In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich. * Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen. * Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)
Vorbereitung von Stammlösungen
Biologische Aktivität
Beschreibung
DBeQ (JRF 12) ist ein selektiver, potenter, reversibler und ATP-kompetitiver p97-Inhibitor mit einer IC50 von 1,5 μM.
Ziele
p97
1.5 μM
In vitro
DBeQ blockiert den Abbau von UbG76V-GFP, ODD-Luc und Luc-ODC mit IC50-Werten von 2,6 μM, 56 μM und 45 μM in HeLa-Zellen. Diese Verbindung ist mindestens 50-mal weniger potent gegenüber dem N-Ethylmaleimid-sensitiven Faktor (NSF) und dem 26S-Proteasom. Sie hemmt p97 kompetitiv in Bezug auf ATP mit einem Ki von 3,2 μM, was darauf hindeutet, dass sie an die aktive Stelle der D2-Domäne bindet. Diese Verbindung (10 μM) blockiert potent den Abbau von TCR
-GFP in HEK293-Zellen. Sie induziert CHOP innerhalb von 3 Stunden in einer konzentrationsabhängigen Weise, erhöht aber nicht den p21-Spiegel in HEK293-Zellen. Diese Verbindung (15 μM) induziert eine starke Akkumulation von LC3-II im Zellkern sowie in membranangereicherten und zytosolischen Fraktionen in Hela-Zellen. Sie wirkt, indem sie den autophagischen Abbau von LC3-II blockiert, anstatt die Autophagie in HeLa-Zellen zu induzieren. Diese Verbindung (10 μM) fördert schnell die Aktivierung der „Exekutor“-Kaspasen-3 und -7 in HeLa-Zellen. Sie aktiviert den intrinsischen Caspase-9-Apoptoseweg stärker als den extrinsischen Caspase-8-Weg, während STS beide Wege in ähnlichem Maße aktiviert. Diese Verbindung ist fünffach aktiver gegen multiple Myelom (RPMI8226)-Zellen als normale menschliche fetale Lungenfibroblasten (MRC5), wobei HeLa- und Hek293-Zellen intermediäre Empfindlichkeiten zeigen. Sie zeigt eine 20-fache Selektivität für die Stabilisierung von p97-abhängigen gegenüber unabhängigen UPS-Reporter-Substraten in HeLa-Zellen. Diese Chemikalie beeinträchtigt den Abbau von Substraten innerhalb der ERAD- und Autophagie-Wege. Sie (12 μM) hemmt die intrazelluläre Neutralisation dosisabhängig in HeLa-Zellen. Diese Verbindung (10 μM), die den Abbau von Virus und Antikörper im Fate-of-Capsid-Experiment vollständig hemmt, verhindert nicht den Abbau von IgG Fc. Sie (9 μM) reduziert den anfänglichen Neutralisationsgradienten als Funktion der Antikörperkonzentration. Diese Verbindung verringert sowohl die basale als auch die nährstoffstimulierte Phosphorylierung von MTOR-Zielen, ähnlich den Effekten von Rapamycin in U20S-Zellen.
Merkmale
Induziert schnell und potent die Aktivierung von Exekutorkaspasen und den Zelltod.
Assay-Puffer [20 μL einer 2,5-fachen Konzentration, wobei 1× = 50 mM Tris (pH 7,4), 20 mM MgCl2, 1 mM EDTA und 0,5 mM Tris(2-carboxyethyl)phosphin (TCEP)] wird in jede Vertiefung einer 96-Well-Platte gegeben. Gereinigtes p97 (25 μL von 50 μM) wird in 975 μL 1× Assay-Puffer verdünnt, und 10 μL werden in jede Vertiefung gegeben. Diese Verbindung (10 μL) oder 5 % DMSO (10 μL) wird dann zu jeder Vertiefung hinzugefügt, und die Platte wird 10 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert. Der ATPase-Assay wird durchgeführt, indem 10 μL von 500 μM ATP (pH 7,5) zu jeder Vertiefung hinzugefügt, 60 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert und dann 50 μL Kinase Glo Plus-Reagenz hinzugefügt werden, gefolgt von einer abschließenden 10-minütigen Inkubation bei Raumtemperatur im Dunkeln. Die Lumineszenz wird auf einem Analyst AD gemessen. Diese Chemikalie wird in einer Reihe von Konzentrationen (0, 0,048, 0,24, 1,2, 6 und 30 μM) in dreifacher Ausführung getestet.
Cells are seeded on a 384-well solid white plate (5,000 cells/well). Cells are transfected with luciferase siRNA or p97 siRNA (10 nM) for 48 hours or treated with DBeQ for the indicated amount of time. Caspase-3/7 Glo, caspase-6 Glo, caspase-8 Glo, or caspase-9 Glo is added into each well and mixed by shaking at 500 rpm for 1 min. Luminescence signal is determined after incubation at room temperature for 1 hour. Cellular viability is determined with CellTiter-Glo reagen. To determine the IC50 of cellular viability, cells are treated with MG132 or this compound at seven concentrations (threefold serial dilutions starting at 33 μM) for 48 hours. IC50 values are calculated from fitting the percentage of luminescence signal normalized to DMSO treated cells).
Referenzen
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21383145/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21606684/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23091005/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23439279/
Sellecks DBeQ Wurde zitiert von 11 Publikationen
Ubiquitin regulatory X (UBX) domain-containing protein 6 is essential for autophagy induction and inflammation control in macrophages
[ Cell Mol Immunol, 2024, 10.1038/s41423-024-01222-1]
White spot syndrome virus benefits from endosomal trafficking, substantially facilitated by a valosin-containing protein, to escape autophagic elimination and propagate in crustacean Cherax quadricarinatus
[ J Virol, 2020, JVI.01570-20]
Functional cooperativity of p97 and histone deacetylase 6 in mediating DNA repair in mantle cell lymphoma cells
[Vekaria PH Leukemia, 2019, 10.1038/s41375-018-0355-y]
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