GSK1349572 (Dolutegravir)

Dolutegravir (GSK1349572) zeigt eine potente Hemmwirkung auf neun klinische Isolate von Integrase-Inhibitor-naiven HIV-2-infizierten Patienten mit einer EC50 im Bereich von 0,2 nM bis 1,4 nM.[1]

In vitro hemmt es den rekombinanten HIV-1 integrase-katalysierten Strangtransfer mit einer IC50 von 2,7 nM. Darüber hinaus hemmt diese Verbindung die HIV-Replikation in Zellen wie peripheren mononukleären Blutzellen (PBMCs), MT-4-Zellen und CIP4-Zellen, die mit einem selbstinaktivierenden PHIV-lentiviralen Vektor infiziert sind, mit EC50-Werten von 0,51 nM, 0,71 nM bzw. 2,2 nM.[2]

In vitro zeigt es auch eine potente Aktivität gegen fünf verschiedene nicht-nukleosidische Reverse-Transkriptase-Inhibitor-resistente oder nukleosidische Reverse-Transkriptase-Inhibitor-resistente Viren mit einer EC50 im Bereich von 1,3 nM bis 2,1 nM. Ähnlich seiner Aktivität gegen Wildtyp-Virus zeigt es eine äquivalente Wirksamkeit gegen zwei Protease-Inhibitor-resistente Viren mit EC50-Werten von 0,36 nM bzw. 0,37 nM.[2]

Dolutegravir (GSK1349572), ein antiretrovirales Medikament (ARV) der ersten Wahl, das in der Kombinationstherapie gegen HIV-1 eingesetzt wird, hemmt die MMP-Aktivität und hat das Potenzial, die pränatale und postnatale Neuroentwicklung zu beeinflussen.

• In-vitro-Strangtransfer-Assay

  Die hemmende Potenz von Dolutegravir (GSK1349572) und anderen INIs wird in einem Strangtransfer-Assay unter Verwendung rekombinanter HIV integrase gemessen. Ein Komplex aus integrase und biotinylierter vorverarbeiteter Donor-DNA-Streptavidin-beschichteten Scintillations-Proximity-Assay (SPA)-Beads wird gebildet, indem 2 μM gereinigte rekombinante integrase mit 0,66 μM biotinylierter Donor-DNA-4 mg/mL Streptavidin-beschichteten SPA-Beads in 25 mM Natriummorpholinpropansulfonsäure (MOPS) (pH 7,2), 23 mM NaCl und 10 mM MgCl₂ für 5 Minuten bei 37 °C inkubiert wird. Diese Beads werden zentrifugiert und mit verdünnten INIs für 60 Minuten bei 37 °C vorinkubiert. Dann wird ein ₃H-markiertes Target-DNA-Substrat hinzugefügt, um eine Endkonzentration von 7 nM Substrat zu erhalten, und die Strangtransfer-Reaktionsmischung wird bei 37 °C für 25 bis 45 Minuten inkubiert, was einen linearen Anstieg des Strangtransfers von Donor-DNA zu radiomarkierter Target-DNA ermöglicht. Das Signal wird mit einem Wallac MicroBeta Szintillationsplattenlesegerät ausgelesen.

• Zelllinien

  MT-4

• Konzentrationen

  0 to 10 μM

• Inkubationszeit

  4 days or 5 days

• Methode

  Exponentially growing MT-4 cells at a density of 500,000 or 600,000/mL are infected with HIV-1 strain IIIB at a viral multiplicity of infection of 0.001 or a 50% tissue culture infective dose of 4 to 10. The cells are then aliquoted to 96-well plates in the presence of varying concentrations of Dolutegravir (GSK1349572). After incubation for 4 or 5 days, antiviral activity is determined by a cell viability assay that either measured bioluminescence with a CellTiter-Glo luminescent reagent or measured absorbance at 560 and 690 nm using the yellow tetrazolium MTT reagent [3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide].

• Tiermodelle

  C3H/HeJ mice

• Dosierungen

  50 mg/kg

• Verabreichung

  o.g.