BMS-986142

In B-Zellen, die über den B-Zell-Rezeptor (BCR) stimuliert wurden, hemmt BMS-986142 stark die Signalgebung und funktionelle Endpunkte, einschließlich Kalziumfluss (IC50 = 9 nM), Produktion von Zytokinen, Proliferation und Oberflächenexpression des kostimulatorischen Moleküls CD86 (IC50 = 3–4 nM). In T-Zellen wird die ITK-katalysierte Phosphorylierung von PLCγ1, die über den T-Zell-Rezeptor (TCR) stimuliert wird, durch diese Verbindung mindestens 45-mal weniger stark gehemmt als BTK-abhängige Signalendpunkte in B-Zellen, wie aufgrund der 30-fachen Selektivität für BTK gegenüber ITK in den enzymatischen Assays erwartet[2].

In pharmakokinetischen Studien an mehreren Spezies beträgt die absolute orale Bioverfügbarkeit von BMS-986142 93 % bei Mäusen, 67 % bei Ratten, 33 % bei Javaneraffen und 100 % bei Hunden. Die Gesamtplasma-Clearance dieser Verbindung ist bei allen Spezies gering. Das beobachtete große Verteilungsvolumen im Steady-State ist trotz der hohen Proteinbindung ein Hinweis auf eine extravaskuläre Verteilung. Die Hirnpenetration ist jedoch bei Ratten sehr gering (<5 % der Plasmakonzentration). Diese Verbindung blockiert die Zunahme einer schweren Proteinurie in einem weiblichen NZB/W Lupus-anfälligen Mausmodell in vivo. Die Behandlung mit dieser Chemikalie bietet einen robusten Schutz vor tubulo-interstitieller und glomerulärer Nephritis sowie entzündlicher Infiltration[2].

• Humaner rekombinanter BTK-Enzymtest

  Zu 384-Well-Platten mit V-Boden wurden Testverbindungen, humane rekombinante BTK (1 nM), fluoreszeiniertes Peptid (1,5 μM), ATP (20 μM) und Assay-Puffer (20 mM HEPES bei pH 7,4, 10 mM MgCl2, 0,015 % Brij 35-Tensid und 4 mM DTT in 1,6 % DMSO) mit einem Endvolumen von 30 μL gegeben. Nach Inkubation bei Raumtemperatur für 60 Minuten wurde die Reaktion durch Zugabe von 45 μL 35 mM EDTA zu jeder Probe beendet. Das Reaktionsgemisch wurde durch elektrophoretische Trennung des fluoreszierenden Substrats und des phosphorylierten Produkts analysiert. Die Hemmdaten wurden durch Vergleich mit Kontrollreaktionen ohne Enzym (für 100 % Hemmung) und Kontrollen ohne Inhibitor (für 0 % Hemmung) berechnet. Dosis-Wirkungs-Kurven wurden erstellt, um die Konzentration zu bestimmen, die zur Hemmung von 50 % der BTK-Aktivität (IC50) erforderlich ist. Diese Verbindung wurde in 10 mM DMSO gelöst und bei 11 Konzentrationen bewertet.

• Zelllinien

  Ramos B cells

• Konzentrationen

  0.4, 1.6, 6, 25, 100 and 400 nM

• Inkubationszeit

  1 h

• Methode

  B-cell receptor (BCR)-stimulated phospholipase C (PLC)-γ2 phosphorylation in Ramos B cells: After 1 hour of pre-incubation of Ramos B cells in media containing 10% fetal bovine serum (FBS) with varying concentrations of this compound at 37°C, the cells are stimulated with AffiniPure F(ab’)2 fragment goat anti-human immunoglobulin (Ig)M at 50 μg/mL for exactly 2 minutes at 37°C, followed by addition of ice-cold phosphate-buffered saline for quenching. The cells are pelleted and lysed, and PLCγ2 levels are measured by immunoblot using rabbit anti-human phosphoY759-PLCγ2 and analyzed using the Odyssey Infrared Imaging System with normalization to an actin control to ensure consistent loading.

• Tiermodelle

  female NZB/W lupus-prone mouse model

• Dosierungen

  30 mg/kg

• Verabreichung

  by oral gavage