Datenblatt

Biologische Beschreibung

Spezifität	E.coli LPS Antibody [M15H2] detektiert spezifisch E.coli LPS.
Hintergrund	E. coli LPS (Lipopolysaccharid) stellt die primäre Strukturkomponente und ein potentes Endotoxin der äußeren Membran gramnegativer Bakterien dar, bestehend aus Lipid A, Kern-Oligosaccharid und O-Antigen, die zusammen die Membranintegrität aufrechterhalten und gleichzeitig als das stärkste bekannte immunostimulatorische Molekül dienen. Lipid A verankert sich als ein bis-phosphoryliertes β-1',6-Glucosamin-Disaccharid, das mit sechs Fettsäureketten acyliert ist und die toxische Einheit bildet, die vom TLR4-MD-2-CD14-Rezeptorkomplex des Wirts erkannt wird, während die Kernregion über Kdo-Heptose-Zucker, die geladene Phosphat-/Ethanolamin-Gruppen zur Membranstabilisierung tragen, verbunden ist und die hochvariable O-Antigen-Polysaccharidkette sich wiederholender Epitope Serotyp-Spezifität und Immunumgehung durch Phagozytose-/Komplementresistenz verleiht, wodurch eine "glatte" bakterielle Morphologie entsteht. LPS bildet eine essentielle Permeabilitätsbarriere, die vor Gallensalzen, Antibiotika und kationischen Peptiden schützt und gleichzeitig eine katastrophale angeborene Immunaktivierung über MyD88/TRIF-abhängige NF-κB- und IRF3-Signalwege auslöst, die massive TNF-α-, IL-1β-, IL-6-Zytokinstürme antreibt, die bei Gram-negativer Bakteriämie septischen Schock, disseminierte intravasale Koagulation und Multiorganversagen auslösen; chronische niedriggradige Endotoxämie durch Darmtranslokation trägt über anhaltende vaskuläre Entzündungen zu Arteriosklerose, neurodegenerativen Erkrankungen und metabolischem Syndrom bei, wodurch LPS sowohl ein unverzichtbares bakterielles Strukturelement als auch das gefährlichste mikrobielle Toxin der Menschheit ist.

Spezifität

E.coli LPS Antibody [M15H2] detektiert spezifisch E.coli LPS.

Hintergrund

E. coli LPS (Lipopolysaccharid) stellt die primäre Strukturkomponente und ein potentes Endotoxin der äußeren Membran gramnegativer Bakterien dar, bestehend aus Lipid A, Kern-Oligosaccharid und O-Antigen, die zusammen die Membranintegrität aufrechterhalten und gleichzeitig als das stärkste bekannte immunostimulatorische Molekül dienen. Lipid A verankert sich als ein bis-phosphoryliertes β-1',6-Glucosamin-Disaccharid, das mit sechs Fettsäureketten acyliert ist und die toxische Einheit bildet, die vom TLR4-MD-2-CD14-Rezeptorkomplex des Wirts erkannt wird, während die Kernregion über Kdo-Heptose-Zucker, die geladene Phosphat-/Ethanolamin-Gruppen zur Membranstabilisierung tragen, verbunden ist und die hochvariable O-Antigen-Polysaccharidkette sich wiederholender Epitope Serotyp-Spezifität und Immunumgehung durch Phagozytose-/Komplementresistenz verleiht, wodurch eine "glatte" bakterielle Morphologie entsteht. LPS bildet eine essentielle Permeabilitätsbarriere, die vor Gallensalzen, Antibiotika und kationischen Peptiden schützt und gleichzeitig eine katastrophale angeborene Immunaktivierung über MyD88/TRIF-abhängige NF-κB- und IRF3-Signalwege auslöst, die massive TNF-α-, IL-1β-, IL-6-Zytokinstürme antreibt, die bei Gram-negativer Bakteriämie septischen Schock, disseminierte intravasale Koagulation und Multiorganversagen auslösen; chronische niedriggradige Endotoxämie durch Darmtranslokation trägt über anhaltende vaskuläre Entzündungen zu Arteriosklerose, neurodegenerativen Erkrankungen und metabolischem Syndrom bei, wodurch LPS sowohl ein unverzichtbares bakterielles Strukturelement als auch das gefährlichste mikrobielle Toxin der Menschheit ist.

Nutzungsinformationen

Anwendung

IF, ELISA

Verdünnung

IF

1:200

Reaktivität

Escherichia coli

Quelle

Mouse Monoclonal Antibody

MW

Lagerpuffer

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

Lagerung
(Ab dem Datum des Erhalts)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

Experimentelle Methoden
IF	Experimental Protocol: Sample Preparation 1. Adherent Cells: Place a clean, sterile coverslip in a culture dish. Once the cells grow to near confluence as a monolayer, remove the coverslip for further use. 2. Suspension Cells: Seed the cells onto a clean, sterile slide coated with poly-L-lysine. 3. Frozen Sections: Allow the slide to thaw at room temperature. Wash it with pure water or PBS for 2 times, 3 minutes each time. 4. Paraffin Sections: Deparaffinization and rehydration. Wash the slide with pure water or PBS for 3 times, 3 minutes each time. Then perform antigen retrieval. Fixation 1. Fix the cell coverslips/spots or tissue sections at room temperature using a fixative such as 4% paraformaldehyde (4% PFA) for 10-15 minutes. 2. Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time. Permeabilization 1.Add a detergent such as 0.1–0.3% Triton X-100 to the sample and incubate at room temperature for 10–20 minutes. (Note: This step is only required for intracellular antigens. For antigens expressed on the cell membrane, this step is unnecessary.) Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time. Blocking Add blocking solution and incubate at room temperature for at least 1 hour. (Common blocking solutions include: serum from the same source as the secondary antibody, BSA, or goat serum.) Note: Ensure the sample remains moist during and after the blocking step to prevent drying, which can lead to high background. Immunofluorescence Staining (Day 1) 1. Remove the blocking solution and add the diluted primary antibody. 2. Incubate the sample in a humidified chamber at 4°C overnight. Immunofluorescence Staining (Day 2) 1. Remove the primary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time. 2. Add the diluted fluorescent secondary antibody and incubate in the dark at 4°C for 1–2 hours. 3. Remove the secondary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time. 4. Add diluted DAPI and incubate at room temperature in the dark for 5–10 minutes. 5. Wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time. Mounting 1. Mount the sample with an anti-fade mounting medium. 2. Allow the slide to dry at room temperature overnight in the dark. 3. Store the slide in a slide storage box at 4°C, protected from light.

Experimentelle Methoden

IF

Experimental Protocol:

Sample Preparation

1. Adherent Cells: Place a clean, sterile coverslip in a culture dish. Once the cells grow to near confluence as a monolayer, remove the coverslip for further use.

2. Suspension Cells: Seed the cells onto a clean, sterile slide coated with poly-L-lysine.

3. Frozen Sections: Allow the slide to thaw at room temperature. Wash it with pure water or PBS for 2 times, 3 minutes each time.

4. Paraffin Sections: Deparaffinization and rehydration. Wash the slide with pure water or PBS for 3 times, 3 minutes each time. Then perform antigen retrieval.

Fixation

1. Fix the cell coverslips/spots or tissue sections at room temperature using a fixative such as 4% paraformaldehyde (4% PFA) for 10-15 minutes.

2. Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.

Permeabilization

1.Add a detergent such as 0.1–0.3% Triton X-100 to the sample and incubate at room temperature for 10–20 minutes.

(Note: This step is only required for intracellular antigens. For antigens expressed on the cell membrane, this step is unnecessary.)

Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.

Blocking

Add blocking solution and incubate at room temperature for at least 1 hour. (Common blocking solutions include: serum from the same source as the secondary antibody, BSA, or goat serum.)

Note: Ensure the sample remains moist during and after the blocking step to prevent drying, which can lead to high background.

Immunofluorescence Staining (Day 1)

1. Remove the blocking solution and add the diluted primary antibody.

2. Incubate the sample in a humidified chamber at 4°C overnight.

Immunofluorescence Staining (Day 2)

1. Remove the primary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.

2. Add the diluted fluorescent secondary antibody and incubate in the dark at 4°C for 1–2 hours.

3. Remove the secondary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.

4. Add diluted DAPI and incubate at room temperature in the dark for 5–10 minutes.

5. Wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.

Mounting

1. Mount the sample with an anti-fade mounting medium.

2. Allow the slide to dry at room temperature overnight in the dark.

3. Store the slide in a slide storage box at 4°C, protected from light.

Referenzen

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23372159/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30066669/

E.coli LPS Antibody [M15H2]

Biologische Beschreibung

Nutzungsinformationen

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Anwendungsdaten