AZD5363 (Capivasertib)

Capivasertib (AZD5363) ist ein potenter Akt-Inhibitor mit IC50 von 3 nM, 8 nM und 8 nM für Akt1, Akt2 bzw. Akt3. [1] Es hemmt die Phosphorylierung von Akt-Substraten in Zellen mit einer Potenz von etwa 0,3 bis 0,8 μM. Diese Verbindung hemmt die Proliferation von 41 von 182 soliden und hämatologischen Tumorzelllinien mit einer Potenz von < 3 μM. [2] Aktivierende Mutationen in PIK3CA, Verlust oder Inaktivierung des Tumorsuppressors PTEN oder HER2-Amplifikation sind alle signifikant prädiktiv für das Ansprechen auf AZD5363. Zusätzlich wird auch eine Korrelation zwischen dem RAS-Mutationsstatus von Zelllinien und der Resistenz dagegen beobachtet. [1]

Die orale Verabreichung von Capivasertib (AZD5363) (100, 300 mg/kg) an Nacktmäuse führt zu dosis- und zeitabhängigen Reduktionen der PRAS40-, GSK3β- und S6-Phosphorylierung in BT474c-Xenotransplantaten, reversiblen Erhöhungen der Blutglukosekonzentrationen und dosisabhängigen Abnahmen der 2[¹⁸F]Fluor-2-deoxy-d-glukose (¹⁸F-FDG)-Aufnahme in U87-MG-Xenotransplantaten. Die chronische orale Verabreichung dieser Verbindung (130, 200 und 300 mg/kg) führt zu einer dosisabhängigen Wachstumshemmung von Xenotransplantaten, die von verschiedenen Tumortypen stammen, einschließlich HER2+-Brustkrebsmodellen.

• Caliper Off-Chip Inkubation Mobilität Shift Assay

  Die Fähigkeit von Capivasertib (AZD5363) und anderen Verbindungen, die Aktivität von AKT1, AKT2 und AKT3 zu hemmen, wird mittels des Caliper Off-Chip Incubation Mobility Shift Assays bewertet. Aktive rekombinante AKT1, AKT2 oder AKT3 werden mit einem 5-FAM-markierten, kundenspezifisch synthetisierten Peptidsubstrat zusammen mit steigenden Konzentrationen dieser Verbindung inkubiert. Die finalen Reaktionen enthielten 1 bis 3 nM AKT1-, AKT2- oder AKT3-Enzyme; 1,5 mM Peptidsubstrat; ATP bei K _m für jede AKT-Isoform; 10 mM MgCl₂, 4 mM DTT, 100 mM HEPES und 0,015 % Brij-35. Die Reaktionen werden 1 Stunde bei Raumtemperatur inkubiert und durch Zugabe eines Puffers gestoppt, der 100 mM HEPES, 0,015 % Brij-35-Lösung, 0,1 % Beschichtungsreagenz, 40 mM EDTA und 5 % DMSO enthält. Die Platten werden dann mit einem Caliper LC3000 analysiert, was die Trennung von Peptidsubstrat und phosphoryliertem Produkt durch Elektrophorese mit anschließender Detektion und Quantifizierung der laserinduzierten Fluoreszenz ermöglicht.

• Zelllinien

  182 solid and hematologic tumor cell lines

• Konzentrationen

  ~30 μM

• Inkubationszeit

  72 hours

• Methode

  Cell proliferation assay is determined by 2 methods, MTS and Sytox Green, using Capivasertib (AZD5363). Briefly, cells are seeded in 96-well plates and incubated overnight at 37 ℃, 5% CO₂. Cells are then exposed to concentrations of this compound ranging from 30 to 0.003μM for 72 hours. For the MTS endpoint, cell proliferation is measured by the CellTiter AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay reagent in accordance with the manufacturer's protocol. For the Sytox Green endpoint, Sytox Green nucleic acid dye diluted in TBS-EDTA buffer is added to cells (final concentration of 0.13 μM) and the number of dead cells detected using an Acumen Explorer. Cells are then permeabilized by the addition of saponin (0.03% final concentration, diluted in TBS-EDTA buffer), incubated overnight and a total cell count measured. Predose measurements are made for both MTS and Sytox Green endpoints, and concentration needed to reduce the growth of treated cells to half that of untreated cells values are determined using absorbance readings (MTS) or live cell counts.

• Tiermodelle

  Female nude mice and male SCID mice with BT474c, U87MG, KPL-4, HCC-1187 xenografts.

• Dosierungen

  130 mg/Kg - 300 mg/Kg

• Verabreichung

  p.o.