CFSE

Vorbereitung der CFDA-SE-Arbeitslösung
1.1 Vorbereitung der Stammlösung
Lösen Sie 1 mg CFDA-SE in 0,1794 mL DMSO, um 10 mM CFSE zu erhalten.
Hinweis: Es wird empfohlen, die Stammlösung bei -20 ℃ oder -80 ℃ lichtgeschützt zu lagern und wiederholte Einfrier-Auftau-Zyklen zu vermeiden.
1.2 Vorbereitung dieser chemischen Arbeitslösung
Verdünnen Sie die Stammlösung in serumfreiem Zellkulturmedium oder PBS, um 5-10 μM dieser chemischen Arbeitslösung zu erhalten.
Hinweis: Bitte passen Sie die Konzentration dieser chemischen Arbeitslösung an die tatsächliche Situation an.
Zellfärbung
2.1 Für Suspensionszellen: Bei 1000 g bei 4℃ für 3-5 Minuten zentrifugieren und dann den Überstand verwerfen. Zweimal mit PBS waschen, jeweils 5 Minuten.
Für adhärente Zellen: Zellkulturmedium verwerfen und Trypsin hinzufügen, um die Zellen zu dissoziieren, um eine Einzelzellsuspension zu erhalten. Bei 1000 g bei 4℃ für 3-5 Minuten zentrifugieren und dann den Überstand verwerfen. Zweimal mit PBS waschen, jeweils 5 Minuten.
2.2 1 mL dieser chemischen Arbeitslösung hinzufügen und dann 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren.
2.3 Bei 400 g bei 4℃ für 3-4 Minuten zentrifugieren und dann den Überstand verwerfen.
2.4 Zweimal mit PBS waschen, jeweils 5 Minuten.
2.5 Zellen mit serumfreiem Zellkulturmedium oder PBS resuspendieren und dann mit Fluoreszenzmikroskop oder Durchflusszytometer nachweisen.

Die In-vivo-Markierung von Zellen mit CFSE ist praktisch ohne toxische Wirkung auf die markierten oder angrenzenden Zellen möglich. Dies hat Vorteile bei relativ langfristigen Migrationsstudien, wie die Gewinnung von T-Zellen in den peripheren lymphatischen Organen zeigt[2].

• Zelllinien

  human erythroleukaemic cell line K562, mouse lymphoma cell line YAC-1, human mammary cancer cell line MCF-7 and human melanoma cell line A375

• Konzentrationen

  2 µM, 3 µM, 4 µM, 5 µM, 10 µM and 20 µM

• Inkubationszeit

  5, 6, 7, 8, 10 and 15 min

• Methode

  The 5 mM CFDA-SE stock in DMSO is diluted to different concentrations(2 µM, 3 µM, 4 µM, 5 µM, 10 µM and 20 µM) in PBS with a total volume of 1 ml. After each cell line is harvested and washed three times with PBS, 1×10⁹ cells are added to equal volume of this compound with different concentrations and incubated at 37°C for 5, 6, 7, 8, 10 and 15 min with agitation. The labeling reaction is stopped for 1 min by adding an equal volume of heat inactivated fetal bovine serum. The CFDA-SE labeled cells are washed twice with PBS and recounted, and the cell concentration is adjusted to 6×104cells/ml in IMDM containing 10% FCS.

• Tiermodelle

  C57Bl/6 mice

• Dosierungen

  10 μM

• Verabreichung

  injected into thymic lobe