BX-912

Katalog-Nr.S1275 Charge:S127501

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Technische Daten

Formel

C₂₀H₂₃BrN₈O

Molekulargewicht

471.35

CAS-Nr.

702674-56-4

Löslichkeit (25°C)*

In vitro

DMSO

94 mg/mL (199.42 mM)

Ethanol

94 mg/mL (199.42 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	30%PEG400 1 0.5%Tween80 2 5%propylene glycol Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.	30.000mg/ml (63.65mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 300 μL of 100 mg/ml clarified PEG400 stock solution to 5 μL of Tween80, mix evenly to clarify it; add 50 μL Propylene glycol to the above system, mix evenly to clarify it; then continue to add 645 μL ddH2O to adjust the volume. to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung

BX912 ist ein potenter und spezifischer PDK1-Inhibitor mit einer IC50 von 12 nM, 9- und 105-fach größerer Selektivität für PDK1 als für PKA bzw. PKC in zellfreien Assays. Im Vergleich zu GSK3 ist die Selektivität für PDK1 600-fach.

Ziele

PDK-1 (Cell-free assay)	PKA (Cell-free assay)	KDR (Cell-free assay)	CDK2/CyclinE (Cell-free assay)	Chk1 (Cell-free assay)	Mehr anzeigen
12 nM	110 nM	410 nM	650 nM	830 nM	Mehr anzeigen

In vitro

BX912 verhindert ChcK1, PKA, c-kit und KDR mit IC50-Werten von 0,83, 0,11, 0,85 bzw. 0,41 μM. BX912 blockiert die PDK1/Akt-Signalgebung in Tumorzellen und unterdrückt das verankerungsabhängige Wachstum einer Vielzahl von Tumorzelllinien (wie PC-3-Zellen) in Kultur oder induziert Apoptose. Eine Reihe von Krebszelllinien (wie MDA-468-Brustkrebs) mit erhöhter Akt-Aktivität sind in Weichagar >30-mal empfindlicher gegenüber Wachstumshemmung durch den PDK1-Inhibitor BX912 als auf Gewebekulturplastik, was mit der Zellüberlebensfunktion des PDK1/Akt-Signalwegs übereinstimmt, die besonders wichtig für nicht anhaftende Zellen ist. BX912 blockiert die PDK1-Enzymaktivität in einem direkten Kinase-Assay-Format stark, obwohl BX912 die präaktivierte AKT2-Aktivität nicht blockiert (IC50 > 10 μM). Daher ist BX-912 ein direkter Inhibitor von PDK1. BX912 ist ein kompetitiver Inhibitor der PDK1-Aktivität in Bezug auf sein Substrat ATP, was darauf hindeutet, dass BX912 an die ATP-Bindungstasche von PDK1 bindet. Das Aminopyrimidin-Rückgrat von BX912 nimmt eine ähnliche Orientierung im aktiven Zentrum von PDK1 ein. BX912 fördert einen ausgeprägten Anstieg der Population von MDA-468-Zellen mit 4 N DNA-Gehalt, was auf eine Blockade in der G2/M-Phase des Zellzyklus hinweist. BX912 hemmt auch stark das Wachstum von HCT-116-Zellen in Weichagar und zeigt eine 96%ige Hemmwirkung bei einer Dosis von 1 μM. BX912 hemmt stark das Wachstum von PC-3-Zellen in Weichagar und zeigt eine IC50 von 0,32 μM.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:^{^[1]}	Kinase-Assays PDK1 wird in einem direkten Kinase-Assay und einem gekoppelten Assay-Format untersucht, das die PDK1- und PtdIns-3,4-P2-vermittelte Aktivierung von AKT2 misst. Für den gekoppelten Assay enthielt die endgültige Assay-Mischung (60 μL): 15 mM MOPS, pH 7,2, 1 mg/mL Rinderserumalbumin, 18 mM β-Glycerophosphat, 0,7 mM Dithiothreit, 3 mM EGTA, 10 mM MgOAc, 7,5 μM ATP, 0,2 μCi [γ-³³P]ATP, 7,5 μM biotinyliertes Peptidsubstrat (Biotin-ARRRDGGGAQPFRPRAATF), 0,5 μL PtdIns-3,4-P2-haltige Phospholipidvesikel, 60 pg gereinigtes rekombinantes humanes PDK1 und 172 ng gereinigtes rekombinantes humanes AKT2. Nach Inkubation für 2 Stunden bei Raumtemperatur wird das biotinmarkierte Peptid aus 10 μL der Assay-Mischung auf Streptavidin-beschichteten SPA-Beads eingefangen, und die Produktbildung wird durch Szintillationsnähe in einem Wallac MicroBeta-Zähler gemessen. Das gebildete Produkt ist proportional zur Inkubationszeit und zur Menge des zugegebenen PDK1 und inaktiven AKT2. PDK1 wird in suboptimalen Mengen zugegeben, so dass der Assay Inhibitoren der AKT2-Aktivierung sowie den direkten Inhibitor BX912 von PDK1 oder AKT2 empfindlich nachweisen konnte. Zur direkten Messung der PDK1-Aktivität enthielt die endgültige Assay-Mischung (60 μL): 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 0,1 mM EGTA, 0,1 mM EDTA, 0,1% β-Mercaptoethanol, 1 mg/mL Rinderserumalbumin, 10 mM MgOAc, 10 μM ATP, 0,2 μCi [γ-³³P]ATP, 7,5 μM Substratpeptid (H2N-ARRRGVTTKTFCGT) und 60 ng gereinigtes rekombinantes humanes PDK1. Nach 4 Stunden bei Raumtemperatur werden 25 mM EDTA zugegeben und ein Teil der Reaktionsmischung auf P81-Phosphocellulosepapier aufgetragen. Das Filterpapier wird dreimal mit 0,75%iger Phosphorsäure und einmal mit Aceton gewaschen. Nach dem Trocknen wird das filtergebundene markierte Peptid mit einem Phosphorimager quantifiziert.
Zell-Assay:^{^[1]}	Zelllinien MDA-468, MDA-453 Konzentrationen 0.001-1 μM Inkubationszeit 72 hours Methode Cells such as MDA-468, MDA-453 are seeded at a low density (1.5-3 × 10³ cells/well, 0.1 mL/well, 96-well plates) and are incubated overnight. BX912 treatments are made by adding 10 μL/well of the compound in 1% dimethyl sulfoxide and growth medium (final concentration of dimethyl sulfoxide, 0.1%), followed by brief shaking. Treated cells are incubated for 72 hours, and viability is measured by the addition of 10 μL of the metabolic dye WST-1. The WST-1 signal is read in a plate reader at 450 nm, and a no cell, or zero time cell, background is subtracted to calculate the net signal.

Kinase-Assay:^{^[1]}

Kinase-Assays
PDK1 wird in einem direkten Kinase-Assay und einem gekoppelten Assay-Format untersucht, das die PDK1- und PtdIns-3,4-P2-vermittelte Aktivierung von AKT2 misst. Für den gekoppelten Assay enthielt die endgültige Assay-Mischung (60 μL): 15 mM MOPS, pH 7,2, 1 mg/mL Rinderserumalbumin, 18 mM β-Glycerophosphat, 0,7 mM Dithiothreit, 3 mM EGTA, 10 mM MgOAc, 7,5 μM ATP, 0,2 μCi [γ-³³P]ATP, 7,5 μM biotinyliertes Peptidsubstrat (Biotin-ARRRDGGGAQPFRPRAATF), 0,5 μL PtdIns-3,4-P2-haltige Phospholipidvesikel, 60 pg gereinigtes rekombinantes humanes PDK1 und 172 ng gereinigtes rekombinantes humanes AKT2. Nach Inkubation für 2 Stunden bei Raumtemperatur wird das biotinmarkierte Peptid aus 10 μL der Assay-Mischung auf Streptavidin-beschichteten SPA-Beads eingefangen, und die Produktbildung wird durch Szintillationsnähe in einem Wallac MicroBeta-Zähler gemessen. Das gebildete Produkt ist proportional zur Inkubationszeit und zur Menge des zugegebenen PDK1 und inaktiven AKT2. PDK1 wird in suboptimalen Mengen zugegeben, so dass der Assay Inhibitoren der AKT2-Aktivierung sowie den direkten Inhibitor BX912 von PDK1 oder AKT2 empfindlich nachweisen konnte. Zur direkten Messung der PDK1-Aktivität enthielt die endgültige Assay-Mischung (60 μL): 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 0,1 mM EGTA, 0,1 mM EDTA, 0,1% β-Mercaptoethanol, 1 mg/mL Rinderserumalbumin, 10 mM MgOAc, 10 μM ATP, 0,2 μCi [γ-³³P]ATP, 7,5 μM Substratpeptid (H2N-ARRRGVTTKTFCGT) und 60 ng gereinigtes rekombinantes humanes PDK1. Nach 4 Stunden bei Raumtemperatur werden 25 mM EDTA zugegeben und ein Teil der Reaktionsmischung auf P81-Phosphocellulosepapier aufgetragen. Das Filterpapier wird dreimal mit 0,75%iger Phosphorsäure und einmal mit Aceton gewaschen. Nach dem Trocknen wird das filtergebundene markierte Peptid mit einem Phosphorimager quantifiziert.

Zell-Assay:^{^[1]}

Zelllinien
MDA-468, MDA-453
Konzentrationen
0.001-1 μM
Inkubationszeit
72 hours
Methode
Cells such as MDA-468, MDA-453 are seeded at a low density (1.5-3 × 10³ cells/well, 0.1 mL/well, 96-well plates) and are incubated overnight. BX912 treatments are made by adding 10 μL/well of the compound in 1% dimethyl sulfoxide and growth medium (final concentration of dimethyl sulfoxide, 0.1%), followed by brief shaking. Treated cells are incubated for 72 hours, and viability is measured by the addition of 10 μL of the metabolic dye WST-1. The WST-1 signal is read in a plate reader at 450 nm, and a no cell, or zero time cell, background is subtracted to calculate the net signal.

Referenzen

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15772071/

Kundenproduktvalidierung

: , , Oncotarget, 2014, 5(21):10732-44.

: Daten von [ , , Am J Respir Cell Mol Biol, 2018, 59(3):295-305 ]

Sellecks BX-912 Wurde zitiert von 14 Publikationen

Deregulation and epigenetic modification of BCL2-family genes cause resistance to venetoclax in hematologic malignancies [ Blood, 2022, blood.2021014304]	PubMed: 35704690
The 3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1 is an essential upstream activator of protein kinase A in malaria parasites [ PLoS Biol, 2021, 19(12):e3001483]	PubMed: 34879056
Effects of inhibiting PDK‑1 expression in bone marrow mesenchymal stem cells on osteoblast differentiation in vitro [ Mol Med Rep, 2021, 23(2)118]	PubMed: 33300048
Application of a Biphasic Mathematical Model of Cancer Cell Drug Response for Formulating Potent and Synergistic Targeted Drug Combinations to Triple Negative Breast Cancer Cells. [ Cancers (Basel), 2020, 27;12(5)pii: E1087]	PubMed: 32349331
Biphasic Mathematical Model of Cell-Drug Interaction That Separates Target-Specific and Off-Target Inhibition and Suggests Potent Targeted Drug Combinations for Multi-Driver Colorectal Cancer Cells. [ Cancers (Basel), 2020, 13;12(2) pii: E436]	PubMed: 32069833
Gene Essentiality Profiling Reveals Gene Networks and Synthetic Lethal Interactions with Oncogenic Ras. [ Cell, 2019, 36(2):179-193]	PubMed: 28162770
A Pharmacogenomic Landscape in Human Liver Cancers. [ Cancer Cell, 2019, 36(2):179-193]	PubMed: 31378681
Mapping phospho-catalytic dependencies of therapy-resistant tumours reveals actionable vulnerabilities. [ Nat Cell Biol, 2019, 21(6):778-790]	PubMed: 31160710
Discoidin Domain Receptor 2 Signaling Regulates Fibroblast Apoptosis through PDK1/Akt [Jia S Am J Respir Cell Mol Biol, 2018, 59(3):295-305]	PubMed: 29652518
Systematic Functional Characterization of Resistance to PI3K Inhibition in Breast Cancer. [ Cancer Discov, 2016, 6(10):1134-1147]	PubMed: 27604488

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