Dynasore

Dynasore wirkt als potenter Inhibitor endozytischer Signalwege, die bekanntermaßen von Dynamin abhängen, indem es die Bildung umhüllter Vesikel innerhalb von Sekunden nach seiner Zugabe blockiert. Während der Behandlung mit dieser Verbindung reichern sich zwei Arten von umhüllten Gruben-Intermediaten an: U-förmige, halb gebildete Gruben und O-förmige, vollständig gebildete Gruben, die beim Abschnüren erfasst werden. Diese Chemikalie hemmt in einer Konzentration von 80 μM auch die enzymatische Aktivität des mitochondrialen Dynamins Drp1. Sie blockiert stark die Aufnahme, den Transport und die intrazelluläre Akkumulation von Transferrin in HeLa-Zellen mit einer IC50 von ca. 15 μM. Sie verhindert auch die Endozytose von Low-Density-Lipoprotein und Cholera-Toxin. Diese Verbindung (80 μM) stört stark die Ausbreitung frisch plattierter Zellen und hemmt die Migration von BSC1-Zellen um etwa 50 %. [1]

Es blockiert die Endozytose in kultivierten hippocampalen Neuronen nach anhaltenden oder kurzen Aktionspotentialreizen vollständig und reversibel, mit voller Hemmung bei 80 μM und einer halbmaximalen Hemmung bei ca. 30 μM. In Anwesenheit dieses Inhibitors führt eine niederfrequente Stimulation zu einer anhaltenden Akkumulation von SynaptopHluorin und anderen vesikulären Proteinen an der Oberflächenmembran mit einer Rate, die aus der Nettoexozytose vorhergesagt wird, sowie zu einer Reduktion der Dichte synaptischer Vesikel und dem Vorhandensein endozytischer Strukturen nur an Synapsen. [2]

Es kann die Infektion menschlicher Epithelzellen HEK 293 mit humanem Papillomavirus Typ 16 und bovinem Papillomavirus Typ 1 Pseudovirionen mit gleicher IC50 von ca. 80 μM blockieren, was teilweise reversibel ist. [3]

• GTPase-Aktivitätstest

  Die GTPase-Aktivität wird unter Verwendung eines radiaktiven Holzkohle-basierten Assays gemessen. Die Proteine Dynamin, menschliches Drp1 werden in den angegebenen Konzentrationen in 10 mM Tris (pH 7,2), 2 mM MgCl₂ und 20 μM GTPγP³² (2000 dpm/pmol) allein oder, falls zutreffend, mit Lipid-Nanoröhren für die angegebenen Zeiten und Temperaturen inkubiert; die endgültige NaCl-Konzentration beträgt 150 mM NaCl für die Hochsalzbedingung und zwischen 10 und 20 mM für die Niedrigsalzbedingungen, abhängig von der Proteinkonzentration in der Stammlösung. Die GTP-Hydrolyse wird beendet, indem 10 μL Aliquots der Reaktion in eine 500 μL Suspension, die säuregewaschene Holzkohle enthält, überführt werden, gefolgt von einer 10-minütigen Zentrifugation (20000 × g, 4 ℃) und dem abschließenden Zählen des freigesetzten P³²O₄, das in 250 μL Überstand enthalten ist.

• Tiermodelle

  Female Sprague–Dawley rats

• Dosierungen

  1, 10, or 30 mg/kg

• Verabreichung

  i.p.