EI1

Katalog-Nr.S7611 Charge:S761101

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Technische Daten

Formel

C23H26N4O2
Molekulargewicht 390.48 CAS-Nr. 1418308-27-6
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 42 mg/mL (107.55 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.

 0.260mg/ml (0.67mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 5.2 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.

 0.260mg/ml (0.67mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 5.2 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung EI1 ist ein potenter und selektiver EZH2-Inhibitor mit einer IC50 von 15 nM und 13 nM für EZH2 (WT) bzw. EZH2 (Y641F).
Ziele
EZH2 (Y641F)
(Cell-free assay)		 Ezh2 (wild-type)
(Cell-free assay)
13 nM 15 nM
In vitro In DLBCL-Zellen hemmt EI1 die zelluläre H3K27-Methylierung und aktiviert die Expression des Ezh2-Zielgens p16. In murinen embryonalen Fibroblasten hemmt diese Verbindung auch H3K27me3 und die Zellproliferation. Darüber hinaus hemmt es selektiv das Wachstum von DLBCL-Zellen, die eine Ezh2-Mutation tragen, und verursacht Zellzyklusarrest und Apoptose.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • Biochemischer Assay

    Zur Bestimmung der IC50 wird EI1 dreifach in DMSO seriell verdünnt, um insgesamt 12 Konzentrationen zu erhalten, wobei die Startkonzentration 1 μM beträgt. Die Reaktion wird 120 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert und durch Zugabe einer Quenchlösung (2,5 % TFA mit 320 nM d4-SAH) gestoppt. Die SAH-Produktion wird unter Verwendung eines API 4000 Triple-Quadrupol-Massenspektrometers mit Turbulon Spray, gekoppelt mit Prominence UFLC, quantifiziert. Der Prozentsatz der Hemmung wird unter Verwendung von positiven (ohne Inhibitor) und negativen (ohne Enzym) Kontrollen normalisiert und die IC50 mit PRISM berechnet. Enzymologie-Studien zur S-Adenosylmethionin (SAM)-Konkurrenz werden mit leichter Modifikation der Reaktionsbedingungen durchgeführt: 10 μM dieser Verbindung werden als Startdosis für die serielle Verdünnung verwendet. SAM wird über einen Bereich zwischen 1 μM und 50 μM (entsprechend 1 × Km und 50 × Km) titriert, und das Substratpeptid ist in der endgültigen Reaktionsmischung in seiner gesättigten Bedingung (10 μM) vorhanden. Für das Histone Methyltransferase (HMT)-Profiling in Tabelle 1 sind alle HMTs gereinigte rekombinante Proteine aus Escherichia coli oder dem Baculovirus-System. Die katalytische Domäne von G9a, SuV39H2, Set7/9, CARM1, SETD8, NSD3, SETD2 und Dot1L sowie das vollständige SmyD2-Protein wurden in den biochemischen Assays verwendet. HMT-biochemische Reaktionen werden sorgfältig mit Enzymologie-Studien charakterisiert und die SAM- und Substrat-Km bestimmt. Die SAM- und Substratkonzentrationen werden für die meisten HMTs bei ihren jeweiligen Km gehalten, außer bei denen (SmyD2 und Set7/9) mit einem niedrigen SAM-Km-Wert, für die 0,5 μM SAM verwendet wird. Alle HMT-Reaktionen werden im selben Assay-Format durchgeführt, wobei die SAH-Produktion aus der biochemischen Reaktion mittels LC-MS quantifiziert wird.
Zell-Assay:[1]
  • Zelllinien

    Ezh2 mutant DLBCL cells (WSU-DLCL2, SU-DHL6, Karpas422, DB, and SU-DHL4), Ezh2 wild-type DLBCL cells (OCI-LY19 and GA10), and Mouse embryonic fibroblasts (MEFs)

  • Konzentrationen

    ~10 μM

  • Inkubationszeit

    11-15 days

  • Methode

    Exponentially growing diffused large B-cell lymphoma (DLBCL) cells are seeded in 12-well plates at a density of 1 × 105 cells/mL with the indicated concentration of EI1. Viable cell number is determined every 3–4 d for up to 14 or 15 d by Vi-CELL. Mouse embryonic fibroblasts (MEFs) are seeded in a six-well plate at 2.5 × 104 cell/mL and treated with this compound (3.3 μM) or 4-OH-tamoxifen (100 nM). Viable cell number is determined at days 3, 6 and 11. On days of cell counts, fresh growth medium and this chemical are replenished and cells split back to a density of 1 × 105 cells/mL. Total cell number is expressed as split-adjusted viable cells per milliliter. IC50 is calculated by PRISM and all proliferation experiments are repeated more than two times and representative data are presented.

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23236167/

Kundenproduktvalidierung

<p>EZH2 inhibitors EI1 or GSK343 are applied in MDA-MB-231 breast cancer cells with NBAT1 over-expression. The invasion suppression effects of NBAT1 was reversed by concomitant EZH2 inhibitors.</p>

, , Oncotarget, 2015, 6(32):32410-25.

<p>qRT-PCR analysis for LIMK2b in H446DDP, H69AR cells inhibited EZH2 with EI1 or GSK343 or transfected with siRNA targeting EZH2 (si-NC, si-EZH2 1* and si-EZH2 2*)</p>

, , Mol Cancer, 2017, 16(1):5

NBAT1 inhibits invasion of breast cancer cells via EZH2. a. Binding of NBAT1 to EZH2 complex in MDA-MB-231 cells, shown by RNA immunoprecipitation followed qRT-PCR (mean±SD, n=3, *** p < 0.001 versus lgG). b. Representative images of Boyden chamber assay for invaded cells. (Over-expression NBAT1 while inhibit EZH2 with EI1 or GSK343 in MDA-MB-231.) c. Histogram showing that the number of invaded cells with inhibited EZH2 was significantly higher than for DMSO, and similar to control groups (untreated, mock and vector, mean±SD, n=3, *** P < 0.001). d., e., qRT-PCR and western blot analysis for DKK1 in NBAT1-knockdown MCF7 cells inhibited EZH2 with EI1 or GSK343 or transfected with siRNA targeting EZH2 (NC, siEZH2-1 and siEZH2-2).

Daten von [ , , Oncotarget, 2015, 6(32): 32410-32425. ]

Sellecks EI1 Wurde zitiert von 6 Publikationen

Genetic and epigenetic characterization of sarcoma stem cells across subtypes identifies EZH2 as a therapeutic target [ NPJ Precis Oncol, 2025, 9(1):7] PubMed: 39789291
Epigenetic Reprogramming with Antisense Oligonucleotides Enhances the Effectiveness of Androgen Receptor Inhibition in Castration-Resistant Prostate Cancer [ Cancer Res, 2018, 78(20):5731-5740] PubMed: 30135193
Epigenetic drift of H3K27me3 in aging links glycolysis to healthy longevity in Drosophila [ Elife, 2018, 7e35368] PubMed: 29809154
Long non-coding RNA TUG1 is involved in cell growth and chemoresistance of small cell lung cancer by regulating LIMK2b via EZH2. [Niu Y, et al. Mol Cancer, 2017, 10.1186/s12943-016-0575-6] PubMed: 28069000
The Human Immunodeficiency Virus 1 ASP RNA promotes viral latency by recruiting the Polycomb Repressor Complex 2 and promoting nucleosome assembly. [ Virology, 2017, 506:34-44] PubMed: 28340355
NBAT1 suppresses breast cancer metastasis by regulating DKK1 via PRC2 [Hu P, et al. Oncotarget, 2015, 6(32):32410-25] PubMed: 26378045

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