CPI-613 (Devimistat)

Devimistat (CPI-613) zeigt in vitro eine selektive Toxizität gegen mehrere Tumorzelllinien, einschließlich menschlicher H460-Lungenkrebszellen und Saos-2-Sarkomzellen, mit EC50-Werten von 120 μM bzw. 120 μM. Es stört den mitochondrialen Metabolismus von H460-Krebszellen, einschließlich der Hemmung der PDH-Komplexaktivität und des Verlusts des mitochondrialen Membranpotentials, zeit- und dosisabhängig. Darüber hinaus induziert diese Verbindung (240 μM) sowohl apoptotischen als auch nicht-apoptotischen Zelltod in menschlichen H460-Lungenkrebszellen und Saos-2-Sarkomzellen. [1]

Devimistat (CPI-613) besitzt bei 25 mg/kg eine starke Antikrebsaktivität in einem humanen Tumorzellen-Xenograftmodell (BxPC-3) eines Pankreastumors. Ebenso führt diese Verbindung (10 mg/kg) in einem Mausmodell zu einer signifikanten Hemmung des Tumorwachstums von H460-nicht-kleinzelligen Lungenkarzinomen beim Menschen. Außerdem verursacht es in den erwarteten therapeutischen Dosisbereichen in Großtiermodellen kaum oder gar keine Nebenwirkungen und hat eine maximal verträgliche Dosis von 100 mg/kg bei Mäusen. [1]

• E1α-Phosphorylierung

  Zellen werden ausgesät und über Nacht kultiviert. Fünf Schalen pro Testgruppe werden mit Devimistat (CPI-613) oder Lösungsmittel behandelt. Die Zellen werden in situ mit 150 μL Lysepuffer A [455 μL Zoom 2D Proteinsolubilisator 1, 2,5 μL 1M Tris-Base, 5 μL 100X Proteaseinhibitor-Cocktail; 5 μL 2M DTT] lysiert, und die Lysate aller fünf Schalen werden in einem 1,5 mL Mikrozentrifugenröhrchen gesammelt und auf Eis 15 Durchgänge lang mit 50 % Leistung beschallt. Nach einer 10-minütigen Inkubation bei Raumtemperatur werden 2,5 μL Dimethylacrylamid (DMA) hinzugefügt, und die Lysate werden weitere 10 Minuten inkubiert. Zur Neutralisierung von überschüssigem DMA werden 5 μL 2M DTT hinzugefügt. Die Lysate werden 15 Minuten lang zentrifugiert, und der Überstand wird gewonnen. Anschließend werden 40 μL Lysat mit 0,8 μL pH 3-10 Ampholyten und 0,75 μL 2M DTT gemischt und mit Zoom 2D Proteinsolubilisator 1 auf 150 μL aufgefüllt. 150 μL Probe werden in einen IPG-Runner geladen, und pH 3-10NL IPG-Strips werden hinzugefügt. Die Strips werden über Nacht bei Raumtemperatur eingeweicht. Ein Schrittprotokoll wird für die isoelektrische Fokussierung verwendet (250V, 20 Min.; 450V 15 Min.; 750 V 15 Min.; 2000V 30 Minuten). Für die zweite Dimension werden die Strips 15 Minuten lang in 1X Ladepuffer behandelt, gefolgt von 15 Minuten in 1X Ladepuffer plus 160 mM Iodessigsäure. Die Strips werden auf NuPAGE 4-12% Bis-Tris-ZOOM-Gelen elektrophoretisiert. Proteine werden auf PVDF 4,5 μm Membranen geblottet. Serine 232, 293 und 300 sind Ziele der drei gut charakterisierten PDK-Phosphorylierungsereignisse, die die E1-Aktivität steuern. Gleiche Mengen an Protein aus behandelten und unbehandelten Zellen werden auf Gele geladen, und Western-Transfers werden mit Anti-E1α-Antikörper als interne Matching-Kontrolle oder einem der drei Anti-Phospho-E1α-Antikörper untersucht.

• Zelllinien

  HN6 cells

• Konzentrationen

  100 μM

• Inkubationszeit

  24 h

• Methode

  Cells were treated with or without 100 μM Devimistat (CPI-613) for 24 h.

• Tiermodelle

  BxPC-3 and H460 cells are injected s.c. into the dorsal flank of CD1 nu/nu mice.

• Dosierungen

  ≤25 mg/kg

• Verabreichung

  Administered via i.p.