Derazantinib

ARQ-087 weist eine antiproliferative Aktivität in Zelllinien auf, die durch FGFR-Dysregulation angetrieben werden, einschließlich Amplifikationen, Fusionen und Mutationen. Zellzyklusstudien in Zelllinien mit hohen Mengen an FGFR2-Protein zeigen eine positive Beziehung zwischen dem durch ARQ 087 induzierten G1-Zellzyklusarrest und der anschließenden Induktion der Apoptose. ARQ 087 hemmt die Autophosphorylierung von FGFR1 und FGFR2 dosisabhängig. In Cos-1-Zellen, die voll-längen-FGFR1, FGFR2, FGFR3 und FGFR4 überexprimieren, hemmt ARQ 087 deren Phosphorylierung mit EC50-Werten von < 0,123 μM, 0,185 μM, 0,463 μM bzw. >10 μM. ARQ 087 hemmt die FGFR-Kinase durch einen ATP-kompetitiven Mechanismus und ist in der Lage, sowohl die inaktiven als auch die vollständig aktiven Formen der FGFR-Kinase zu hemmen. Daher verzögert ARQ 087 die FGFR-Aktivierung durch Hemmung seiner Autophosphorylierung sowie durch Hemmung der phosphorylierten aktiven Kinase[1].

ARQ 087 dämpft die FGFR-Signalübertragung in SNU-16-Xenograft-Tumoren des Menschen, was zu einer Reduktion von Phospho-FGFR, Phospho-FRS2-α und Phospho-ERK führt, während das gesamte FGFR2-Protein unbeeinflusst bleibt. ARQ 087 ist wirksam bei der Hemmung des Tumorwachstums in vivo in FGFR2-veränderten SNU-16- und NCI-H716-Xenograft-Tumormodellen mit Genamplifikationen und -fusionen. ARQ 087 zeigte Wirksamkeit in mehreren in vivo Xenograft-Modellen und wurde bei Dosen bis zu 75 mg/kg gut vertragen[1].

• Bestimmung des Ki-Werts und des Hemmungsmodus

  Die Kinase-hemmende Aktivität von ARQ 087 wurde für die rekombinanten FGFR1- oder FGFR2-Proteine unter Verwendung eines biotinylierten PYK2-Peptidsubstrats und ATP bestimmt. ARQ 087 wurde in DMSO unter Verwendung eines 3-fachen Verdünnungsschemas titriert und dann um das 10-fache in entionisiertem Wasser weiterverdünnt, um eine endgültige DMSO-Konzentration von 10 % zu erhalten. Ein Volumen (2,5 μL) dieser Verdünnungen oder des Vehikels wurde zu jeder Vertiefung einer Reaktionsplatte gegeben. FGFR1 oder FGFR2 wurde zu Assay-Puffer (50 mM Tris, pH 8,0, 0,02 mg/mL BSA, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 10 % Glycerin, 0,1 mM Na3PO4, 1 mM DTT) in jede Vertiefung in einem Volumen von 17,5 μL für eine Endkonzentration von 0,50 bzw. 0,25 nM gegeben. Nach einer 30-minütigen Präinkubationsperiode wurden ATP und Substrat in Assay-Puffer (5 μL) für Endkonzentrationen von 0–1.000 μM ATP und 80 nM biotinyliertem PYK2 für ein endgültiges Reaktionsvolumen von 25 μL hinzugefügt. Die Platten wurden 60 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert und dann im Dunkeln durch Zugabe von 10 μL Stopp-/Detektionsgemisch, hergestellt in Assay-Puffer mit EDTA, AlphaScreen™ Streptavidin Donor und P-TYR-100 Akzeptor-Beads, für Endkonzentrationen von 10 mM EDTA und 500 ng/Well beider AlphaScreen™ Donor- und Akzeptor-Beads gestoppt. Die Assay-Platten wurden 60 Minuten bei Raumtemperatur im Dunkeln inkubiert, und die Platten wurden auf einem Perkin Elmer, Envision Multilabel Plattenleser abgelesen (Anregungswellenlänge: 640 nm, Emissionswellenlänge: 570 nm). Der Effekt der Enzymkonzentration wurde für fest bindende Inhibitoren angewendet, und falls notwendig, wurden die IC50-Werte in Ki-Werte umgewandelt, wenn die Enzymkonzentration unter den verwendeten Assay-Bedingungen über den IC50-Werten lag.

• Zelllinien

  NCI-H716 and SNU-16 cells

• Konzentrationen

  0.1 μM or 1 μM

• Inkubationszeit

  24 or 72 hours

• Methode

  Cells are plated and incubated at 37°C overnight and subsequently treated with 0.1 μM or 1 μM of ARQ 087 for 24 or 72 hours. The cells were fixed and stained with Cycletest Plus Reagent kit and cell cycle profiles were analyzed using a FACS Calibur flow cytometer.

• Tiermodelle

  female NCr nu/nu mice (SNU-16) or CB17 SCID mice (NCI-H716)

• Dosierungen

  0, 25, 50, and 75 mg/kg

• Verabreichung

  oral administration