CP-91149

CP-91149 zeigt eine 200-fach höhere hemmende Aktivität gegen humane Leberglykogen-Phosphorylase a (HLGPa) als Koffein (IC50 = 26 μM). Diese Verbindung (10-100 μM) hemmt die stimulierte Glykogenolyse in isolierten Rattenhepatozyten dosisabhängig und in primären menschlichen Hepatozyten mit einer IC50 von ca. 2,1 μM. [1] Es hemmt auch potent die Aktivitäten der humanen Muskel-Phosphorylase a und b mit IC50-Werten von 0,2 μM bzw. ca. 0,3 μM. Die Behandlung mit dieser Chemikalie bei 2,5 μM induziert die Inaktivierung von Phosphorylase und die sequentielle Aktivierung der Glykogen-Synthase in Hepatozyten und erhöht die Glykogensynthese um das 7-fache bei 5 mM Glucose und um das 2-fache bei 20 mM Glucose. Es kann die Auswirkungen der Phosphorylase-Überexpression teilweise aufheben. [2] Diese Verbindung hemmt auch potent die Gehirn-GP mit einer IC50 von 0,5 μM in A549-Zellen. Die Behandlung bei 10-30 μM führt zu einer signifikanten Glykogenakkumulation in A549- und HSF55-Zellen. Die Behandlung erhöht die G1-Phasen-Zellen mit einer signifikanten Reduzierung der S-Phasen-Population in HSF55-Zellen, korreliert mit einer erhöhten Expression von p21 und p27. [3] Diese Chemikalie fördert auch die Dephosphorylierung und Aktivierung von GS (Glykogen-Synthase) in nicht-gentechnisch veränderten oder GP-überexprimierenden kultivierten menschlichen Muskelzellen, jedoch ausschließlich in Glucose-deprivierten Zellen. [4]

Die orale Verabreichung von CP-91149 an diabetische ob/ob-Mäuse in Dosen von 25-50 mg/kg führt zu einer schnellen (3 Stunden) Glukosesenkung um 100-120 mg/dl ohne Hypoglykämie, resultierend aus der Hemmung der Glykogenolyse in vivo. Diese Behandlung mit der Verbindung senkt die Glukosespiegel bei normoglykämischen, nicht-diabetischen Mäusen nicht. [1] Bei nicht-gefasteten Goto-Kakizaki (GK)-Ratten unterdrückt die Verabreichung dieser Chemikalie in Kombination mit CS-917 die hepatische Glykogenreduktion durch CS-917 und senkt den Plasmaglukosespiegel stärker als die alleinige Verabreichung von CS-917. [5]

• Phosphorylase-Enzymtest

  Die Aktivität der humanen Leberglykogen-Phosphorylase a (HLGPa, 85 ng) wird in Richtung der Glykogensynthese durch die Freisetzung von Phosphat aus Glucose-1-phosphat bei 22 °C in 100 μL Puffer gemessen, der 50 mM Hepes (pH 7,2), 100 mM KCl, 2,5 mM EGTA, 2,5 mM MgCl₂, 0,5 mM Glucose-1-phosphat und 1 mg/mL Glykogen enthält. Phosphat wird bei 620 nm gemessen, 20 Minuten nach Zugabe von 150 μL 1 M HCl, das 10 mg/mL Ammoniummolybdat und 0,38 mg/mL Malachitgrün enthält. Steigende Konzentrationen dieser Verbindung werden dem Assay in 5 μL 14%igem DMSO zugesetzt.

• Zelllinien

  HSF55 and T98G

• Konzentrationen

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~50 μM

• Inkubationszeit

  72 hours

• Methode

  Cells are exposed to various concentrations of CP-91149 for 72hours. Viability is determined with manual cell counts following staining with trypan blue exclusion assay. Cells are fixed with 70% ethanol. DNA is stained with propidium iodide and the intensity of fluorescence is measured using a Becton-Dickinson flow cytometer at 488nm for excitation and at 650nm for emission. The cell cycle profile is analyzed using Modifit's Sync Wizard.

• Tiermodelle

  Obese, diabetic male C57BL/6J-Lep^(ob/ob) mice and their lean, nondiabetic C57BL/6J-/+ littermates

• Dosierungen

  ~50 mg/kg

• Verabreichung

  Orally