D 4476

Katalog-Nr.S7642 Charge:S764201

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Technische Daten

Formel

C₂₃H₁₈N₄O₃

Molekulargewicht

398.41

CAS-Nr.

301836-43-1

Löslichkeit (25°C)*

In vitro

DMSO

79 mg/mL (198.28 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung

D 4476 ist ein potenter, selektiver und zellgängiger CK1 (casein kinase 1) Inhibitor mit einer IC50 von 200 nM und 300 nM in einem zellfreien Assay für CK1 aus Schizosaccharomyces pombe bzw. CK1δ. Wirkt auch als ALK5 Inhibitor mit einer IC50 von 500 nM.

Ziele

CK1 from Schizosaccharomyces pombe	CK1δ	ALK5
200 nM	300 nM	500 nM

In vitro

D4476 (10 μM) hemmt CK1 und ALK5 effektiv mit Aktivitäten von etwa 7 % bzw. 22 % im Vergleich zur Kontrollgruppe. In H4IIE-Hepatomzellen hemmt D4476 spezifisch die Phosphorylierung des endogenen Forkhead-Box-Transkriptionsfaktors O1a (FOXO1a) an Ser322 und Ser325, ohne die Phosphorylierung anderer Stellen zu beeinflussen. D4476 induziert Zytotoxizität in den Linien ANBL6, INA6 und RPMI8226; die Linien MM1S und U266 sind weniger empfindlich; und die Linie OPM1 ist vollständig resistent. Hohe Konzentrationen (50 μM) von D4476 induzierten Toxizität in allen Multiplen Myelom (MM)-Linien. In MM-Zellen erhöht D4476 die Proteinspiegel von TP53, P27 und FADD sowie die Zellzyklusprogression und die Induktion der Apoptose. Die Behandlung von Leukämie-Stammzellen (LSCs) mit D4476 zeigt eine hochselektive Abtötung von LSCs gegenüber normalen HSPCs.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:^{^[4]}	CK1 kinase assay Alle Proteinkinase-Assays (25 μL) werden bei Raumtemperatur (21℃) durchgeführt. Die Assays werden 40 min lang mit einer Biomek 2000 Laboratory Automation Workstation in einem 96-Well-Format durchgeführt. Die Konzentrationen von Magnesiumacetat und [γ-^33P]ATP (800 cpm/pmol) in den Assays betragen 10 mM bzw. 0,1 mM. Die Assays werden mit MgATP gestartet und durch Zugabe von 5 μL 0,5 M Orthophosphorsäure gestoppt. Aliquots werden dann auf P30-Filtermatten getupft, viermal in 75 mM Phosphorsäure gewaschen, um ATP zu entfernen, einmal in Methanol, dann getrocknet und auf Radioaktivität gezählt. CK1 δ (5-20 m-Einheiten), verdünnt in 20 mM Hepes, pH 7,5, 0,15 M NaCl, 0,1 mM EGTA, 0,1 % (v/v) Triton X-100, 5 mM Dithiothreit, 50 % (v/v) Glycerin, wird gegen das Peptid RRKDLHDDEEDEAMSITA in einer Inkubation getestet, die 20 mM Hepes, pH 7,5, 0,15 M NaCl, 0,1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0,1 % (v/v) Triton X-100 und 0,5 mM Substratpeptid enthält.
Zell-Assay:^{^[2]}	Zelllinien MM cell lines including MM1S, RPMI8226, U266, MM1R, OPM1, OPM2, INA6, ANBL6, ANBL-6VR, LR5 and RPMI-DOX40 (DOX40) cells Konzentrationen 50 μM Inkubationszeit 72 h Methode MM cells are seeded in triplicate into 96-well plates in 100 μL culture media. D4476 is added to each well at concentrations of 0, 5, 10, 20, 30, 40, and 50 μM in another 100 μL culture media. Cell viability is measured with MTT at the 72 h drug exposure. Absorbance is measured at 570 nm with spectrophotometer.

Kinase-Assay:^{^[4]}

CK1 kinase assay
Alle Proteinkinase-Assays (25 μL) werden bei Raumtemperatur (21℃) durchgeführt. Die Assays werden 40 min lang mit einer Biomek 2000 Laboratory Automation Workstation in einem 96-Well-Format durchgeführt. Die Konzentrationen von Magnesiumacetat und [γ-^33P]ATP (800 cpm/pmol) in den Assays betragen 10 mM bzw. 0,1 mM. Die Assays werden mit MgATP gestartet und durch Zugabe von 5 μL 0,5 M Orthophosphorsäure gestoppt. Aliquots werden dann auf P30-Filtermatten getupft, viermal in 75 mM Phosphorsäure gewaschen, um ATP zu entfernen, einmal in Methanol, dann getrocknet und auf Radioaktivität gezählt. CK1 δ (5-20 m-Einheiten), verdünnt in 20 mM Hepes, pH 7,5, 0,15 M NaCl, 0,1 mM EGTA, 0,1 % (v/v) Triton X-100, 5 mM Dithiothreit, 50 % (v/v) Glycerin, wird gegen das Peptid RRKDLHDDEEDEAMSITA in einer Inkubation getestet, die 20 mM Hepes, pH 7,5, 0,15 M NaCl, 0,1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0,1 % (v/v) Triton X-100 und 0,5 mM Substratpeptid enthält.

Zell-Assay:^{^[2]}

Zelllinien
MM cell lines including MM1S, RPMI8226, U266, MM1R, OPM1, OPM2, INA6, ANBL6, ANBL-6VR, LR5 and RPMI-DOX40 (DOX40) cells
Konzentrationen
50 μM
Inkubationszeit
72 h
Methode
MM cells are seeded in triplicate into 96-well plates in 100 μL culture media. D4476 is added to each well at concentrations of 0, 5, 10, 20, 30, 40, and 50 μM in another 100 μL culture media. Cell viability is measured with MTT at the 72 h drug exposure. Absorbance is measured at 570 nm with spectrophotometer.

Referenzen

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14710188/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24962017/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24616378/

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12534346/

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Kundenproduktvalidierung

: Daten von [ , , Mol Oncol, 2016, 10(5):677-92 ]

Sellecks D 4476 Wurde zitiert von 22 Publikationen

SCFβ-TrCP targets Ajuba for degradation in a GSK3β-dependent manner in colorectal cancer [ Neoplasia, 2025, 66:101175]	PubMed: 40367710
A kinome-wide CRISPR screen identifies CK1α as a target to overcome enzalutamide resistance of prostate cancer [ Cell Rep Med, 2023, 4(4):101015]	PubMed: 37075701
Golgi retention and oncogenic KIT signaling via PLCγ2-PKD2-PI4KIIIβ activation in gastrointestinal stromal tumor cells [ Cell Rep, 2023, 42(9):113035]	PubMed: 37616163
Neddylation inhibition induces glutamine uptake and metabolism by targeting CRL3SPOP E3 ligase in cancer cells [ Nat Commun, 2022, 13(1):3034]	PubMed: 35641493
CHMP2B regulates TDP-43 phosphorylation and cytotoxicity independent of autophagy via CK1 [ J Cell Biol, 2022, 221(1)e202103033]	PubMed: 34726688
CK1α upregulates the IFNAR1 expression to prompt the anti-HBV effect of type I IFN in hepatoma carcinoma cells [ Virol Sin, 2022, S1995-820X(22)00143-2]	PubMed: 35985475
SPOP and OTUD7A Control EWS-FLI1 Protein Stability to Govern Ewing Sarcoma Growth [ Adv Sci (Weinh), 2021, e2004846]	PubMed: 34060252
SPOPandOTUD7AControlEWS–FLI1Protein Stability to Govern Ewing Sarcoma Growth [ ADVANCED SCIENCE, 2021, 8(14)]	PubMed: None
CK1δ stimulates ubiquitination-dependent proteasomal degradation of ATF4 to promote chemoresistance in gastric Cancer [ Clin Transl Med, 2021, 11(10):e587]	PubMed: 34709767
SKI activates the Hippo pathway via LIMD1 to inhibit cardiac fibroblast activation [ Basic Res Cardiol, 2021, 116(1):25]	PubMed: 33847835

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