliche allosterische Stellen auf IKK-1 und IKK-2, was dann die aktiven Stellen der Untereinheiten unterschiedlich beeinflusst. [1] Es beeinflusst mehrere mitotische Zellzyklusübergänge, einschließlich des mitotischen Eintritts, der Prometaphase zur Anaphase-Progression und der Zytokinese. Das Hinzufügen dieser Verbindung zu den Zellen, die aus dem Arrest in der G-Phase freigesetzt wurden, blockiert die Aktivierung von Aurora A, B und C, die Cdk1-Aktivierung und die Histon-H3-Phosphorylierung. Die Behandlung der mitotischen Zellen mit dieser Chemikalie führt zu einem verfrühten Abbau von Cyclin B1 und Securin, einer defekten Chromosomentrennung und einer unsachgemäßen Zytokinese. Es wurde auch festgestellt, dass es den Spindel-Checkpoint in Nocodazol-arrestierten Zellen überwindet. Diese Effekte sind nicht primär auf eine direkte hemmende Wirkung dieser Verbindung auf mitotische Kinasen wie Cdk1, Aurora A oder B, Plk1 oder NEK2 zurückzuführen. [2] Diese Verbindung (10 μM) hemmt das Wachstum von normalen menschlichen epidermalen Melanozyten und metastatischen Melanomzellen (SK-MEL-5, A375 und Hs 294T) um 96 % bzw. 99 % nach 72 Stunden. Die Anwendung von 100 μM davon auf SK-MEL-5-Zellkulturen führt zu 87 % apoptotischen Zellen nach 24 Stunden auf Kaspsase-unabhängige und AIF-abhängige Mitochondrien-vermittelte Weise. Die Behandlung mit dieser Chemikalie (10 μM) führt zu einer Reduktion der IKK-Aktivitäten und der NF-kB-Aktivität sowie der CXCL1-Produktion um 76 % bzw. 95 %. [3] Es hemmt das Wachstum der T-Zell-akuten lymphoblastischen Leukämie (T-ALL)-Zelllinien BE-13, RPMI-8402 und DND-41, die alle eine Notch1-Mutation aufweisen, und T-ALL-Primärzellen von pädiatrischen Patienten mit einer IC50 von 2-6 μM. 5 μM dieser Verbindung induzieren einen Arrest in der G2/M-Phase des Zellzyklus in BE-13- und DND-41-Zellen und eine Zunahme des Sub-G1-Peaks in RPMI-8402-Zellen. 5 μM davon, 16 Stunden lang behandelt, führen zu einer Zunahme apoptotischer Zellen in all diesen Zellen, begleitet von einer zeitabhängigen Spaltung von Procaspase-8, Procaspase-3 und Poly(ADP-Ribose)-Polymerase (PARP). Diese Chemikalie (5 μM) induziert eine zeitabhängige Dephosphorylierung von IκBα und p65. T-ALL-Zellen, die damit behandelt wurden, zeigen eine nukleäre Translokation von FOXO3a und die Wiederherstellung seiner Funktionen, einschließlich der Kontrolle der p21^Cip1-Expressionsspiegel. [4] Es hemmt die TNFα-induzierte Expression von ICAM-1 und VCAM-1 in menschlichen Nabelschnurvenen-Endothelzellen mit einer IC50 von 5 μM. [5]

BMS-345541 hemmt das Melanom-Tumorwachstum dosisabhängig effektiv. Tumortragende Mäuse, die mit 75 mg/kg dieser Verbindung behandelt wurden, zeigten eine effektive Hemmung des Wachstums von SK-MEL-5-, A375- und Hs 294T-Tumoren um 86 %, 69 % bzw. 67 % im Vergleich zu Kontrolltieren, die nur mit dem Vehikel behandelt wurden.[3] Diese Verbindung, oral in Dosen von 100 mg/kg verabreicht, reduziert die Schwere der Dextransulfat-Natrium-induzierten Kolitis bei Mäusen mit einem Gewichtsverhältnis, einer klinischen Bewertung des Dickdarms, einem mittleren Verletzungsscore und einem mittleren Entzündungsscore von 0,86 (vs. 0,77 der Vehikelgruppe), 1,0 (vs. 2,5 der Vehikelgruppe), 5,66 (vs. 8,52 der Vehikelgruppe) bzw. 6,82 (vs. 12,33 der Vehikelgruppe). [6] Diese Chemikalie (100 mg/kg), oral per Schlundsonde in Wasser einmal täglich ab dem Zeitpunkt der ersten Kollagenimmunisierung verabreicht, hemmt die klinischen Anzeichen der Krankheit im murinen CIA-Modell (0 vs. ~8 der Vehikelgruppe), begleitet von einer reduzierten Pfotenschwellung. Sie reduziert den kumulativen Arthritis-Verletzungsscore von 4,4 auf 0, begleitet von einem geringeren Grad an Tibiotarsalgelenksschäden und einer geringeren Schwere von Entzündungen, Synovialhyperplasie, Knochenresorption und Knorpelerosion. Es wurden keine erkennbaren Verletzungen in den Gelenken der Tiere beobachtet, die histologisch nicht von denen von altersentsprechenden, krankheitsfreien Kontrolltieren zu unterscheiden waren. Diese Verbindung hemmt dosisabhängig die IL-1β-Botschaft, wobei Tiere in der 100 mg/kg-Dosisgruppe Werte zeigten, die mit denen von krankheitsfreien Kontrolltieren vergleichbar waren. [7]

• Enzymassays

  Assays zur Messung der enzymkatalysierten Phosphorylierung von GST-IκBα werden durchgeführt, indem Enzym (eine Endkonzentration von 0,5 μg/mL) bei 30 °C zu Lösungen von 100 μg/mL GST-IκBα und 5 μM [³³P]ATP in 40 mM Tris HCl, pH 7,5, mit 4 mM MgCl₂, 34 mM Natriumphosphat, 3 mM NaCl, 0,6 mM Kaliumphosphat, 1 mM KCl, 1 mM Dithiothreitol, 3 % (w/v) Glycerin und 250 μg/mL Rinderserumalbumin gegeben wird. Die spezifische Aktivität von [³³P]ATP, das im Assay verwendet wird, beträgt 100 Ci/mmol. Nach 5 min werden die Kinase-Reaktionen durch Zugabe von 2× Laemmli-Probenpuffer gestoppt und 1 min bei 90 °C wärmebehandelt. Die Proben werden dann auf NuPAGE 10 % BisTris-Gele geladen. Nach Abschluss der SDS-PAGE werden die Gele auf einem Flachgel-Trockner getrocknet. Die Banden werden dann mit einem 445Si PhosphorImager detektiert und die Radioaktivität mit der ImageQuant-Software quantifiziert. Unter diesen Bedingungen ist der Phosphorylierungsgrad von GST-IκBα linear mit der Zeit und der Enzymkonzentration.

• Zelllinien

  Metastatic human melanoma cells SK-MEL-5

• Konzentrationen

  ~10 μM

• Inkubationszeit

  3 days

• Methode

  1×10⁵ cells per well are plated in six-well plates with 10% fetal bovine serum medium overnight to allow cell adhesion. Cells ae cultured in medium containing BMS-345541 for 72 hours of treatment. Cells are counted with a hemocytometer.

• Tiermodelle

  Human melanoma xenografts SK-MEL-5

• Dosierungen

  75 mg/kg

• Verabreichung

  orally administered by gavage