CW069

Katalog-Nr.S7336 Charge:S733601

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Technische Daten

Formel

C₂₃H₂₁IN₂O₃

Molekulargewicht

500.33

CAS-Nr.

1594094-64-0

Löslichkeit (25°C)*

In vitro

DMSO

100 mg/mL (199.86 mM)

Ethanol

4 mg/mL (7.99 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.	5.000mg/ml (9.99mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.	1.000mg/ml (2.00mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 20 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung

CW069 ist ein allosterischer und selektiver Inhibitor des Mikrotubuli-Motorproteins HSET mit einer IC50 von 75 μM und einer signifikanten Selektivität gegenüber KSP.

Ziele

HSET

75 μM

In vitro

CW069 erhöht die Anzahl der multipolaren Spindeln in N1E-115-Zellen mit überzähligen Zentrosomen, ohne die bipolare Spindelmorphologie in normalen menschlichen dermalen Fibroblastenzellen zu verändern. Diese Verbindung hemmt das Wachstum in N1E-115-Krebszellen mit einer IC50 von 10 μM, jedoch nicht in NHDF- oder primären menschlichen Knochenmarkszellen.

Merkmale

Allosterischer, HSET-selektiver Inhibitor.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:^{^[1]}	In-vitro-enzymatischer ATPase-Assay Das Protokoll ist für die Verwendung mit HSET und KSP in voller Länge, N-terminal, 6His-getaggt optimiert und misst die MT-stimulierte Aktivität der Proteine. Die Hemmung der Gsp-Synthetase-Aktivität von HSET/KSP wird spektrophotometrisch durch Kopplung der ATP-Hydrolyse an die NADH-Oxidation über Pyruvatkinase-/Laktatdehydrogenase-Reaktionen beobachtet. Der Assay wird durch Zugabe von gereinigter Gsp-Synthetase/Amidase (12,8 nM) zu einer Assay-Mischung eingeleitet, die die folgenden Komponenten (Endkonzentration) enthält: 6 nM Protein, 0,07 mg/ml MTs (University Biologicals), 1,56 mM Glutathion, 10 mM Spermidin, 2 mM ATP, 2,7 mM MgCl₂, 1 mM Phospho(enol)pyruvat, 0,2 mM NADH, 50 μg/ml Laktatdehydrogenase, 100 μg/ml Pyruvatkinase und verschiedene Konzentrationen dieser Verbindung, alle in 50 mM Na PIPES (pH 6,8) bei 37 °C. Der ADP-Glo-Detektionsassay (Promega) wird wie in den Anweisungen des Herstellers beschrieben durchgeführt. Alle Compound-Zugaben wurden mit einem Multidrop BioMek Nxp durchgeführt. Die Platten wurden mit einem Pherastar-Mikroplattenleser ausgelesen.
Zell-Assay:^{^[1]}	Zelllinien N1E-115 cells, NHDF and primary human bone marrow cells. Konzentrationen ~400 μM Inkubationszeit 72 hours Methode Cells are cultured in DMEM supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) at 37°C and 5% CO2. All compounds used in the Sulforhodamine B colorimetric (SRB) assay are dissolved in DMSO and diluted in culture medium to a final concentration of 0.2% DMSO. For the SRB assay and live-cell imaging, cells are seeded in 96-well plates at a density of 2,500 cells per well. After 24 hr, the cells are treated with this compound for 72 hr, with triplicate wells for each concentration. For the SRB assay, the cells are then fixed with trichloroacetic acid (TCA) and stained with SRB. Fluorescence is quantified using an Infinite 200 PRO plate-reader at a wavelength of 545 nm. Compound-treated wells are compared with solvent control wells and the concentration of this chemical that results in 50% of the solvent-control cell growth is designated as the IC50 concentration, calculated using Graphpad PRISM 6. At least three biological replicates are performed for each assay.

Kinase-Assay:^{^[1]}

In-vitro-enzymatischer ATPase-Assay
Das Protokoll ist für die Verwendung mit HSET und KSP in voller Länge, N-terminal, 6His-getaggt optimiert und misst die MT-stimulierte Aktivität der Proteine. Die Hemmung der Gsp-Synthetase-Aktivität von HSET/KSP wird spektrophotometrisch durch Kopplung der ATP-Hydrolyse an die NADH-Oxidation über Pyruvatkinase-/Laktatdehydrogenase-Reaktionen beobachtet. Der Assay wird durch Zugabe von gereinigter Gsp-Synthetase/Amidase (12,8 nM) zu einer Assay-Mischung eingeleitet, die die folgenden Komponenten (Endkonzentration) enthält: 6 nM Protein, 0,07 mg/ml MTs (University Biologicals), 1,56 mM Glutathion, 10 mM Spermidin, 2 mM ATP, 2,7 mM MgCl₂, 1 mM Phospho(enol)pyruvat, 0,2 mM NADH, 50 μg/ml Laktatdehydrogenase, 100 μg/ml Pyruvatkinase und verschiedene Konzentrationen dieser Verbindung, alle in 50 mM Na PIPES (pH 6,8) bei 37 °C. Der ADP-Glo-Detektionsassay (Promega) wird wie in den Anweisungen des Herstellers beschrieben durchgeführt. Alle Compound-Zugaben wurden mit einem Multidrop BioMek Nxp durchgeführt. Die Platten wurden mit einem Pherastar-Mikroplattenleser ausgelesen.

Zell-Assay:^{^[1]}

Zelllinien
N1E-115 cells, NHDF and primary human bone marrow cells.
Konzentrationen
~400 μM
Inkubationszeit
72 hours
Methode
Cells are cultured in DMEM supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) at 37°C and 5% CO2. All compounds used in the Sulforhodamine B colorimetric (SRB) assay are dissolved in DMSO and diluted in culture medium to a final concentration of 0.2% DMSO. For the SRB assay and live-cell imaging, cells are seeded in 96-well plates at a density of 2,500 cells per well. After 24 hr, the cells are treated with this compound for 72 hr, with triplicate wells for each concentration. For the SRB assay, the cells are then fixed with trichloroacetic acid (TCA) and stained with SRB. Fluorescence is quantified using an Infinite 200 PRO plate-reader at a wavelength of 545 nm. Compound-treated wells are compared with solvent control wells and the concentration of this chemical that results in 50% of the solvent-control cell growth is designated as the IC50 concentration, calculated using Graphpad PRISM 6. At least three biological replicates are performed for each assay.

Referenzen

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24210220/

Kundenproduktvalidierung

: Daten von [ , , J Cell Sci, 2017, 130(21):3676-3684 ]

Sellecks CW069 Wurde zitiert von 8 Publikationen

Two cancer cell lines utilize Myosin 10 and the kinesin HSET differentially to maintain mitotic spindle bipolarity [ PLoS One, 2025, 20(5):e0325016]	PubMed: 40440343
Molecular landscape and functional characterization of centrosome amplification in ovarian cancer [ Nat Commun, 2023, 14(1):6505]	PubMed: 37845213
KIF24 depletion induces clustering of supernumerary centrosomes in PDAC cells [ Life Sci Alliance, 2022, 5(11)e202201470]	PubMed: 35803737
Terminally differentiated osteoclasts organize centrosomes into large clusters for microtubule nucleation and bone resorption [ Mol Biol Cell, 2022, mbcE22030098]	PubMed: 35511803
IFT proteins interact with HSET to promote supernumerary centrosome clustering in mitosis. [ EMBO Rep, 2020, 9:e49234]	PubMed: 32270908
Unraveling mitotic protein networks by 3D multiplexed epitope drug screening [ Mol Syst Biol, 2018, 14(8):e8238]	PubMed: 30104419
Centrosome Clustering Is a Tumor-selective Target for the Improvement of Radiotherapy in Breast Cancer Cells [Choe MH Anticancer Res, 2018, 38(6):3393-3400]	PubMed: 29848688
Precocious Centriole Disengagement and Centrosome Fragmentation Induced by Mitotic Delay [ Nat Commun, 2017, 13;8:15803]	PubMed: 28607478

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NICHT FÜR DIE ANWENDUNG AM MENSCHEN, FÜR VETERINÄRMEDIZINISCHE DIAGNOSTIK ODER THERAPEUTISCHE ZWECKE.