Dasatinib (BMS-354825)

Dasatinib ist wirksamer bei der Hemmung der Proliferation von Ba/F3-Zellen, die Wildtyp-Bcr-Abl und Bcr-Abl-Mutanten exprimieren, mit Ausnahme von T315I. Diese Verbindung hat eine um zwei Log-Stufen (~325-fach) erhöhte Potenz. Es hemmt potent die Wildtyp-Abl-Kinase und alle Mutanten außer T315I in einem engen Bereich. Dieses Agens zielt direkt auf Wildtyp- und mutierte Abl-Kinase-Domänen ab und hemmt die Autophosphorylierung und Substratphosphorylierung in einer konzentrationsabhängigen Weise. Es zeigt eine 325-fach höhere Potenz gegen Zellen, die Wildtyp-Bcr-Abl exprimieren. [1] Der Prozentsatz der Kolonien von TgE-Knochenmarkzellen nimmt von 100% in unbehandelten Vertiefungen auf 4,12% in den mit dieser Verbindung behandelten Vertiefungen ab. In Anwesenheit dieser Chemikalie ist der Unterschied im Prozentsatz der durch WT- und TgE-Knochenmarkzellen gebildeten Kolonien statistisch signifikant. Die Expression von LMP2A ist in der Lage, das Überleben und die Proliferation von B-Lymphozyten zu fördern, was durch die Hemmung von Lyn- und/oder c-Abl-Kinasen durch dieses Agens gehemmt werden kann. [3] Seine Behandlung hemmt die Src-Signalisierung, verringert das Wachstum und induziert Zellzyklusarrest und Apoptose in einer Untergruppe von Schilddrüsenkrebszellen. Die Behandlung mit zunehmenden Dosen dieser Verbindung (0,019 μM bis 1,25 μM) über 3 Tage hemmt das Wachstum der Zelllinien C643, TPC1, BCPAP und SW1736 um etwa 50% bei niedrigen nanomolaren Konzentrationen, während höhere Konzentrationen erforderlich sind, um das Wachstum der K1-Zelllinie zu hemmen. Die Behandlung mit 10 nM oder 50 nM dieser Chemikalie führt zu einem Anstieg der Zellen in der G1-Population unter BCPAP- und SW1736- sowie K1-Zellen um 9-22% und einem entsprechenden Rückgang des Prozentsatzes der Zellen in der S-Phase um 7-18%. [4]

Dasatinib kehrt die Splenomegalie bei LMP2A/MYC doppeltransgenen Mäusen um. Diese Verbindung verhindert spezifisch die Koloniebildung durch LMP2A-exprimierende Knochenmark-B-Zellen und verringert die Milzgröße bei den TgE-Mäusen. Die Milzmasse ist bei den mit dieser Verbindung behandelten Tg6/λ-MYC-Mäusen im Vergleich zur Kontrollgruppe signifikant verringert. Es hemmt die Lymphadenopathie bei LMP2A/MYC doppeltransgenen Mäusen. Diese Chemikalie kehrt die Splenomegalie bei Rag1KO-Mäusen um, die mit Tumorzellen von LMP2A/MYC doppeltransgenen Mäusen transplantiert wurden. Seine Therapie hemmt die Lyn-Phosphorylierung in B-Lymphozyten-Tumoren, die LMP2A exprimieren. [3]

• Kinase-Autophosphorylierungs-Assays

  Kinase-Assays unter Verwendung von Wildtyp- und mutierten Glutathion-S-Transferase (GST)-Abl-Fusionsproteinen (c-Abl-Aminosäuren 220-498) werden durchgeführt. GST-Abl-Fusionsproteine werden vor der Verwendung von Glutathion-Sepharose-Beads freigesetzt; die ATP-Konzentration beträgt 5 μM. Unmittelbar vor der Verwendung in Kinase-Autophosphorylierungs- und In-vitro-Peptidsubstratphosphorylierungs-Assays werden GST-Abl-Kinase-Domänen-Fusionsproteine mit LAR-Tyrosinphosphatase behandelt. Nach 1-stündiger Inkubation bei 30 °C wird LAR-Phosphatase durch Zugabe von Natriumvanadat (1 mM) inaktiviert. Eine Immunoblot-Analyse, die unbehandelte GST-Abl-Kinase mit dephosphorylierter GST-Abl-Kinase vergleicht, wird routinemäßig unter Verwendung des Phosphotyrosin-spezifischen Antikörpers 4G10 durchgeführt, um eine vollständige (>95%) Dephosphorylierung der Tyrosinreste zu bestätigen, und des c-Abl-Antikörpers CST 2862, um eine gleiche Beladung der GST-Abl-Kinase zu bestätigen. Der Dasatinib-Konzentrationsbereich wird für die Mutante T315I auf 1.000 nM erweitert. Dieselben Inhibitor-Konzentrationen werden für die In-vitro-Peptidsubstratphosphorylierungs-Assays verwendet. Die drei Inhibitoren werden über dieselben Konzentrationsbereiche gegen GST-Src-Kinase und GST-Lyn-Kinase getestet.

• Zelllinien

  Ba/F3 cell lines

• Konzentrationen

  ~32 nM

• Inkubationszeit

  72 hours

• Methode

  Ba/F3 cell lines are seeded in triplicate and incubated with escalating concentrations of Dasatinib for 72 hours. Proliferation is measured using a methanethiosulfonate-based viability assay. IC50 and IC90 values are reported as the mean of three independent experiments done in quadruplicate. The inhibitor concentration ranges are 0 nM to 32 nM (this compound). The concentration range of this chemical is extended to 200 nM for mutant T315I.

• Tiermodelle

  EμLMP2A (TgE and Tg6 strains), MYC (λ-MYC), and LMP2A/λ-MYC double transgenic mice (Tg6/λ-MYC)

• Dosierungen

  30 mg/kg

• Verabreichung

  Administered via i.p.