Dovitinib (TKI258) Lactate monohydrate

Dovitinib hemmt stark das FGF-stimulierte Wachstum von WT- und F384L-FGFR3-exprimierenden B9-Zellen mit einem IC50 von 25 nM. Darüber hinaus hemmt Dovitinib die Proliferation von B9-Zellen, die jede der verschiedenen aktivierten Mutanten von FGFR3 exprimieren. Interessanterweise gibt es minimale Unterschiede in der Empfindlichkeit der verschiedenen FGFR3-Mutationen gegenüber Dovitinib, wobei der IC50 für jede der verschiedenen Mutationen zwischen 70 und 90 nM liegt. IL-6-abhängige B9-Zellen, die nur Vektor enthalten (B9-MINV-Zellen), sind resistent gegen die hemmende Aktivität von Dovitinib bei Konzentrationen bis zu 1 μM. Dovitinib hemmt die Zellproliferation von KMS11 (FGFR3-Y373C), OPM2 (FGFR3-K650E) und KMS18 (FGFR3-G384D) Zellen mit einem IC50 von 90 nM (KMS11 und OPM2) bzw. 550 nM. Dovitinib hemmt die FGF-vermittelte ERK1/2-Phosphorylierung und induziert Zytotoxizität in FGFR3-exprimierenden primären MM-Zellen. BMSCs verleihen einen moderaten Grad an Resistenz mit 44,6 % Wachstumshemmung für Zellen, die mit 500 nM Dovitinib behandelt und auf Stroma kultiviert wurden, verglichen mit 71,6 % Wachstumshemmung für Zellen, die ohne BMSCs kultiviert wurden. Dovitinib hemmt die Proliferation von M-NFS-60, einer M-CSF-Wachstums-getriebenen Maus-myeloblastischen Zelllinie mit einer medianen effektiven Konzentration (EC50) von 220 nM. [1] Die Behandlung von SK-HEP1-Zellen mit Dovitinib führt zu einer dosisabhängigen Reduktion der Zellzahl und einem G2/M-Phasenarrest mit Reduktion der G0/G1- und S-Phasen, Hemmung des Verankerungs-unabhängigen Wachstums und Blockierung der bFGF-induzierten Zellmotilität. Der IC50 für Dovitinib in SK-HEP1-Zellen beträgt ungefähr 1,7 μM. Dovitinib reduziert auch signifikant die basalen Phosphorylierungsspiegel von FGFR-1, FGFR-Substrat 2α (FRS2-α) und ERK1/2, aber nicht Akt in sowohl SK-HEP1- als auch 21-0208-Zellen. In 21-0208 HCC-Zellen hemmt Dovitinib signifikant die bFGF-induzierte Phosphorylierung von FGFR-1, FRS2-α, ERK1/2, aber nicht Akt. [2]

Dovitinib induziert in vivo sowohl zytostatische als auch zytotoxische Reaktionen, die zu einer Regression von FGFR3-exprimierenden Tumoren führen.[1] Dovitinib zeigt eine dosis- und expositionsabhängige Hemmung von Ziel-Rezeptor-Tyrosinkinasen (RTKs), die in Tumorzell-Xenografts exprimiert werden. Dovitinib hemmt stark das Tumorwachstum von sechs HCC-Linien. Die Hemmung der Angiogenese korrelierte mit der Inaktivierung der FGFR/PDGFRβ/VEGFR2-Signalwege. In einem orthotopen Modell hemmt Dovitinib stark das primäre Tumorwachstum und die Lungenmetastasierung und verlängerte signifikant das Überleben der Mäuse. [2] Die Verabreichung von Dovitinib führt zu einer signifikanten Hemmung des Tumorwachstums und zu Tumorregressionen, einschließlich großer, etablierter Tumoren (500-1.000 mm³). [3]

• In-vitro-Kinase-Assays

  Die hemmende Konzentration von 50 % (IC50)-Werte für die Hemmung von RTKs durch Dovitinib werden in einem zeitaufgelösten Fluoreszenz- (TRF) oder radioaktiven Format bestimmt, wobei die Hemmung der Phosphatübertragung auf ein Substrat durch das entsprechende Enzym durch Dovitinib gemessen wird. Die Kinasedomänen von FGFR3, FGFR1, PDGFRβ und VEGFR1-3 werden in 50 mM HEPES (N-2-Hydroxyethylpiperazin-N^'-2-ethansulfonsäure), pH 7,0, 2 mM MgCl₂, 10 mM MnCl₂, 1 mM NaF, 1 mM Dithiothreitol (DTT), 1 mg/mL Rinderserumalbumin (BSA), 0,25 μM biotinyliertem Peptidsubstrat (GGGGQDGKDYIVLPI) und 1 bis 30 μM Adenosintriphosphat (ATP) in Abhängigkeit von der K_m für das jeweilige Enzym getestet. Die ATP-Konzentrationen liegen bei oder knapp unter K_m. Für c-KIT- und FLT3-Reaktionen wird der pH-Wert auf 7,5 mit 0,2 bis 8 μM ATP in Gegenwart von 0,25 bis 1 μM biotinyliertem Peptidsubstrat (GGLFDDPSYVNVQNL) erhöht. Die Reaktionen werden 1 bis 4 Stunden bei Raumtemperatur inkubiert und das phosphorylierte Peptid auf Streptavidin-beschichteten Mikrotiterplatten, die Stoppreaktionspuffer (25 mM EDTA [Ethylendiamintetraessigsäure], 50 mM HEPES, pH 7,5) enthalten, eingefangen. Das phosphorylierte Peptid wird mit dem DELFIA TRF-System unter Verwendung eines Europium-markierten Antiphosphotyrosin-Antikörpers PT66 gemessen. Die Dovitinib-Konzentration für IC50 wird mittels nichtlinearer Regression mit der XL-Fit Datenanalysesoftware Version 4.1 (IDBS) berechnet. Die Hemmung der Kolonie-stimulierenden Faktor-1-Rezeptor (CSF-1R)-, PDGFRα-, Insulinrezeptor (InsR)- und Insulin-ähnlicher Wachstumsfaktor-Rezeptor 1 (IGFR1)-Kinaseaktivität wird bei ATP-Konzentrationen nahe der K_m für ATP bestimmt.

• Zelllinien

  B9 cells, MM cell lines

• Konzentrationen

  100 nM

• Inkubationszeit

  48-96 hours

• Methode

  Cell viability is assessed by 3-(4,5-dimethylthiazol)-2,5-diphenyl tetrazolium (MTT) dye absorbance. Cells are seeded in 96-well plates at a density of 5 × 10³ (B9 cells) or 2 × 10⁴ (MM cell lines) cells per well. Cells are incubated with 30 ng/mL aFGF and 100 μg/mL heparin or 1% IL-6 where indicated and increasing concentrations of Dovitinib. For each concentration of Dovitinib, 10 μL aliquots of drug or DMSO diluted in culture medium is added. For drug combination studies, cells are incubated with 0.5 μM dexamethasone, 100 nM Dovitinib, or both simultaneously where indicated. To evaluate the effect of Dovitinib on growth of MM cells adherent to BMSCs, 10⁴ KMS11 cells are cultured on BMSC-coated 96-well plates in the presence or absence of Dovitinib. Plates are incubated for 48 to 96 hours. For assessment of macrophage colony-stimulating factor (M-CSF)-mediated growth, 5 × 10³ M-NFS-60 cells/well are incubated with serial dilutions of Dovitinib with 10 ng/mL M-CSF and without granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF). After 72 hours cell viability is determined using Cell Titer-Glo Assay. Each experimental condition is performed in triplicate.

• Tiermodelle

  8-week-old female BNX mice bearing KMS11 cells

• Dosierungen

  10, 30, or 60 mg/kg

• Verabreichung

  p.o.