Delanzomib

CEP-18770 zeigt eine geringfügige Prävention der tryptischen und peptidyl-glutamylen Aktivitäten des Proteasome.[1] CEP-18770 hemmt A2780-Ovarialkarzinomzellen, PC3-Prostatakrebs, H460, LoVo-Darmkrebs, RPMI8226-multiples Myelom und HS-Sultan-anaplastisches Non-Hodgkin-Lymphom mit IC50-Werten von 13,7, 22,2, 34,2, 11,3, 5,6 und 8,2 nM.[1] CEP-18770 blockiert den Ubiquitin-Proteasome-Weg in mehreren MM und in der chronisch myeloischen Leukämiezelllinie K562. CEP-18770 führt zu einer Akkumulation von ubiquitinierten Proteinen über 4 bis 8 Stunden.[1] Die IκBα-Degradation wird durch Vorbehandlung mit CEP-18770 vollständig blockiert. CEP-18770 hemmt signifikant hohe NF-κB-Aktivitätswerte sowohl in RPMI-8226- als auch in U266-Zellen. Die zeit- und konzentrationsabhängige Suppression der NF-kB-DNA-Bindungsaktivität in MM-Zelllinien durch CEP-18770 führt zu einer Abnahme der Expression mehrerer NF-κB-modulierter Gene, die das Wachstum und Überleben von Tumorzellen vermitteln, einschließlich IkBα selbst, des X-chromosomal-gebundenen Inhibitor-of-Apoptosis-Proteins (XIAP), der proinflammatorischen Zytokine TNF-α und Interleukin-1β (IL-1β), des intrazellulären Adhäsionsmoleküls (ICAM1) und des pro-angiogenen Faktors vaskulärer endothelialer Wachstumsfaktor. [1] Die Expression dieser NF-κB-vermittelten Gene ist mit einer günstigeren klinischen Reaktion auf dieses Mittel verbunden, was ihren potenziellen prognostischen Wert bei der Reaktion auf CEP-18770-Exposition unterstreicht. [1] Die proapoptotische Aktivität von CEP-18770 gegen MM ist nicht allein auf Tumorzelllinien des MM beschränkt, sondern erstreckt sich auch auf primäre MM-Explante von Patienten mit Rezidiven oder refraktären Erkrankungen. [1] Darüber hinaus führt CEP-18770 in Kombination zu einer synergistischen Hemmung der MM-Zellviabilität in vitro.[2]

CEP-18770 zeigt eine anhaltende dosisabhängige relative Tumorgewichtsinhibition. CEP-18770 führt zu dosisabhängigen vollständigen Tumorregressionen, was zu einer 50%igen Inzidenz von CR bei seiner maximal verträglichen Dosis (MTD) von 1,2 mg/kg intravenös führt. [1] CEP-18770 zeigt eine dosisabhängige Zunahme der Inzidenz von tumorfreien Mäusen bis zum Abschluss dieser Studien (120 Tage nach Tumortransplantation). Die orale Verabreichung von CEP-18770 führt zu einer deutlichen Abnahme des Tumorgewichts und einer bemerkenswerten dosisabhängigen Inzidenz vollständiger Tumorregression mit minimalen Änderungen des Tierkörpergewichts im Verlauf der 120-Tage-Studien. [1]_Equiactive Dosen von CEP-18770 zeigen eine größere und anhaltendere dosisabhängige Hemmung der Tumor-Proteasome-Aktivität, die zeitlich mit der maximalen Induktion der Caspase-3- und 7-Aktivität korrespondiert.[1] Das maximale apoptotische Signal ist für CEP-18770 2,5-fach größer. Im Gegensatz dazu sind die Proteasome-Inhibitionsprofile von CEP-18870 in den untersuchten normalen peripheren Mausgeweben (Leber, Lunge, Vollblut und Gehirn [keine Aktivität]) sowohl in ihrer Größe als auch in ihrer Dauer vergleichbar.[1] Zu keinem Zeitpunkt wurde in Gehirngewebe eine Proteasome-Inhibition für CEP-18770 oder festgestellt. [1] Einzelwirkstoff CEP-18770 PO zeigt auch deutliche Anti-MM-Effekte in diesen Xenograft-Modellen[1]

• Sondierung der Proteasome-Aktivität in Zellextrakten

  Menschliche multiple Myelomzellen werden zweimal mit kalter phosphatgepufferter Salzlösung gewaschen, pelletiert und mit einem Volumen Glasperlen (<106 Mikrometer, säuregewaschen) und einem gleichen Volumen Homogenisierungspuffer (50 mM Tris (pH 7,4), 1 mM Dithiothreit, 5 mM MgCl₂, 2 mM ATP und 250 mM Saccharose) durch Vortexen bei hoher Geschwindigkeit für 15-30 Minuten bei 4 °C lysiert. Perlen, Membranfraktionen, Kerne und Zelltrümmer werden dann aus dem Überstand durch Zentrifugation bei 16.000 g für 5 Minuten entfernt. Der Proteingehalt der Extrakte wird mit dem Bradford-Assay quantifiziert. Die Proteasome-Aktivität wird wie unten beschrieben untersucht. Gleiche Mengen (typischerweise 60 g) Protein werden durch Kochen in reduzierendem Probenpuffer denaturiert, durch 12,5% SDS-PAGE getrennt und auf Polyvinylidendifluorid (PVDF)-Membranen elektrotransferiert. Immunoblotting wird unter Verwendung eines Dansyl-Sulfonamidohexanoyl-polyklonalen Antikörpers (1:7.500, Kaninchen) und eines Meerrettichperoxidase-gekoppelten Ziegen- oder Schweine-Anti-Kaninchen-Sekundärantikörpers, gefolgt von verbesserter Chemilumineszenz, durchgeführt.

• Zelllinien

  HMEC and TEC cells

• Konzentrationen

  0-100 nM

• Inkubationszeit

  6 hours

• Methode

  HMEC and TEC cells are seeded into 24-well plates at a density of 10⁴ cells/well in DMEM supplemented with 5% FCS. After incubation with proteasome inhibitors (48 hours), cells are washed, air dried, and stained with crystal violet as described. Cell number is determined, in duplicate samples, on the basis of a standard curve obtained with known cell numbers. All experiments are performed in triplicate. In vitro formation of capillary-like structures is studied on cells (4 × 10⁴ cells/well in DMEM supplemented with 5% FCS. After incubation with proteasome inhibitors (48 hours), cells are washed (cells/well in 24-well plates) and seeded onto Matrigel-coated wells in DMEM containing 0.25% BSA. HMEC and TEC cells (5 × 10³ per well), suspended in 200 μL DMEM with 5% FCS (positive control), serum-free medium (negative control), are layered onto the Matrigel surface in the presence or absence of proteasome inhibitor CEP-18770. Cells are observed with a microscope and experimental results are then recorded after a 6-hour incubation at 37 °C. Data is analyzed, as the mean (× 1 SD) of total length of capillary-like structures, by the Micro-Image system and is expressed as mm/field by the computer analysis system in 5 different fields at 100 × magnification in duplicated wells for 4 different experiments.

• Tiermodelle

  Human MM RPMI 8226 subcutaneous xenograft model in SCID mice

• Dosierungen

  From 1.5 to 4 mg/kg, twice for 7 days to 4 weeks.

• Verabreichung

  Intravenously